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INTRODUO
Nutrio mineral: soluo do solo. macronutrientes : N , P, K, Ca, Mg, S. micronutrientes : B, Cl, Mn, Cu, Zn, Fe, Mo, (Co). O N de grande importncia para as plantas: AA, Protenas, Enzimas, cs.Nuclicos (RNA, DNA), Clorofilas etc... Fonte de N: 1. Ar (solo): N2 (plantas fixadoras) 2. soluo do solo: NO3- e NH4+
O CICLO DO NITROGNIO
Fixao No Simbitica Desnitrificao Fixao Biolgica ou Simbitica
N2
N2, NO2,N2O
N2
Uredeos
Bactrias Rhizobium
SOLO
Amonificao
Oxidao Nitrosomonas Oxidao Nitrobacter
Absoro NO3-
NH3/NH4+
NO2-
Lixiviao
Lenol Fretico
Nitrificao
Amonificao: Liberao de NH4+ para o meio ambiente. Nitrificao: formao de NO3- por ao de bactrias. NH3 + 3 O2 NO2- + 2 H+ + 2 H2O 2 2
NITROSSOMONAS
NO2- + O2 2
NITROBACTER
NO32
ABSORO DE NITRATO
Existe um sistema de EFLUXO e INFLUXO.
O influxo depende do nvel de nitrato (tratamento prvio) e o sistema de transporte de nitrato induzido por nitrato e do TIPO COTRANSPORTE ANTIPORT NO3-/ H+
REDUO DO NITRATO
O nitrato reduzido a amnia/amnio (NH3/NH4+) por dois processos catalticos: A) REDUTASE DO NITRATO. B) REDUTASE DO NITRITO. Esta reduo pode ocorrer na raiz e/ou folha, dependendo da espcie, idade e suprimento de NO3-.
NO CITOSOL
RN NO3- + 2 H+ + 2 eNO2- + H2O.
NO CLOROPLASTO OU PLASTDEO
RNi NO2- + 8 H+ + 6 eNH4+ + 2 H2O
A localizao: no CITOSOL e pode estar prxima a membrana do cloroplasto durante o tempo de reduo (facilita o rpido transporte de NO2- para dentro do cloroplasto, pois um composto altamente txico).
CLOROPLASTIDIAL
ASSIMILAO DA AMNIA
GLUTAMINA SINTETASE (GS) Enzima responsvel pela assimilao do NH4+(NH3), o qual incorporado na forma orgnica pela aminao do 2-oxoglutarado catalisado pela glutamato desidrogenase e/ou pela produo do 2-oxoglutarato do ciclo de Krebs. A catlise da GS dependente de ATP para converter Glu em Gln (Km 3-5 M) e est presente em todos os tecidos das plantas.
Porta de entrada da amnia para a formao dos aminocidos em plantas superiores. uma protena octamrica com massa molecular de 350-400 KDa, com 12 sub-unidade. Nveis altos de GS tm sido isolados de ndulos de leguminosas que fixam nitrognio (feijo isoenzimas GSn1 e GSn2) Localizao: CITOSOL (GS1) e CLOROPASTOS (GS2) ou PLASTDIOS.
ATP Mg+2
ADP + Pi
GLUTAMATO + NH3
GLUTAMINA
GLUTAMINA + 2-Oxoglutarato
Glu-sintase(GOGAT) NH2
2 Glu
AMINOTRANSFERASES OU TRANSAMINASES
Aspartato amino transferase
Glu + Oxaloacetato 2-Oxoglutarato + Aspartato
Obs. 1. Os dois oxoglutaratos formados por essas vias podem retornar ao ciclo GS/GOGAT. 2. As aminotransferases tm sido detectadas em plantas que podem sintetizar todos os aminocidos (exceto prolina). 3.Desse modo, o NITROGNIO pode ser facilmente distribudo a partir do Glutamato, via Aspartato e Alanina, para todos os aminocidos. 4. A aspartato aminotransferase pode estar envolvida no transporte do poder redutor (NADH, NADPH) da mitocndria e cloroplasto para dentro do citosol, os NADH produzidos sero utilizados na reduo do nitrato ou na reduo do hidroxipiruvato no peroxisomo.
PROLINA (Pro)
A prolina sintetizada da seguinte forma:
ATP
Mg+2 Glu NADPH + H+ Glutamil semialdedo NADP+
ADP + Pi
ciclado Pirrolina
5- Carboxilato
PROLINA
NADPH + H+
P5CR
NADP+
A enzimiologia das reaes no est bem esclarecida em plantas superiores, somente a ltima enzima do passo metablico est bem caracterizada e localizada no cloroplasto: - Pirrolina 5- carboxilato redutase. H evidncias de que a ORNITINA via ou Pirrolina 5- carboxilato ou - Pirrolina 2carboxilato pode tambm agir como precursor da PROLINA. A rota sob condies normais no est bem esclarecida.
