Manual de prctica de Microbiologa en formato Digital

Maestra Altagracia Jimnez Daz

Manual de prctica de Microbiologa en formato Digital

ndice:
Algunos equipos utilizados en microbiologa Morfologa y disposicin de las clulas bacterianas Distribucin de microorganismos en el ambiente Medios de cultivo Mtodos de siembra Las coloraciones Accin de las bacterias sobre los hidratos de carbono Accin de las bacterias sobre las protenas Hemlisis Pigmentos Prueba de sensibilidad a los antimicrobianos. Estudio bacteriolgico del agua y otros lquidos de consumo

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Manual de prctica de Microbiologa Digital

Objetivo: Apropiar al estudiante que se inicia en el campo de la microbiologa del conocimiento, en tcnicas bacteriolgicas.

07/06/2012 Altagracia Jimenez Diaz MA 3

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Equipos del Laboratorio de Microbiologa

Asas y agujas bacteriolgicas Placas de Petri. Porta objetos. Incubadora. Autoclave. Microscopio Mechero Nevera Tubo de ensayo

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Frasco de la Vela

Se utiliza para Crear la atmsfera para microorganismos microaerofilicos. Se obtiene un ambiente de baja tensin de oxigeno y de 10 12 % de Co2
La vela no debe colocarse sobre los medios de cultivo sino al lado, dentro de el frasco.
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Placa de Petri.

Las placas de Petri son: recipientes de vidrio, plstico u otros materiales constituidos por dos piezas; una tapa y una base, la base descansa sobre la tapa y se utilizan para colocar los medios de cultivo slidos y se logra el desarrollo de cultivos en amplia superficie y facilitar el conteo de las colonias.
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Jarra de Gas Pak

Se utiliza para Crear la atmsfera para microorganismos anaerobios.

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Porta Objetos

Se utiliza para preparar los frotis

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Asas y agujas

Se utilizan para pescar transportar y sembrar el material bacteriolgico Se esterilizan en el mechero al rojo vivo antes y despus de las siembras bacteriolgicas.
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Tubos de ensayo

El tapn de los tubos se sostiene con el dedo meique.

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Microscopio

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Autoclave

Autoclave: utiliza vapor de agua a 121 C durante 15'o 20'. Esta temperatura se logra si se obtiene una presin de una atmsfera relativa (dos atmsferas absolutas o sea 15 libras de presin por pulgadas al cuadrado), ya que el aumento de la presin provoca aumentos proporcionales en el punto de ebullicin del agua. Es el mecanismo de destruccin microbiana ms efectivo, y bien utilizado asegura esterilizacin.(Destruye la forma de vida vegetativa y esporulada)
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AUTOCLAVE

Se utiliza para esterilizar y funciona a 121c 15 libras de presion por pulgadas cuadradas en un tiempo de 15 a 20 minutos.

Incubadora

Se utiliza para proporcionar la temperatura optima a las bacterias.

Contador de colonias.

Se utiliza para el conteo de colonias.

Mechero de bunsen

Utensilio metlico que permite calentar sustancias. Presentan una base, un tubo, una chimenea, un collarn y un vstago. Con ayuda del collarn se regula la entrada de aire. Para lograr calentamiento adecuados hay que regular la flama del mechero a modo tal que sta se observe bien oxigenada (flama azul).

Nevera

Se utiliza para conservar a una temperatura adecuada los medios de cultivos y cepas bacterianas.

Nevera: laboratorio de microbiologa

Microscopia Morfologa de las bacterias

MORFOLOGIA Y DISPOSICIN DE LAS CELULAS BACTERIANAS Se da una gran variedad de tamaos y forma entre las bacterias. La mayora de ellas oscilan entre 0,2 y 2,0 m de dimetro y presentan una de las tres morfologas bsicas siguientes: La esfrica o de coco (que significa baya), la de bastoncillo o bacilo y la espiral.

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Cocos

Los cocos suelen ser esfricos, pero pueden ser ovalados, alargados o con un lado aplanado. Cuando los cocos se dividen para reproducirse pueden permanecer unidos uno a otro. Los cocos que permanecen en parejas tras dividirse se llaman Diplococos.

Aquellos que se dividen en dos planos y forman grupos de cuatro se conocen como Ttradas .

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Cocos

Los que se dividen por tres planos regulares y quedan divididos en grupos cbicos de ocho se llaman Sarcinas

Aquellos que se dividen siguiendo planos al azar y forman clulas en paquetes irregulares son los: Estafilococos
y si se presentan en cadenas se denominan Estreptococos.
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Disposicin de los cocos

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Bacilos

Disposicin de los bacilos: Los Diplobacilos aparecen en parejas tras la divisin Los Estreptobacilos se presentan en cadenas. Existen an otros que son ovalados y se parecen tanto a los cocos que se llaman Cocobacilos Bacilos en letras chinas Bacilos en palizada Sin embargo, la mayora de los bacilos se presentan de forma aislada.

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Disposicin de los bacilos

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Bacterias espirales

Las bacterias espirales pueden tener una o ms vueltas; nunca aparecen rectas. Los bacilos curvados en forma de coma se denominan vibrios . Otros, llamados Espirilos, poseen una morfologa helicoidal caracterstica, que recuerda un sacacorchos, con un cuerpo celular bastante rgido . Hay an otro grupo de bacterias espirales llamadas Espiroquetas.

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Bacterias en Espiral

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Hongos levaduriforme Levaduras

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Hongo filamentoso

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Hongo filamentoso

Colonia

Colonia agrupacin de microorganismos de una misma especie. Caractersticas macroscpica de las colonias: Olor: del cultivo puede ser agradable o desagradable; fetal o frutal, amoniacal, nauseabundo Tamao: Grande mediano, pequeo, pequesima. Aspecto: Opaco, brilloso, transparente, rugoso, algodonoso, aterciopelado.
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Estudio Macroscpico de las colonias

Color: Amarillo, rojizo, blanco, cremas Forma: Redonda, alargada, irregular Bordes. Dentados festoneado filiforme, liso Altura: Plana, elevada, cncava, convexa Tipo de cultivo: Puro, mixto y contaminado Puro: Esta formado por un solo tipo de microorganismo (Para estudiar las propiedades de un organismo dado es necesario manejarlo en un cultivo puro) Mixto: Es la presencia de dos o mas especies de microorganismo en el cultivo

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Cultivo contaminado

Contaminado: es cuando aparece un germen extrao fuera de la lnea de siembra. Cantidad de crecimiento del cultivo: Abundante, abundantisimo, escaso, y muy escaso

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Esquema de colonias con su: forma,margen y elevacin

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Colonias

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Consistencia de la Colonia: para determinar la consistencia debes usar una asa estril, y tocarla cuidadosamente.

