Contar clulas

Hemocitmetro Basados en la microscopa Incorporacin de colorantes fluorescentes

Tincin de cultivos en monocapa

Medidores de la resistencia Electrnicos Citometra de flujo Anlisis de imagen Peso Aproximados Contenido de ADN Contenido de protenas

Mtodos para contar clulas

Mtodos para contar clulas

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El hemocitmetro o cmara de Neubauer

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1 mm

Profundidad = 0,1 mm
(rojo) (verde) (gris) (amarillo) (azul)

La cuadrcula del hemocitmetro

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Se introduce la suspensin de clulas en el hemocitmetro

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La regin de recuento del hemocitmetro

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Observacin con microscopio ptico y recuento de clulas

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De las tres lneas, la del centro es la que corresponde al lmite del cuadrado

Clula muerta

Clula viva

Diferencias entre clulas vivas y muertas

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Tincin de cultivos en monocapa

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Hay tres tipos de contadores electrnicos

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Contador de clulas electrnico (CASY)

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Es importante poner lmites (inferior y superior) a los tamaos que se miden

Resultados del recuento de clulas

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Recuento mediante anlisis de imagen

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Fundamento del recuento de clulas por anlisis de imagen

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Recuento de clulas por anlisis de imagen

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Esquema del anlisis de la imagen

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Citometra de flujo

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La difraccin de luz frontal permite contar las clulas y, a la vez, nos da informacin sobre su tamao.

Citometra de flujo

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Estimacin del nmero de clulas a partir del peso

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Estimacin del nmero de clulas a partir contenido proteico

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Mtodo de Bradford: fundamento

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Mtodo de Bradford: protocolo

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Estimacin del nmero de clulas a partir contenido de ADN

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Determinacin de ADN por la fluorescencia del H33258

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Estimacin del ADN por la absorbancia en el ultravioleta

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Comparacin de los diversos mtodos para contar clulas

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Exclusin del azul tripn

Mtodos para determinar la viabilidad de las clulas

Marcaje fluorescente con naranja de acridina y ioduro de propidio

Sntesis de novo de protenas Incorporacin de 3H-timidina al ADN

Mtodos para determinar la viabilidad de las clulas

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Viabilidad celular mediante tincin con azul tripn

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Clulas vivas
Naranja de acridina: atraviesa la membrana celular y tie los cidos nucleicos, generando una intensa fluorescencia de color verde a bajas concentraciones.

Clulas muertas

Ioduro de propidio: no atraviesa la membrana de clulas intactas, pero s la de las clulas daadas. Se une a los cidos nucleicos, desplazando al naranja de acridina y genera una intensa fluorescencia de color rojo.

Viabilidad celular: Naranja de acridina + Ioduro de propidio

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Medida de la viabilidad celular a partir de la sntesis de protenas

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Medida de la viabilidad celular a partir de la sntesis de ADN