AcG
GLUTAMATO
P5CS
ORNITINA
OAT
GSA
P5C
P5CR
PROLINA
P5CS = - Pirrolina 5- carboxilato sintase P5CR = - Pirrolina 5- carboxilato redutase OAT = Ornitina aminotransferase o principal aminocido componente particularmente nas sementes de cereais. de protenas,
A prolina pode tambm agir como protetor osmtico (ajustamento osmtico) nas plantas sujeitas ao dficit hdrico ou salino (aumento na sntese, possivelmente atravs da induo da - Pirrolina 5carboxilato redutase e/ou pelo decrscimo na taxa de oxidao mitocondrial da prolina).
% PROLINA - FOLHAS
12
% PROLINA - RAIZ
% de Prolina do total a.a livres
40 35 30 25 20 15 10 5 0 0 1 2 3 4 5
0 0 1 2 3 4 5 6
DIAS DE ESTRESSE
A Asparagina universalmente usada pelas plantas superiores como um componente de armazenamento e transporte. O N-amida derivado diretamente do grupo amida da glutamina, sintetizada pela enzima asparagina sintetase. uma reao dependente de glutamina e ATP.
NH2
ATP
AMP + Ppi
NH2
Gln
+ Aspartato-NH2
Glu-NH2 + Asn-NH2
Asparagina Sintetase
NH2
Os cotildones de sementes em germinao so as principais fontes de asparagina sintetase. Essa enzima requer Cl- para a atividade e inibida na presena de Ca+2.
4. Reaes especficas dos aminocidos: liberada durante a converso da Phe cinamato (produo de lignina); Cistationina Homoserina (na sntese da metionina); Treonina 2-oxobutirato (na biossntese da Isoleucina) 5. Catabolismo de Protenas: as protenas so hidrolisadas durante a germinao das sementes e durante a senescncia de folhas. H evidncias de que a amnia formada pela ao da glutamato desidrogenase:
JUSTIFICATIVAS
1. 1. O NO2- pode ser reduzido numa reao dependente da luz nos cloroplastos para formar glutamina e glutamato. 2.RNi, GS, GOGAT esto localizadas nos cloroplastos. 3.O caminho da fotorrespirao envolve a sntese de glicina pela transaminao do glioxilato. A NH3 liberada pela reao da Gly Ser reassimilada nos cloroplastos.
4.Nas C4, o aspartato, a alanina e o glutamato esto envolvidos no transporte de metablitos entre clulas da bainha vascular e clulas do mesfilo. 5.A aminotransferase do aspartato: 2-oxoglutarato esto envolvidas em transferir o poder redutor (NADPH) gerado no cloroplasto. 6. Os cloroplastos tm a capacidade de converter o Aspartato Lisina, Treonina, Isoleucina e Homocistena em reaes dependentes de LUZ. O piruvato leucina, valina e isoleucina, na sintese de aminocidos aromticos.
7.Todas as enzimas ou a maior parte delas necessrias para a sntese dos aminocidos essenciais: Lisina, Treonina, Isoleucina, Homocistena, Leucina, Valina, Triptofano, Fenilalanina e Tirosina, localiza-se nos cloroplastos, como tambm da sintese de arginina e prolina. 8.Os cloroplastos tm a capacidade de reduzir sulfato de cistena, e as enzimas envolvidas nos passos metablicos esto localizadas nos cloroplastos. A reduo da gluationa, assim como os mecanismos de desintoxificao de superxidos so tambm dependentes da luz.
9.Uma grande quantidade de protenas(p.ex. subunidades de RUBISCO, ATP-Sintetases e certos citocromos) so codificados pelo DNA cloroplstico e, portanto, dependentes da luz. 10.Os cloroplastos tm capacidade de sintetizar cidos graxos, cidos nucleicos e clorofilas, utilizando NADPH e ATP produzidos diretamente dos dois fotossistemas. OBS. Em locais no verdes como as razes, os processos descritos podem ocorrer nos plastdios e a energia dependente dos acares produzidos nas folhas.
METABOLISMO DA FIXAO DO N2
FORMAO DOS NDULOS. 1 Crescimento dos plos radiculares. As razes exsudam compostos orgnicos, tais como, acares, aminocidos, etc. que iro atrair as bactrias rhizbia (Quimiotactismo), formando uma rhizosfera microbiana. 2 Os plos radiculares eliminam exsudados especficos (flavanides-antocianinas) para atrair as bactrias para as razes e induzir especificidade atravs do gene nod da bactria (nodulao).