Las colonias pueden ser: duras, viscosas, mucosas, secas, muy secas, cremosas, etc. En general, al mayor parte de las bacterias forman colonias de consistencia ms o menos cremosa, aunque existen muchas excepciones

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Cultivo mixto

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Medios de cultivo

Los medios de cultivo son una mezcla equilibrada de nutrientes que en concentraciones adecuadas y con condiciones fsicas ptimas permiten un buen crecimiento de los microorganismos. Contienen una base mineral; fuente de carbono, nitrgeno y azufre Formula bsica de los medios de cultivos: agua cloruro de sodio, peptona. Extractos de carne o de levadura. El agar no se utiliza como nutriente solo para darle solidez a los medios de cultivos Para el crecimiento de las bacterias hay que proporcionarles: los medios de cultivos apropiados la temperatura optima y la atmsfera requerida

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Clasificacin

Medios de cultivos vivos o animado y medios de cultivos muertos o inanimado De acuerdo a su consistencia o estado fsico. Liquido: ejemplo caldo simple Semi-solid: Agar semi slido Slido: Agar base El Liquido, Semi-solid, Slido depende de la cantidad del agar que contengan los medios El agar no participa como nutriente (solo le proporciona solides a los medios de cultivos. De acuerdo a su uso o finalidad: simple, enriquecidos, selectivos, diferenciales y especiales.

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Medios de cultivos

Medio enriquecido: medio al que se le aaden nutrientes extra y se utiliza para microorganismos que tienen exigencias nutricionales. Agar sangre, Agar chocolate, agar cerebro-corazn, etc.

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Medios de cultivos

Medio selectivo: medio que slo permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhibe el de otros. Permite seleccionar y aislar microorganismos a partir de poblaciones mixtas

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Medio diferencial
Medio diferencial: medio que permite revelar caractersticas fisiolgicas de los microorganismos. Mac conkey: Cuando el microorganismo utiliza el azcar lactosa se observan colonias rosadas. cuando las bacterias no utiliza la lactosa se observan colonias claras o transparentes. EAM: en este medio la E coli se observa con brillo verde metlico.

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Medios de cultivos

Medio sinttico: son los medios que contienen una composicin qumica definida cuali y cuantitativamente. Se utilizan para el estudio de requerimientos nutricionales y para obtener resultados reproducibles. Medio simple: son los medios que presentan la mnima cantidad de nutrientes capaz de permitir el desarrollo de los microorganismos no exigentes, contienen la formula bsica de los medios de cultivo.

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Caldo Lactosado Bilis Verde Brillante:

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Caldo Lactosado Bilis Verde Brillante: se utiliza en el tubo de Durham. Si las bacterias fermentan la lactosa aparece gas en el tubo invertido (gas +) Esta reaccin es producida por el grupo coliforme. O colibacilos. Si no es fermentada la lactosa presenta (gas -). Este medio de cultivo es selectivo para bacterias gram. negativas. El verde brillante y la bilis inhiben el crecimiento de bacterias Gram. positivas.

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Agar sangre: contiene sangre de carnero desfibrinada al 5 % Es un medio enriquecido.

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Medio de Mac Conkey:

Contiene el azcar lactosa y un indicador que es el rojo neutro, este medio es selectivo para microorganismos Gram. negativos. Si la lactosa es fermentada las colonias se observaran de color rosado Si no las colonias se observaran transparentes.
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Eosina Azul de metileno

Es un medio selectivo y diferencial Es selectivo para bacterias Gram. Negativas La E. coli crece con brillo verde metlico

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Manitol salado:

Es un medio utilizado para los Estafilococos. El indicador de PH es rojo fenol. Si el microorganismo fermenta el manitol se tornar el medio amarillo. Si no lo fermenta, se tornar color rojo cereza. Es fermentado por el S. aureus.

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Mtodos de Siembra
Sembrar una bacteria es el acto de colocarla en un medio de cultivo apropiado para promover su crecimiento y desarrollo Para desarrollar una bacteria invitro hay que proporcionarle : 1-Nutrientes con los medios de cultivos que requieran. 2-La atmsfera apropiada 3- La temperatura optima, entre otros. El resultado de la siembra es el cultivo

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Mtodos de Siembra
Medio: Lquidos o caldos Instrumento: Asa Mtodo: Dilucin Finalidad: poner la bacteria en suspensin

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Mtodos de Siembra
Medio: Semislido Instrumento: Aguja Mtodo: Puncin o Picadura Finalidad: observar la Movilidad.

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Si crece en la lnea de siembra es inmvil. Si crece fuera de la lnea de siembra es mvil

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Mtodos de Siembra
Medio: Slido en tubo Inclinado. Instrumento: Asa o aguja Mtodo: Estra en superficie

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Mtodos de Siembra
Medio de cultivo: TSI Mtodo: Puncin y estras en superficie. Instrumento: Aguja Finalidad:
Observar los reacciones (cambios) que ocurren en la superficie y la Profundidad.
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Interpretacin: Lectura de TSI

Amarillo (A): cido (ferment el azcar) *Rojo (K): alcalino (no ferment el azcar) *Negro: presencia de H2S (H2S+) *Burbujas o vacos, con levantamiento del medio: presencia de H2 + CO2 H2 + CO2+ Precipitado negro = H2S
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Mtodos de Siembra
Medio: Slido en placa de Petri Mtodo: Estras por Agotamiento. Instrumento: Asa Finalidad: Aislar colonias
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Mtodos de Siembra
Medio: Slido en placa de Petri Mtodo: Embadurnamiento Instrumento: Hisopo Finalidad: Obtener colonias confluentes.

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Pasos previos a toda coloracin

Hacer un frotis dejar secar y fijar. Frotis: Dispersar el material bacteriolgico en un porta objetos Secar: Dejar expuesto al aire Fijar: pasar tres veces por el calor del la llama del mechero ( para evitar que se desprenda durante los lavados). Tambin se puede utilizar licor de Hoffman.
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Frotis: Dispersar el material bacteriolgico en un porta objetos

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Preparacin de un frotis
Sobre un portaobjetos de vidrio, limpio y seco, se coloca una gota del material bacteriolgico que se va a teir (si es lquido) y se extiende o dispersa sobre el porta objetos. Si es de un medio de cultivo slido, se coloca una gota de diluyente y el material bacteriolgico se homogeniza y se dispersa en el porta objeto. Si es directo de la muestra se hace rodar el hisopo con que se tom la muestra en el porta objeto.
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Preparacin de un frotis

El material se frota directamente sobre el portaobjetos, donde puede visualizarse con facilidad ( de los cultivos en los medios lquidos) El material colocado en el portaobjetos se deja secar al aire. Y se fija al calor del mechero.
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Las coloraciones

Los colorantes son sustancias capaces de ceder o transmitir su color a otras. Los colorantes pueden ser segn su estructura qumica : 1-cidos, bsicos y neutros Colorantes cidos son los que la propiedad colorante radica en el ion con carga negativa, por lo que se llaman aninicos En los bsicos ,por el contrario , el Ion coloreado es el positivo , siendo llamado cationico. Los colorantes neutros son una sales complejas de un colorante cido y un bsico

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Los colorantes

De acuerdo con la estructura molecular, existen en cada colorante dos grupos qumicamente activos: el grupo auxocromico, que le da a la molcula su habilidad para reaccionar con el sustrato correspondiente, y el grupo cromforo ( ion coloreado) que es el lugar donde se verifica la absorcin o no de las distintas longitudes de ondas luminosa en la produccin del color. El proceso de coloracin de las bacterias es un intercambio inico entre estas y el colorante

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Las clulas bacteriana se pueden observar con el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la clula y el medio que la rodea, y el medio ms simple de aumentar el contraste, es la utilizacin de colorantes. Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de clulas o para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, tales como flagelos esporas, cpsulas, paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc.

