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teora de que la luz estaba compuesta de unas partculas denominadas fotones, cuya energa era inversamente proporcional a la longitud de onda de la luz.
La luz tiene una naturaleza dual: Como onda Como una corriente de partculas o paquetes de energa (fotones)
Los campos elctricos y magnticos oscilan y son perpendiculares el uno con el otro.
La distancia entre dos picos (o dos valles) de una onda se llama longitud de onda ( = lambda).
l= c / u .
Se denomina espectro electromagntico al conjunto de ondas electromagnticas o, ms concretamente, a la radiacin electromagntica que emite (espectro de emisin) o absorbe (espectro de absorcin) una sustancia
La luz blanca: esta compuesta por siete colores que podemos percibir con nuestro propio sentido de la vista. Estos colores son: rojo , anaranjado, amarillo, verde, azul, ndigo y violeta.
Cuando una molcula absorbe ciertas longitudes de onda de luz visible y transmite o refleja otras, la molcula tiene un color
El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre
La luz blanca est compuesta de ondas de diversas frecuencias. Cuando un rayo de luz blanca pasa por un prisma se separa en sus componentes de acuerdo a la longitud de onda
RADIACIONES ELECTROMAGNETICAS
Son una forma de propagacin de energa a travs del espacio sin necesidad de un medio material. Abarcan un espectro muy amplio de tipo de onda, desde las microondas hasta los rayos X y gamma, pasando por la luz visible.
Los rayos X son radiaciones electromagnticas de alta frecuencia y alta energa (mayor a 1 Kev).
Rayos Gamma Rayos X Luz Ultravioleta Luz Visible Luz Infrarroja (fotogrfica) Infrarrojo Cercano Infrarrojo Lejano Microondas (ondas de radar) Frecuencias Elevadas (televisin) Onda corta de radio. Banda de control aeronutico Onda larga de radio
Todas las longitudes de onda (o energas) de la luz son del mismo ingrediente bsico. Todas constituyen el espectro electromagntico. La luz visible es solamente una porcin muy pequea de ste. Aunque nuestros ojos no pueden detectar el resto del espectro, actualmente se tienen detectores que si lo pueden hacer. Nosotros le hemos asignado nombres a los diferentes colores y usado diferentes unidades para las diferentes longitudes de onda. Cuanlquiera de los dos es conveniente.
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La luz blanca produce al descomponerla lo que se llama un espectro continuo, que contiene el conjunto de colores que corresponde a la gama de longitudes de onda que la integran
. Dicha
radiacin sirve para identificar la sustancia de manera anloga a una huella dactilar. Los espectros se pueden observar mediante espectrofotometros que, adems de permitir observar el espectro, permiten realizar medidas sobre ste, como la longitud de onda o la frecuencia de la radiacin
Cuanto ms larga la longitud de onda de la luz visible tanto ms rojo el color. Asimismo las longitudes e onda corta estn en la zona violeta del espectro.
Rango espectral
400-465
Soluciones coloreadas
Azul
Verde
500-570
Rojo
640-700
La espectroscopia es el estudio del espectro de la luz que emiten los cuerpos, sustancias y elementos.
radiacin electromagntica
materia
emisin de luz
La espectrofotometra es una tcnica de anlisis qumico , que puede ser de tipo cualitativo (para identificar substancias) o cuantitativo (para determinar la concentracin de las mismas en un fludo). Se basa en la propiedad que tienen muchas substancias orgnicas en absorber o emitir luz de determinadas longitudes de onda
Se utilizan espectrofotmetros de IR (infrarrojo), UV-vis (Ultravioleta visible) e IR-Raman (Infrarrojos-Raman), etc... Y cuando una substancia recibe luz de ese tipo absorber una parte y emite otra con
Entre las diferentes tcnicas espectroscpicas con las que contamos actualmente se encuentran las siguientes:
EspectroscopaUltravioletaVisible (UVVIS)
EspectroscopaInfrarroja (IR) Espectroscopade Resonancia MagnticaNuclear de 1H, 13C, 31P y 19F (RMN) Espectrometra de Masas (MS
U.V.
L u z v i s i b l e
X GAMMA
350 nm
750 nm
Infrarrojo Radio
La luz visible es slo una pequea parte del espectro electromagnti co con longitudes de onda que van aproximadamen te de 350 nanmetros hasta unos 750 nanmetros
Microondas
Radiacin ultravioleta: (Ultra= mas all de) o rayos UV es producida por cuerpos muy calientes como el sol y por lmparas especiales como las que usan para detectar billetes falsos . La radiacin ultravioleta puede ser daina para los seres vivos, sobre todo cuando su longitud de onda es baja. La radiacin ultravioleta con longitudes de onda inferiores a 300 nm se emplea para esterilizar superficies porque mata a las bacterias y los virus
. En los seres humanos, la exposicin a radiacin ultravioleta de longitudes de onda inferiores a los 310 nm puede producir quemaduras; una exposicin prolongada durante varios aos puede provocar cncer de piel.