3 A bactria Rhizbia atraca na superfcie do plo radicular (provavelmente pela protena especfica LECTINA-glicoprotena). 4 Em resposta ao sinal da Rhizbia, o plo radicular curva com a mesma grudada. 5 A bactria Rhizbia digere a parede celular e forma o CORDO DE INFECO (forma de tubo) para dentro do crtex da raiz, onde penetram e se multiplicam intensamente, ocorrendo tambm intensa diviso celular das clulas corticais que se exteriorizam, formando o NDULO
1. A regio da crtex da raiz, com intensa diviso celular, recebe o nome de ndulo primrio. 2. Ao chegar nas proximidades do ndulo primrio, o cordo de infeco se ramifica para invadir as clulas vegetais. 3. Pequenos grupos de bactrias, contidas no interior de vesculas membranosas, so liberados dentro do citoplasma das clulas vegetais do ndulo primrio. 4. O citoplasma da clula invadido conter vrios grupos de bactrias, individualizado por uma membrana derivada da membrana do cordo de infeco.
5. A partir desse incio de estabelecimento do ndulo radicular, as bactrias, que se encontram dentro das clulas radiculares hospedeiras, param de se multiplicar, aumentam de tamanho e sofrem vrias alteraes bioqumicas para se transformarem em bactrias especializadas na fixao de nitrognio, os bacteriides. 6. Para diferenciar as duas fases da vida desses microrganismos, convencionou-se que o nome bactria seria utilizado enquanto no ocorressem as transformaes bioqumicas que iniciam o processo de fixao de nitrognio. Portanto, quando os microrganismos passam a fixar nitrognio so chamados de bacteriides.
7. Os ndulos radiculares desenvolvidos possuem uma organizao prpria de tecidos. Eles apresentam um meristema responsvel pela formao das clulas da regio de invaso, uma regio central e conexes vasculares com o xilema do cilindro central da raiz. Envolvendo e delimitando toda essa estrutura est o parnquima do ndulo.
N2
Nase
NH3 (NH4+)
2. Para que a reao ocorra, necessrio que haja um transporte de eltrons, mediado por molculas aptas a realiz-lo. 3. A enzima nitrogenase formada por duas unidades proticas, a Ferro-protena (Fe-protena) e a MolibdnioFerro-protena (MoFe-protena), ambas capazes de transportar eltrons. Durante a reao de reduo do N2, a nitrogenase auxiliada por uma terceira molcula transportadora de eltrons, a ferridoxina. 4. O modelo proposto para a evoluo da reao pode ser entendido do seguinte modo:
A ferridoxina, na sua forma reduzida, transfere um eltron para a unidade Fe-protena da nitrogenase. A Fe-protena, ento reduzida, doa o eltron recebido para a MoFe-protena. A MoFe-protena acumula os eltrons. Aps 8 transferncias, essa unidade ter acumulado 8 eltrons e, ento, far a reduo do N2 NH3. Para cada eltron transferido da Fe-protena para a MoFe-protena so consumidos 2 ATPs. Para reduzir uma molcula de N2 so necessrios 8 (oito) eltrons e, portanto, 16 ATPs.
A LEGHEMOGLOBINA
1. As clulas das razes da planta, bem como os prprios bacteriides, precisam de O2 para a respirao celular. Mas o oxignio (O2) altamente inibitrio para a atividade da Nitrogenase (Nase).
2.As estratgias desenvolvidas para evitar o excesso de O2 nos ndulos radiculares, prevenindo contra a conseqente inibio da nitrogenase, foram duas: Estratgia anatmica: o parnquima do ndulo funciona como uma barreira de difuso do O2. Os espaos intercelulares so pequenos e pouco numerosos, podendo ser preenchidos com gua. Logo, a entrada de O2 no interior do ndulo muito dificultada. Estratgia bioqumica: as clulas vegetais da regio central do ndulo produzem a leghemoglobina (hemoglobina das leguminosas). Essa molcula um carregador de O2, que garante que os bacteriides recebam o O2 necessrio para sua respirao, evitando que o gs circule livremente no ndulo.
2. FORMAO DOS NDULOS X BACTRIAS Famlia Rhizobiaceae. A Genes nod (nodulao) so encontrados na bactria, sendo responsveis pela produo da protena que recebe o sinal qumico da planta hospedeira (os flavonides-antocianinas) e pela produo das enzimas que sintetizam o fator de nodulao. B) Genes NOD so encontrados na planta leguminosa, sendo responsveis pela sntese de protenas denominadas nodulinas. As nodulinas (p. ex. a LEGHEMOGLOBINA) desempenham papel importante na formao e manuteno do ndulo radicular.
BIOQUMICA DA FIXAO
Exemplos: Em soja, aps 10 minutos de aplicao de 13N , 40% da radioatividade foi encontrado no 2 c.alantico. 4. Em caupi, 90% do exudato do xilema (aps 2 horas de exposio do ndulo ao 13N2 ) foi de cido alantico.
5. Alantona e c.Alantico so derivados da purina INOSINA MONOFOSFATO, que sintetizada da RIBOSE-5-FOSFATO e requer nitrognio da Gutamina, Aspartato e Glicina.
UREIDEOS NO XILEMA
controle
60 40 20 0
80 60 40 20 0 1 2
estresse
DIAS DE ESTRESSE
OBRIGADO!!!!!!!!!