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Las clulas generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teirlas, proceso llamado fijacin. Para bacterias, la fijacin por el calor es lo ms corriente, aunque tambin puede fijarse con sustancias qumicas como formaldehdo, cidos y alcoholes. Despus de la fijacin, si se aade el colorante, no se producen ulteriores cambios estructurales en el protoplasma.

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La fijacin se realiza habitualmente en clulas que han sido fijadas sobre un portaobjetos, tratando despus ste con el agente fijador, y siguiendo inmediatamente el proceso de tincin. La fijacin produce habitualmente el encogimiento de las clulas; la tincin, por el contrario, hace que las clulas aparezcan mas grande que como son realmente, de manera que las medidas de las clulas que han sido fijadas o teidas no pueden realizarse con mucha precisin.
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Los colorantes

La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad especfica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son molculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los cidos nucleicos y los polisacridos cidos. Ejemplos de colorantes catinicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son molculas cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas protenas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina cida y el rojo Congo

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Los colorantes

Algunos colorantes teirn mejor slo despus de que la clula haya sido tratada con otra sustancia qumica, que no es un colorante por s mismo. Esta sustancia se denomina mordiente; un mordiente habitual es el cido tnico, el lugol. El mordiente se combina con un constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora s podr reaccionar con el colorante.
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La tincin negativa

Es el reverso del procedimiento de tincin usual: la cpsula se dejan sin teir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las clulas. La sustancia utilizada para la tincin negativa es un material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las clulas, tal como la tinta china (que es una suspensin de partculas de carbono coloidal) o la nigrosina (un colorante negro insoluble en agua). La tincin negativa es un modo satisfactorio de aumentar el contraste de las clulas en la microscopia ptica, pero su mxima utilidad est en revelar la presencia de cpsulas alrededor de las clulas bacterianas.
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Coloracin de Gram
Ideada en 1884 por Hans Christian Joachim Gram (1853-1938), un mdico dans con estudios en bacteriologa y farmacologa.

La coloracin de Gram. tiene inters taxonmico ya que divide las bacterias en dos grandes grupos, bacterias Gram positivas que se tien de morado y bacterias gram negativas que se tien de rojo La coloracin de Gram es positiva compuesta y diferencial.

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Coloracin de Gram

La tcnica revela diferencias constitutivas de la pared celular entre bacterias Gram positivas y Gram negativas. La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglicano, la cul impide que escape el complejo cristal violetalugol. Por el contrario, la capa de peptidoglicano de las Gram negativas es delgada y se encuentra unida a una membrana externa lipdica, susceptible a la decoloracin con el alcohol-acetona, el que acta como un solvente orgnico. Los lpidos se disgregan con el alcohol acetona y el decolorante penetra a la clula bacteriana decolorndola.
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Pared celular de las bacterias Gram positivas:

El peptidoglicano se dispone en varias capas lo que le otorga grosor a la pared. Atraviesan el peptidoglicano polisacridos cidos, denominados cidos teicoicos. Los cidos teicoicos son de dos clases: poliglicerol fosfato y poliribitol fosfato. Las funciones primarias de estos polmeros son la estabilizacin del peptidoglicano y la captura de Mg++.
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Pared celular en bacterias Gram negativas

Su pared celular es ms delgada, pero ms compleja que la de los Gram positivas. El peptidoglicano se dispone en una sola capa, pero por fuera de ella se encuentra una segunda membrana denominada membrana externa. La membrana externa es una membrana asimtrica, porque si bien la monocapa interna est formada por fosfolpidos, la monocapa exterior est formada por un tipo especial de lpido, denominado lipopolisacrido (LPS).

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Pared celular en bacterias Gram negativas

El LPS es una molcula que contiene tres regiones diferentes: el lpido A, el core y el antgeno O. El LPS constituye una endotoxina, que se libera cuando la bacteria se divide o muere. Es un potente estimulador de los macrfagos, lo que causa la activa liberacin de citoquinas, responsables de las manifestaciones clnicas de las infecciones por bacterias Gram negativas y que varan desde una fiebre hasta el shock sptico. En esta membrana externa se encuentran las porinas.

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Entre la membrana externa y la membrana celular se crea un compartimiento virtual, llamado espacio periplsmico. El espacio periplsmico es una matriz que incluye al peptidoglicano, enzimas, protenas captadoras de nutrientes y sustancias de secrecin. La membrana externa contiene numerosas protenas, siendo las porinas las ms abundantes. Se denominan as, porque forman poros que comunican el exterior con el espacio periplsmico.
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Pared celular en bacterias Gram negativas

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Pared celular en bacterias Gram negativas

La membrana externa de las bacterias Gram negativas poseen porinas que son canales cargados de agua y que permiten la entrada y salida de sustancias de la clula al exterior y del interior de la clula.

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Coloracin de Gram.
Protocolo Hacer un frotis Dejar secar al aire Fijar la muestra con calor a la llama de una lmpara de alcohol o con el licor de Hoffman.

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Coloracin de Gram.

Cristal violeta El lugol entra en las clulas y forma un complejo insoluble con el cristal violeta. La mezcla de alcohol-acetona sirve para realizar la decoloracin. Las bacterias Gram. positivas no se decoloran, mientras que los Gram. negativas s lo hacen. Para poner de manifiesto las bacterias Gram. negativas se utiliza una coloracin de contraste de color rojo; safranina. Despus de la coloracin de contraste las clulas Gram. negativas se observan de color rojo, mientras que las Gram. positivas se observan de color Morado.
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Interpretacin
Gram negativas Gram positivas

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Tincin Bacteriolgica de Gram.

El equipo para realizar la tincin de Gram. consta de: Colorantes y reactivos : Cristal Violeta, YodoLugol y Safranina. Solvente: Alcohol-Cetona. Bandeja de tincin. Asa bacteriolgica o hisopo. Frasco lavador. Muestra bacteriana slida (agar), lquida (caldo) o espcimen clnico.
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Coloracin de Gram. Paso 1.

Paso 1.- Cubrir la preparacin con Cristal Violeta por 60 seg. y lavar suavemente con agua.

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Coloracin de Gram.

Paso 2.- Cubrir la preparacin con Yodo-Lugol por 60 seg y lavar suavemente con agua.

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Altagracia Jimenez Diaz MA

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Coloracin de Gram.

Paso 3.- Cubrir la preparacin con Alcohol-Cetona durante algunos segundos (5-10) y lavar suavemente con agua.

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Altagracia Jimenez Diaz MA

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Coloracin de Gram.