En espectroscopa UV-Vis se irradia con luz de energa suficiente como para provocar transiciones electrnicas, es decir promover un electrn desde un orbital de baja energa a uno vacante de alta energa
Cuando un fotn UV-Visible de energa adecuada incide en una especie absorbente, un electrn es promovido desde su estado fundamental a un estado electrnico excitado. En absorcin UVVisible
Ley de Beer: Cuando un rayo de luz monocromtica pasa a travs de un medio absorbente, su intensidad disminuye exponencialmente a medida que la concentracin del medio absorbente aumenta
I = I0e-ac
I0
I0
I0
Cuando un rayo de luz monocromtica con una intensidad I0 pasa a travs de una solucin, parte de la luz es absorbida resultando que la luz emergente I es menor que I0
Luz absorbida
a = absortividad
I0
Longitud del medio absorbente o ancho de la celda
I
c = concentracin. b
(nmero de partculas por cm3)
La informacin que puede dar ese "espectro" es de tipo cualitativo, pues te puede informar de qu tipo e incluso qu compuesto es, pero tambin cuantitativo, pues te puede ayudar a determinar en qu concentracin se encuentra ese compuesto,
Transiciones __ *
<150 nm . Este tipo de transiciones se dan sobre todo en hidrocarburos que nicamente poseen enlaces C-H o C-C. La energa requerida para que tenga lugar esta transicin es relativamente grande, perteneciente a la regin espectral denominada ultravioleta de vaco.
entre 200-700 nm. La mayora de las aplicaciones de espectroscopia UV-Visible estn basadas en transiciones que ocurren en esta zona.
Transiciones electrnicas posibles entre orbitales n: orbital que contiene par de electrones no compartidos (ejemplo en : O, N, Cl)
Transiciones n------- *
entre 150-200 nm . Correspondientes a hidrocarburos que poseen tomos con pares de electrones no compartidos (electrones de no enlace). La energa necesaria para que se produzca esta transicin sigue siendo alta (aunque menor que en las * ) perteneciendo stas a la regin espectral UV Lejano.
A abc
A bc
a: cte de proporcionalidad llamada absortividad. (unidades Lcm-1g-1, si c=g/L) b: longitud del camino que recorre la radiacin a travs del medio absorbente.
absorbentes:
Como A = b c
A = A1 + A2 + .... + An A = 1 b c1 + 2 b c2 + . +n b cn
Siendo 1, 2, , n los componentes absorbentes.
ESPECTRO La forma ms sencilla es la representacin de Absorbancia (ordenadas) frente a l (abcisas). Se observan bandas anchas (no lnea)
CURVA PATRN
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0 0 2 4 6 8 10 12
Concentracin mg/lt
Concentracin
% Transmitancia contra concentracin (pendiente con signo negativo y comportamiento exponencial)
% Transmitancia
Concentracin
La Transmitancia (T) es la relacin entre la intensidad de luz transmitida por una muestra problema (I) con la intensidad de luz incidente sobre la muestra (Io):
T = I / I0
Se expresa como % T
Ley de Lambert-Beer
Absortividad (a)
a es una constante de proporcionalidad que comprende las caractersticas qumicas de cada compuesto, o molcula y su magnitud depende de las unidades utilizadas para b y c.
Cuando se expresa la concentracin en moles por litro y la trayectoria a travs de la celda en centmetros, la absortividad se denomina absortividad molar y se representa con el smbolo E .
En consecuencia cuando b se expresa en centmetros y c en moles por litro. A = E bc Donde A representa la absorbancia del compuesto
La absorbancia es directamente proporcional a la longitud del recorrido b a travs de la solucin y la concentracin c del color absorbente. Estas relaciones se dan como:
A = abc
A menudo b es dada en trminos de cm. y c en gramos por litro, entonces la absortividad tiene unidades de lg1cm1.
A = bc
A = abc
A = A1 + A2 + A3 + ........... + An = 1 b c1 + 2 b c2 + 3 b c3 + ......... + n b cn
Con base en que la Absorbancia guarda una relacin lineal con la concentracin, se comprende la existencia de una relacin de proporcionalidad entre la Absorbancia y la concentracin:
A1 / A2 = C1 / C2
Donde: A1 = Absorbancia del problema. A2 = Absorbancia de un estndar de concentracin conocida. C1 = Concentracin del problema. C2 = Concentracin del estndar. Si despejamos C1 = Conc del problema
La absorbancia es directamente proporcional a la longitud del recorrido b a travs de la solucin y la concentracin c del color absorbente. Estas relaciones se dan como:
A = abc
A menudo b en trminos de cm. y c en gramos por litro, entonces la absortividad tiene unidades de lg1cm1.
B) Limitaciones Qumicas
Se produce cuando el analito se disocia, asocia o reacciona con el disolvente para dar productos que presentan propiedades de absorcin diferentes de las del analito.