Paso 4.- Cubrir la preparacin con Safranina por 60 seg y lavar suavemente con agua. Secar y Observar con lente de 100x (inmersin).
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Altagracia Jimenez Diaz MA

Coloracin de Gram. preparndonos para la observacin al microscopio

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Resultados de la coloracin de Gram. Bacterias teidas de morado: Gram positivas Teidas de rojo: Gram negativas Podemos observarle la forma, la disposicin y la propiedad tintorial.

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Coloracin de Ziehl Neelsen

La coloracin de Ziehl Neelsen al igual que la de Gram es positiva, compuesta y diferencial. Reactivos: fucsina bsica fenicada - solucin de alcohol-cido (3% de HCl en etanol de 95) - azul de metileno Esta tincin permite diferenciar a los microorganismos que son cido alcohol resistentes, de color rojo, de los que no lo son, de color azul. Se utiliza en la identificacin de mycobacterias.

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Ziehl Neelsen
La coloracin cido-resistente es otra coloracin muy usada para el examen microscpico de las mycobacterias, y las nocardias. Debido al crecimiento lento de la mayora de las mycobacterias, los extendidos para identificar bacilos alcohol-cido resistente juegan un papel importante en el diagnstico temprano de la infeccin por mycobacterias. El mtodo clsico de coloracin cido-resistente es el descubierto por Ziehl y Neelsen en el ao 1882 y ampliamente usado hasta la fecha para el diagnstico de Mycobacterium Tuberculosis y Mycobacterium leprae.

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Es una coloracin especfica para colorear bacterias cuyas paredes celulares contienen largas cadenas de cidos grasos. Por su alto contenido de acido micolico (cera no saponificable) tienen la capacidad de unir el colorante fucsina a su pared de manera que hacen a la clula resistente a la decoloracin con alcohol cido. Son bacilos cido-alcohol resistente (BAAR), las mycobacterias, y las nocardias.
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Coloracin de Ziehl Neelsen

REALIZACIN Preparar un frotis bacteriano. Se deja secar al aire y se fija al calor. Cubrir la preparacin con carbofucsina. Calentar la preparacin con una lmpara de alcohol durante 5 min. No debe hervir. Si se evapora, se aade ms carbofucsina para que no se seque en ningn momento. Lavar con agua el resto de colorante. Decolorar con la mezcla alcohol-cido por tres minutos Lavar con agua . Teir con azul de metileno 1 min. Lavar con agua el resto de colorante. Secar la preparacin. Examinar al microscopio.

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Resultados de la coloracin de Ziehl Neelsen

BAAR

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Resultados de la coloracin de Ziehl Neelsen

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Altagracia Jimenez Diaz MA

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Coloracin de Cpsula

La tinta china o la nigrosina dan un fondo oscuro sobre el cual la cpsula de terminados microorganismos como el Cryptococcus neoformans se observar como un halo claro alrededor del microorganismo.

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Coloracin de Cpsula

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Mtodo con tinta china (Mtodo de Gin) Tcnica Colocar unas gota de la sol. De dextrosa en un tubo. Tomar una pequea cantidad del material bacteriolgico del cultivo y mezclar con las gotas de dextrosa. Colocar una gota de tinta china en un porta objetos y aadir una gota de la mezclar anterior y con el extremo de un portaobjetos , hacer un frotis delgado y secar al aire, fijar con alcohol metlico por un minuto. Teir por 2 minutos con Cristal violeta. Lavar con abundante agua, secar y observar al microscopio.

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Coloracin de Cpsula Resultado

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LAS EXIGENCIAS RESPIRATORIAS (Respiracin Fermentacin)

El termino respiracin se refiere a todas las reacciones que ocurren dentro de las clulas de liberacin de energa (oxidaciones)
Es posible hacer una distincin entre las oxidaciones que utilizan oxigeno molecular y aquella que no lo hacen como sigue: Respiracin es la oxidacin que utiliza oxigeno molecular como aceptor primario de hidrogeno AEROBIA y la oxidacin que tiene lugar en ausencia de oxigeno molecular ANAEROBIA.

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LAS EXIGENCIAS RESPIRATORIAS

La respiracin y la fermentacin son los dos mecanismos de que dispone la clula viva para proveerse de energa; ambos llevan a cabo la oxidacin del sustrato.

La condicin de aerobio o anaerobio puede ser estricta. Es decir ser una necesidad especifica, en tal caso recibe el nombre de anaerobio obligatorioas o aerobios obligatorios, posiblemente este ultimo grupo posee enzimas esenciales, las cuales funcionan nicamente en el estado reducido y son particularmente sensibles a la inactivacin del oxigeno.

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LAS EXIGENCIAS RESPIRATORIAS

Otras son facultativas y son capaces de vivir aerbica o anaerobicamente. Microaerofilicos : han sido llamados aquellos organismos que requieren oxigeno libre en menor concentracin que la existente en la atmsfera. Medio de cultivo para el estudio de la respiracin bacteriana es el Caldo de Thioglicolato

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Tipos de respiracin bacteriana

Aerobia: crece en la superficie del tubo Anaerobia: crece en la profundidad del tubo de caldo de thioglicolato de sodio Microaerofilica:crece debajo de la zona oxigenada del tubo de caldo de thioglicolato de sodio Facultativa: crece en todo el tubo de caldo de thioglicolato de sodio

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La respiracin bacteriana
Medio de cultivo Caldo de thioglicolato de sodio y el indicador de oxigeno resazurina, azul metileno y otros

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ACCIN DE LAS BACTERIAS SOBRE LOS HIDRATOS DE CARBONO

Durante el proceso del metabolismo algunas bacterias son capaces de reducir a los carbohidratos a compuestos menos complejos que pueden penetrar en el interior de las clulas. Para que se den estas reacciones es preciso que los microorganismos sean capaces de elaborar enzimas.

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ACCIN DE LAS BACTERIAS SOBRE LOS HIDRATOS DE CARBONO

La mayora de las bacterias hetertrofas metabolizan la glucosa, pero la degradacin sigue distintas direcciones, segn la constitucin enzimtica de las diversas especies de bacterias.

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ACCIN DE LAS BACTERIAS SOBRE LOS HIDRATOS DE CARBONO

Para realizar esta prctica se requiere de medios de cultivo que contengan azucares

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TSI

contiene tres azcares que son: glucosa, lactosa y sacarosa contiene tambin sulfato amnico ferroso, que reacciona con el acido sulfhdrico, con el cual se determina la formacin de H S (sulfuro de hidrogeno)un precipitado de color negro.
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Interpretacin:

Se verifican varias reacciones, Ninguna reaccin, alcalino superficie/alcalino fondo (K/K). El medio se queda inerte, no cambia de color por tanto es un No Fermentador y se descarta Enterobacteriaceae. Alcalino superficie/Acido fondo (K/A), significa solo fermentacin de la glucosa, por tanto, es un No fermentador de lactosa (o sacarosa ). Acido superficie/Acido fondo (A/A), significa que se trata de un fermentador de lactosa (o sacarosa en TSI). Alcalino superficie/Acido fondo con precipitado negro, se reporta como H2S positivo. Adems de las caractersticas anteriores se pueden observar burbujas o rompimiento del medio debido a la produccin de gas en el medio.
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Interpretacin:

TSI

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MAC-CONKEY:

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial Es un medio de cultivo selectivo para bacterias Gram. negativas Este medio contiene el azcar lactosa y un indicador de PH( rojo neutro), entre otros componentes. Si la bacteria fermenta el azcar las colonias se tornan rosadas. Si no la fermenta las colonias se observan transparentes.

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Mac Conkey se observan Colonias Rosadas. Resultado: Lactosa Positivo

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Mac Conkey: Colonias Claras o Transparentes Resultado: Lactosa Negativo

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Interpretacin:
Se verifican dos reacciones Colonias rosadas la bacteria fermento la lactosa Colonias transparentes la bacteria no fermento la lactosa

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CALDO LACTOSADO BILIS VERDE BRILLANTE (CLBVB):

Es un medio de cultivo selectivo para Gram. negativos. En tubos de Durham cuando hay gas en el tubito invertido nos indica que hay presencia de gas por tanto ha ocurrido la fermentacin de la lactosa Esta reaccin es producida por los coliformes .
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CALDO LACTOSADO BILIS VERDE BRILLANTE (CLBVB):

Interpretacin: Si se observa un desplazamiento en el tubito invertido se reporta: gas + Si el tubito invertido permanece lleno del liquido se reporta: gas -

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CALDO LACTOSADO BILIS VERDE BRILLANTE.

GAS POSITIVO

GAS NEGATIVO

Prueba de la Coagulasa

cepa de Staphylococcus La coagulasa acta como una enzima termoestable que permite diferenciar el Staphylococcus aureus del resto de los Estafilococos coagulasa negativos. Se producen dos tipos de coagulasa, la unida a la pared celular y la liberada por la clula como coagulasa libre y es la detectada por la tcnica en tubo. La coagulasa acta sobre la protrombina para producir trombina que acta sobre el fibringeno para formar el coagulo.

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Interpretacin:
Si se forma un coagulo la prueba es: positiva Si no se forma el coagulo la prueba es: negativa. Staphylococcus aureus forma un coagulo, es coagulasa + Staphylococcus que no forman coagulo son: coagulasa
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Interpretacin:

Coagulasa +

Coagulasa -

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Prueba de oxidasa

Fundamento: La Prueba de la Oxidasa hace una diferenciacin inicial de las bacterias Gram. negativas. Se basa en que determinadas bacterias poseen las enzimas citocromo oxidasa o indofenol oxidasa, que catalizan el transporte de electrones. En esta prueba, un tinte incoloro, como el dihidrocloruro de p-fenilendiamina sirve como un aceptor artificial de electrones para la enzima oxidasa. El tinte es oxidado y forma el compuesto coloreado, azul de indofenol.
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Prueba de oxidasa

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La prueba de la Catalasa

Esta prueba permite diferenciar los microorganismos aerobias y facultativas Catalasa POSITIVA de las anaerbicas y de las Microaerofilicas las cuales son Catalasa negativa La catalasa es una enzima respiratoria, es una porfirina de hierro cuya funcion es desdoblar los peroxidos en H2O y O2 Se utiliza en el laboratorio para diferenciar el Estafilococos de Estreptococos

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Prueba de la Catalasa+

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ACCIN DE LAS BACTERIAS SOBRE LAS PROTEINAS Protelisis Durante su metabolismo las bacterias que poseen enzimas proteolticas son capaces de desdoblar las protenas que son molculas demasiado grandes para poder penetrar en las clulas bacterianas razn por la cual tienen que ser desarticuladas en compuestos ms sencillos para que las clulas puedan utilizarla como elemento nutritivo.
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La protelisis es la degradacin de las protenas. El resultado final de la accin proteoltica es la produccin de aminocidos.

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INDOL

El Indol es uno de los productos de degradacin metablica del aminocido triptofano. Las bacterias que poseen la triptofanasa son capaces de hidrolizar el triptofano con produccin de indol. La produccin de indol es una caracterstica importante para la identificacin de muchas especies de microorganismos. La prueba de indol est basada en la formacin de un anillo rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehdo del pdimetilaminobenzaldehdo. (reactivo de Kovacs ) Este es el principio activo de los reactivos de Kovacs y Ehrlich. El medio de cultivo utilizado debe ser rico en triptofano.

Anillo amarillo

Anillo rojo +

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UREA

Es una prueba que se realiza para determinar si la bacteria posee la enzima ureasa (esta enzima descompone la urea en amoniaco). El medio de cultivo es un caldo rico en urea el cual posee un indicador de PH el cual se torna (fucsia) en medios alcalinos. Resultados: el desarrollo de un color fucsia indica que la prueba es positiva. Si no hay el desarrollo de un color fucsia indica que la prueba es negativa

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Gelatina

Es una prueba que se realiza para determinar si la bacteria es capaz de licuar la gelatina por la presencia de la enzima Gelatinasa. El medio de cultivo es gelatina. El fundamento de la prueba es la licuacin irreversible de la gelatina Esta prueba hay que llevarla a la nevera por una o dos horas despus de sacarla de la incubadora.

Resultados: NEGATIVA Al sacar la prueba de gelatina de la nevera est gelificada

POSITIVA Al sacar la prueba de gelatina de la nevera est liquida (licuacin irreversible)

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prueba urea indol

Enzima ACCIN DESustrato LAS BACTERIAS SOBREProducto LAS PROTEINAS final Caldo de Urea Caldo triptonado o peptonado ureasa Triptofanasa Amoniaco Indol

Interpretacin

Fucsia+ LimoncilloAadir Kovacs Anillo rojo+ Anillo amarilloRefrigerar Liquida + Gelifica Fondo morado+ Fondo amarillo-

Gelatina

Gelatina

gelatinasa

Licuacin Irreversible
Cadaverina

Lisina

Lisina Iron Agar (LIA)

Descarboxilasa

Desaminasa

cido alfa ceto carbnico

Superficie rojo con fondo amarillo+ Sin cambioPrecipitado negro H2S

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HEMOLISIS

Es la destruccin de los glbulos rojos. Muchos organismos producen sustancias que disuelven los glbulos rojos, estas sustancias se denominan Hemolisinas. La Hemlisis se puede observar en medio de cultivo de agar sangre. Cuando las bacterias producen hemolisinas solubles que dan por resultado la aparicin de una zona clara transparente alrededor del crecimiento de la colonia, se ha producido una Hemlisis tipo Beta.

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HEMOLISIS

Otros microorganismos producen otro tipo de hemolisinas que originan cambios en la hemoglobina de los glbulos rojos (transformacin a meta hemoglobina) la cual se hace visible por una coloracin verde alrededor de las colonias. Entonces se dicen que han producido una Hemlisis tipo Alfa. Cuando no se produce ningn cambio se le denomina Hemlisis tipo Gamma.