HIn H+ + In-
Color 1
Color 2
Ejemplo de curva patrn para la determinacin de safranina; donde se solubiliza este colorante nicamente en agua siendo por tanto el agua misma el tubo blanco o de referencia para la calibracin del equipo (colormetro o espectrofotmetro)
TUBO 1 2
Agua Destilada ml
0 0.05
10 9.95
3
4 5 6
0.10
0.20 0.40 0.80
9.9
9.8 9.6 9.2
En este ejemplo de determinacin de Glucosa, en la preparacin de los tubos para la lectura de la curva patrn, se incluyen ms elementos y por lo cual el tubo blanco (0) contiene todos los componentes excepto la glucosa con el fin de de poder calibrar la absorbancia del equipo a cero
Compuesto Glucosa 0,1 mg/ml (mL) Agua destilada (mL) Fenol al 5% (mL) Acido sulfrico (mL)
(blanco)
un colorante es una combinacin de estructuras no saturadas conteniendo ciertos grupos conocidos como Cromforos y Auxocromos
Un cromforo es la parte o conjunto de tomos de una molcula responsable de su color. Tambin se puede definir como una sustancia que tiene muchos electrones capaces de absorber energa o luz visible, y excitarse para as emitir diversos colores,
Los cromforos se presentan casi siempre en una de dos formas: sistemas conjugados pi o complejos metlicos . En la primera forma, los niveles de energa que alcanzan los electrones son orbitales pi generados a partir de series de enlaces simples y dobles alternados, como sucede en los sistemas aromticos . Entre los ejemplos ms comunes podemos encontrar a los colorantes retinianos, (usados en el ojo para detectar la luz), varios colorantes de alimentos, colorantes azoicos para tela, licopeno, caroteno, y antocianinas.
Auxocromo
un auxocromo es un grupo funcional que no absorbe por si solo en la regin del ultravioleta pero que tiene los efectos de desplazar picos de los cromforos hacia longitudes de onda larga adems de aumentar sus intensidades. Muchos de estos grupos o radicales, son cidos y bases que originan colorantes cidos y bsicos, y que fijan eficazmente el colorante.
a)
b)
1
1
2
ESPECTROFOTMETROS
* Instrumento empleado para medir la absorbancia que utiliza un selector monocromtico para seleccionar la longitud de onda.
* Puede usarse en la regin UV, Vis e IR. * Pueden ser de un solo haz o de doble haz.
Fuentes :
Fuentes de Energa
lmpara de deuterio (UV) 160- 380 nm fuente de tungsteno (W) Se usa en VIS e IR prximo produce luz en intervalos de 3502200 nm
Requisitos: Intensidad de radiacin elevada. Emitir en un amplio rango de l (emisin continua). Intensidad constante con el tiempo.
Se basa en la incasdencencia, emite luz en el visible e IR cercano desde 350-2500 nm regida por las leyes de emisin del cuerpo negro. La radiacin emitida depende de la temperatura.
Selectores de
Utilizan placas de colores que absorben la luz que no interesa que llegue al detector
Filtros de interferencia: La luz atraviesa la superficie Una vez dentro su reflexin es funcin del espesor. Se generan interferencias destructivas y constructivas, que slo dejan atravesar el material determinados tipos de
Filtros de interferencia: Se basan en las interferencias pticas para obtener una banda de ls relativamente estrecha. Anchura de banda efectiva: 5-10 nm. Se construyen con un dielctrico transparente, CaF2 MgF2, que ocupa el espacio entre dos pelculas metlicas semitransparentes muy delgadas, generalmente de Ag. Todo ello colocado entre dos
Filtros de interferencia
Ventajas: *permiten seleccionar un rango de s *son relativamente baratos Desventajas: *dispersiones de valores altos de la luz debe atravesar el prisma, lo que limita los valores de a usar. ( luz no absorbida)
Los monocromadores , que pueden ser de diversos tipo: prismas, redes de Difraccin..etc, constituyen una buena alternativa. PRISMA Se fundamenta en las leyes de difraccin: diferentes longitudes de onda refractan en ngulos diferentes
Selectores de Un buen selector debe: * ser capaz de seleccionar una determinada en un momento dado * explorar un determinado rango de longitudes de onda * hacer que lleguen al detector las longitudes deseadas El sistema de filtros, que es sencillo y barato no permite mas all de seleccionar un determinado ancho de banda.
Redes de difraccin
*Son la alternativa al uso de prismas en la instrumentacin actual *Consisten en una superficie pulida que posee una serie de hendiduras o grabados en paralelo en su interior: Se caracterizan por el nmero de lneas o grabados/mm: 300-2000 lneas/mm (UV-VIS) 10-200 (IR)
Cuanto mas juntas estn las lneas, mejor dispersin de luz se obtiene y mejor ser la separacin de longitudes de onda
Redes de difraccin
FOTOTUBO
Procesador de seal y lectura Es el ltimo componente bsico de instrumentacin Todo espectrofotmetro ha de disponer de: 1-Sistema de amplificacin propia que produzca una seal medible 2. Un sistema procesador de la seal, que permita eliminar, promediar datos, proporcionar salida de lectura, dirigir la salida de la seal..etc 3. Una salida de la seal: digital,registrador..etc 4. Tener cierta capacidad de procesar nmeros Veamos el diseo completo de algunos espectrofotmetros: De simple haz (monohaz) De doble haz Multicanal
MCI
Para medir Luz Visible
Spectronic 20 D
Spectrnic 20