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HEMOLISIS: Alfa, Beta y Gamma

No Hemolitica Alfa Beta

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Pigmentos

LOS PIGMENTOS Son sustancias coloreadas metabolizadas por microbios. Uno de los caracteres ms llamativos de los cultivos es la pigmentacin o cromo gnesis. Se denomina endopigmento cuando el pigmento no se segrega al exterior sino que queda en el interior de la clula bacteriana Se denomina exopigmento (Pseudomonas) cuando el pigmento se segrega adems de las colonias al medio exterior.

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Exopigmento

Exopigmento (Pseudomonas) cuando el pigmento se segrega adems de las colonias al medio exterior. Es de color verde

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Endopigmento

Se denomina endopigmento cuando el pigmento no se segrega al exterior si no que queda en el interior de la clula bacteriana Staphylococcus aureus Endo pigmento de color amarillo dorado

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Endopigmento

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PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LOS QUIMIOTERAPEUTICOS.

Antibiograma

La determinacin de la sensibilidad antimicrobiana a los aislamientos bacterianos que tienen significado clnico es una de las principales funciones del laboratorio de microbiologa. El objetivo principal de las pruebas de sensibilidad es predecir el xito del tratamiento con los antimicrobianos ensayados.

Esto significa que un resultado sensible implica una alta probabilidad de que el paciente va a responder al tratamiento con ese determinado antimicrobiano. Y un resultado dado como resistente es casi seguro que falle con ese tratamiento. La prueba de sensibilidad mas usada es el mtodo Estandarizado de DiscoDifusin (Kirby-Bauer)
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Antibiograma

Mtodo de la prueba: Difusin Kirby Bauer Mtodo de la siembra: Embadurnamiento Medio de cultivo: MH Instrumento de siembra : Hisopo Resultados: Sensible, resistente e intermedio Sensible: si al rededor del disco de sensibilidad el

microorganismo no crece y se forma un halo claro de inhibicin. Resistente: si al rededor del disco de sensibilidad el microorganismo crece y NO se forma un halo claro de inhibicin. Intermedio :si alrededor del disco de sensibilidad se forma un pequeo halo o si el halo es grande pero aparecen colonias de bacterias mutantes
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Antibiograma

Resistente

Sensible

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Antibiograma

SENSIBLE: Si alrededor del disco se forma un halo de inhibicin que corresponda a los puntos de corte establecidos (CLSI) para cada combinacin de microorganismo/antimicrobiano Esta categora implica que una infeccin dada por la cepa en estudio puede ser tratada apropiadamente con dosis de antibitico recomendada para el tipo de infeccin y la especie infectante a menos que hubieran contraindicaciones.

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Antibiograma

RESISTENTE: No se forma un halo claro alrededor del disco de sensibilidad. La bacteria crece alrededor del disco.

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Produccin de lactamasas.

Las enzimas son codificadas por:

Genes

de los cromosomas. Plsmidos extracromosomales.

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Su produccin puede ser :

Constitutiva

(cuando se hace de manera constante). Inducible, es decir, luego de la exposicin de la bacteria al antibitico.

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Las -lactamasas rompen el anillo lactmico de penicilinas.

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Sustancias ms estables frente a la accin de las -lactamasas.

Las

cefalosporinas de espectro extendido (ceftazidima, cefotaxima y ceftriaxona).

Los

antibiticos monobactmicos como aztreonam.

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Estadsticas

En 1994, fue reportado que 1.3% a 8.6% de los aislados clnicos de E. coli y Klebsiella pneumoniae eran resistentes parcial o totalmente a ceftazidima y hasta en 50% de los casos, tal propiedad estaba relacionada con la sntesis de lactamasas de espectro extendido.

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RESISTENCIA A ANTIBITICOS -LACTMICOS.

Compuestos B- Lactamicos.
Penicilinas. Cefalosporinas. Monobactmicos. Carbapenems.

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Principales mecanismos de resistencia a los -lactmicos

Cambios

en las protenas fijadoras de penicilina. Alteraciones en las porinas de la membrana externa. Produccin de -lactamasa que inactivan al antimicrobiano.
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Modificacin de las protenas fijadoras de penicilina.

Mutacin

de los genes que codifican para estos pptido. Adquisicin de genes extraos que codifican para nuevas protenas fijadoras de penicilina.

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Composicin de la envoltura de las bacterias Gram. positivas (A) y Gram. negativas (B).

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Impermeabilidad de la pared.

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Bacterias que modifican las porinas de su cpsula externa .

E. coli. Pseudomonas aeruginosa . Serratia marcescens.

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IMPORTANCIA CLNICA DE LA RESISTENCIA BACTERIANA.

MEDIDAS PARA MODIFICAR LA VELOCIDAD CON QUE SE DESARROLLA LA RESISTENCIA.

El uso racional de estos medicamentos. La educacin de los pacientes. La seleccin adecuada del rgimen antibitico.

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BACTERIAS QUE SON RESISTENTES POR LA ACTIVIDAD DE -LACTAMASAS DEL GRUPO 2.

Escherichia coli. Klebsiella spp. Proteus spp.

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El enterococo es un microorganismo patgeno que actualmente presenta insensibilidad intrnseca a varios antibacterianos comunes y a ciertos compuestos como vancomicina y otros antibiticos glicopptidos de reciente desarrollo.

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De acuerdo con los reportes ms recientes, emitidos por los Centros para el Control de Enfermedades de Atlanta, en Estados Unidos la prevaleca de cepas nosocomiales de neumococo resistente a vancomicina es de 10% a 12% y dicha cifra va en aumento.

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La resistencia a vancomicina es, en estos momentos, un motivo de creciente preocupacin para la comunidad mdica, ya que tal antibitico era considerado como la ltima herramienta para combatir las infecciones causadas por grmenes multirresistentes, en particular estafilococo coagulasa negativo y S. aureus resistente a meticilina.

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ACCIN DE LOS AGENTES QUMICOS: ANTISPTICOS Y DESINFECTANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS

Determinar la accin de los agentes qumicos: antispticos y desinfectantes sobre los microorganismos e interpretar los resultados tiene importancia para el rea de salud

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El antisptico o el desinfectante en el disco difunde a travs del agar. En la medida que aumenta la distancia al disco, disminuye logartmicamente la concentracin del antisptico o el desinfectante, producindose en el agar un gradiente de concentracin del antisptico o el desinfectante alrededor de cada disco. Continua----159

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Concomitantemente con la difusin del antisptico o el desinfectante, la bacteria que fue inoculada en la superficie y que no es inhibida por el antisptico o el desinfectante contina su multiplicacin hasta tener un crecimiento visible. En las reas donde el antisptico o el desinfectante inhibi la bacteria, se produce una zona de inhibicin del crecimiento alrededor de cada disco.
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Antisptico / Desinfectante

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Resultados

Eficaz : Si el microorganismo no crece alrededor del disco impregnado de antisptico o desinfectante Ligero Eficaz : Si el microorganismo crece ligeramente alrededor del disco impregnado de antisptico o desinfectante No Eficaz : Si el microorganismo crece alrededor del disco impregnado de antisptico o desinfectante
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ESTUDIO BACTERIOLOGICO DEL AGUA Y OTROS LIQUIDOS DE CONSUMO

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Estudio bacteriolgico del agua y otros lquidos de consumo

Para determinar la presencia de coliformes y contaminacin fecal se realizan dos pruebas: La prueba preliminar _estadstica y la prueba confirmatoria.

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Prueba Preliminar
Para hacer la prueba preliminar se utilizan 5 tubos de caldo lactosado Bilis Verde Brillante a los cuales se les aade 5 ml. De la muestra en estudio. Se lleva a la incubadora. a las 24 horas se lee cuantos tubos hay positivos y cuantos tubos negativos, utilizando una tabla ESTNDAR. Se obtiene el numero mas probable de coliformes presentes en la muestra.

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Tabla para obtener el No. Mas probable de coliformes en el liquido estudiado

Tubos de C.L.B.V.B.

NEGATIVOS

POSITIVOS

No. Mas probable de coliformes en el liquido estudiado

5 4 3 2 1 0
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0 1 2 3 4 5

0 200 510 920 1,610 Mas 1610

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IMViC

El IMVIC esta conformado por 4 pruebas: Indol, Rojo de metilo, Vogues-proskawer y Citrato.

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IMViC
Resultados:

++--

E. coli

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IMViC
Resultados:

--++
Klebsiella o Enterobacter

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La prueba del IMViC puede ser sustituida por una prueba de movilidad en semisolido y una prueba de indol

La E. coli: indol positivo Es una bacteria mvil Brillo metlico en EAM

Klebsiella es inmvil Indol negativo

o Enterobacter Indol negativo Es mvil

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sembrando en Eosina azul de metileno(EAM). La E. coli crece con brillo verde metlico. La E. coli es la bacteria que se toma como ndice de contaminacin fecal

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Eosina Azul de Metileno EAM con brillo

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PRUEBAS DE IDENTIFICACIN EN EL LABORATORIO DE BACTERIOLOGA

Cndida albicans Tubo germinativo positivo

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Test de Camp

Para diferenciar a los estreptococos grupo B

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Sensibilidad a la optoquina / Streptococcus pneumoniae (en agar sangre

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Bacilos gram. Negativos Fermentadores de Glucosa Haemophilus influenzae Coloracin de Gram. Forma: Coco Bacilos Propiedad tintorial. Gram. Negativo

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PRUEBAS DE IDENTIFICACIN EN EL LABORATORIO DE BACTERIOLOGA

Diplococos gram. Negativos Neisseria gonorroheae Coloracin de Gram. Forma. Cocos Disposicin: diplococos arrionados intracelulares Propiedad tintorial. Gram. negativo ( Cocos teidos de rojo de rojo)

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Prueba de oxidasa

Prueba de oxidasa + en la N. gonorroheae igual que N. meningitidis

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Control de Microorganismos

1.- De qu mtodos se vale el hombre para el control de los microorganismos? De agentes fsicos, qumicos y quimioterapeuticos. 2.- Define los siguientes trminos: Esterilizacin: Es el proceso de destruir todas las formas de vida microbiana. Estril: Libre de vida de cualquier clase. Desinfectante: Es un agente que tiene la propiedad de matar las formas de desarrollo, pero no necesariamente las esporas resistentes de microorganismos patgenos. Se aplica en superficies inanimadas (pisos, mesas, paredes).

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Desinfeccin : Es la operacin de destruir agentes infecciosos. Antisptico: Sustancia que impide el desarrollo de microorganismos por destruccin o inhibicin de su crecimiento o actividad. Contrario al desinfectante se aplica sobre el cuerpo. Sptico: Caracterizado por la presencia de microorganismos perjudiciales en el tejido vivo. Bactericida: Agente que mata a las bacterias (Accin irreversible). Bacteriosttico: Agente que inhibe la multiplicacin bacteriana (Accin reversible). Germicida: Agente que mata microbios. Desgerminacin: Procedimiento encaminado a disminuir el numero de grmenes en un rea, tal es el caso de aseos de pisos y descontaminacin de paredes y techos.
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Agentes antimicrobianos

Agentes antimicrobianos: son los que interfieren en el crecimiento y la actividad de los microbios y se denominan teraputico (se utilizan en el tratamiento de las infecciones). 3.- Cules son los factores que influyen sobre la esterilizacin y la desinfeccin? La hidratacin, el tiempo, la temperatura, concentracin, materia orgnica extraa, pH. 4.- Cul es el modo de accin de los agentes antimicrobianos? Daos a la pared celular. Alteracin de la permeabilidad celular. Alteracin o coagulacin de las molculas de protenas y de los cidos nucleicos. Inhibicin de la accin enzimtica. Mecanismos genticos.

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5.- Control por agentes fsicos. Cules son los agentes fsicos ms usados? La temperatura. Radiaciones. Filtracin. Gases. Presin osmtica. 6.- Por qu mata el calor seco a las bacterias? Porque les coagula las protenas y las deshidrata. Por qu mata el calor hmedo a las bacterias? Por hidrlisis y coagulacin de las protenas

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7.- Mencione los medios mas usados para matar bacterias por calor hmedo: el autoclave, la ebullicin, la tindalizacin, Pasteurizacin. 8.- Entre los agentes qumicos capaces de matar bacterias, cules son los ms usados? Alcoholes, fenol y compuestos fenolicos, metales pesados y sus compuestos, agentes oxidantes, colorantes, detergentes, gases.

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10.- Cul es el mecanismo de accin de los antibiticos? Inhibicin de la formacin de la pared celular. Ej.: Penicilina, cesfalosporina, vancomicina. Efecto sobre la membrana celular. Ej.:Polimicina, nistatina, anfotericina, etc. Inhibicin de la sntesis proteica. Ej.: tetraciclina, cloranfenicol, gentamicina, neomicina. Accin sobre los cidos nucleicos. Ej.: griceofulcina, antinomicina. inhibicin de metabolitos esenciales, los sulfas que compiten con el paba.

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1.- En qu consiste cultivar una bacteria? Es el procedimiento por el cual promovemos el crecimiento de los microorganismos in vitro y el medio por el cual estudiamos su fisiologa. 2.- Cul es la formula bsica de los medios de cultivo? Agua Na Cl Peptona Extracto(levadura o carne) 3.- Cmo se clasifican los cultivos segn su estado fsico? Lquidos Semi-solid solid

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4.- Cmo se clasifican los cultivos segn su uso y finalidad? Enriquecidos Diferenciales Selectivos Especiales Simples 5.-Define: Medio de cultivo simple: crecen en ellos microorganismos no exigentes. Medio de cultivo enriquecido: contienen nutrientes extra como el agar sangre y agar chocolate Medio de cultivo selectivo: medios en los que se favorece el desarrollo de determinado microorganismo, al contener sustancias inhibidoras para los dems grmenes. MC, EAM etc Medio de cultivo diferencial: medios generalmente slidos, que le imparten algunas caractersticas especiales a las colonias de determinado microorganismo, por medio de cual podemos fcilmente identificarlo. MC y EAM

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6.- Cmo se le llama a la sustancia que proporciona solidez a los medios de cultivo? agar 7.- Qu son los pigmentos bacterianos y como se clasifican? son sustancias coloreadas elaboradas por las bacterias Exopigmento Endopigmento.

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Bioseguridad

La Bioseguridad no solo esta limitada a un mero listado de normas de trabajo sino que requiere de participacin. Es el conjunto de medidas preventivas destinadas a proteger la salud de los trabajadores, los usuarios del servicio y la preservacin del medio ambiente frente a riesgos de agentes biolgicos, fsicos o qumicos. agentes fsicos, qumicos y biolgicos en sus reas de trabajo, a los usuarios del servicio y preservar el ambiente. La Bioseguridad se concibe hoy como: Un derecho de la poblacin (que exige la proteccin de las personas y del ambiente) Derecho de los pacientes Derecho de quienes trabajan en ellos. Se relaciona as con la higiene hospitalaria y el control de las infecciones nosocomiales y con la higiene y la seguridad en el trabajo

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Objetivos de las normas de Bioseguridad

Reducir el riesgo de accidentes en el personal que labora en los laboratorios de microbiologa provocado por las acciones que estos realizan. Reducir la contaminacin ambiental producto de los desechos emanados de los laboratorios

Asegurar la integridad de las muestras bacteriolgicas contra la degradacin o contaminacin de las mismas que pueda poner en peligro la validez de los resultados.
Proteger la salud del personal que labora en laboratorios frente a riesgos asociados con

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Bioseguridad

Normas generales de bioseguridad

Colocar la seal de Riesgo Biolgico. Utilizar bata de trabajo. Evitar su uso fuera de los ambientes del laboratorio. Utilizar guantes, mascarillas, lentes y/o cubreboca para todos los trabajos, que obliguen el contacto de material infeccioso del nivel 4 Evitar entrada del personal ajeno al laboratorio durante la jornada de trabajo Durante el trabajo deber mantenerse las puertas cerradas No comer, beber, fumar, aplicarse cosmticos dentro del ambiente de laboratorio Lavarse las manos antes y despus de manipular el material biolgico con jabn lquido. Usar toallas desechables para el secado de las manos. No utilizar las neveras para almacenar alimentos.
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Bioseguridad
No conservar alimentos en el rea de trabajo del No manipular material infeccioso en el rea de papelera. No reencapuchar las agujas, pues es una fuente importante de accidentes corto punzantes. En caso de ruptura de material de vidrio, no recoger vidrios rotos con los dedos.

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Bioseguridad
Descartar agujas u otros materiales punzocortante en recipientes de paredes gruesas, NUNCA EN LA BASURA COMN Descontaminacin de los desechos contaminados antes de su eliminacin segn tipo Disponer de manual de procedimientos para toma de muestras variadas

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Bioseguridad
Todo el personal del laboratorio deber ser sometido a un examen mdico completo, que debe comprender una historia clnica detallada al momento de su incorporacin a la institucin, este debe ser repetido una vez al ao Todo el personal del laboratorio recibir inmunizacin protectora segn rea especfica en que labore, bajo supervisin mdica y segn criterio epidemiolgico

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Bioseguridad

Las personas que usan pelo por debajo de los hombros deben protegerse con gorro o mantener amarrado el cabello hacia atrs.

No usar durante la jornada de trabajo brazaletes o collares largos.

Usar zapatos que cubran completamente los pies

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Bioseguridad

Normas de Bioseguridad para evitar riesgos fsicos

Tener totalmente libres las zonas de circulacin. Mantener orden en el laboratorio. Tener estantes seguros. Evitar sobrecarga en las conexiones elctricas Utilice, siempre que sea posible, ayudas mecnicas para manipular cargas

pesadas.
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Seal de Riesgo Biolgico.

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Debes recordar:

1-Cuales son las formas fundamentales de las bacterias? cocos, bacilos y helicoidal 2-Cuales son las formas fundamentales de los hongos? Levaduriforme y filamentosa

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Hongos filamentosos

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Levaduras

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5.- Esquematice una clula bacteriana y pngale sus nombres a las diferentes partes. Diagrama de un Corte Axial de una Bacteria Fimbrias Membrana Citoplasmtica Sustancias Nuclear Grnulos Flagelos Cpsulas Pared celular

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Clula bacteriana

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6.- Mencione las partes fundamentales de las bacterias. Partes fundamentales: Membrana citoplsmica. Pared celular Citoplasma material nuclear. Mesosoma. Ribosomas. Partes especiales. Fimbrias Flagelos Espora Cpsula

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7.- Esquematice y pngale sus nombres a los diferentes tipos de flagelos. Los flagelos son apndices muy delgados que sobresalen a travs de la pared celular y se originan en el citoplasma. 8.- De qu sustancia estn qumicamente compuestos los flagelos de la bacterias? Por una protena llamada flagelina. 9.- Los flagelos les proporcionan a las bacterias: movilidad.
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Flagelos

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Bacteria con flagelos

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Fimbrias o Pilis:

Fimbrias o Pilis: Son apdices filamentosos que no son flagelos. Son ms pequeos y no tienen funcin en la movilidad. Hay varios tipos como la F que funciona en la cpula sexual de transmisin de material gentico que se llama conjugacin. Las fimbrias facilitan la adherencia a las clulas epiteliales, como ocurre en pacientes con fibrosis qustica, en los cuales la infeccin por pseudomonas esta relacionada con la presencia de fimbrias y otros factores.
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Esporas

10.- Defina espora bacteriana : se denomina tambin endoesporas, pues se produce intracelularmente, y son formas resistentes que adquieren los microorganismos en determinadas condiciones. Contienen acido dipicolinico + calcio

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11.- De qu sustancia estn qumicamente compuestas las esporas bacterianas? De cido dipicolinico y calcio. 12.- Qu le proporcionan las esporas a las bacterias? Resistencia 13.- Define cpsula bacteriana: cubierta mucilaginosa que cubre toda la clula. Aumenta la capacidad infecciosa de la bacteria. Son las causantes de algunas molestias en procesos industriales porque producen material viscoso.

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14.-Que le proporcionan las cpsulas a las bacterias? Una cubierta protectora. 15.- De qu sustancia estn qumicamente compuestas las cpsulas bacterianas? De polisacridos como : dextran, dextrin, levan y celulosa.

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Cpsulas

La capsula es un Factor de virulencia Esta es una coloracin negativa porque no se tio la cpsula se observa REFRINGENTE
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Es un recurso didctico fcil de elaborar, econmico se puede enviar por correo electrnico , lo puedes colocar en una pagina Web y permite a los usuarios aprender, a su medida segn el tiempo disponible en su hogar cmodamente y compartirlo con sus compaeros, estudiar a distancia y se ha comprobado que el aprendizaje con su uso es eficaz, eficiente y efectivo.
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Manual de prctica de Microbiologa Digital

Se le debe hacer revisiones permanentes y actualizarlo Se entregar a la ctedra de microbiologa a la cual pertenezco para que le hagan las revisiones y correcciones pertinentes. Agradezco las sugerencias a la siguiente Direccin electrnica A Jimnez 16@ hot mail. com

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