OXIDAES BIOLGICAS: Cadeia respiratria e fosforilao oxidativa

Transporte de ltrons e fosforilao oxidativa

1234Introduo Formas de formao de ATP Mitocondria caractersticas gerais componentes da cadeia xido reduo: conceitos, organizao dos componentes da
cadeia de acordo com seus potenciais de xido reduo

5 - Esquema geral de funcionamento da cadeia de transporte de e6 - Inibidores e desacopladores do Sistema 7 - Produo de ATP por molcula de glicose
Aproveitamento de NADH citoplasmtico atravs de lanadeiras

8 - Produo de calor 9 - Regulao do Sistema

Metabolismo: integrao entre catabolismo e anabolismo

Estgio 1 Catabolismo de protenas lipdeos e carboidratos Produo de Acetil-CoA

Estgio 2
Oxidao de Acetil-CoA

mitocndrias

Estgio 3

Transporte de eltrons e fosforilao oxidativa

Localizao da gliclise e do ciclo de Krebs (tricarboxilicos ou dos cidos ctricos) e do transporte de eltrons e fosforilao

Citoplasma

Interior da mitocndria

Transporte de ltrons e fosforilao oxidativa

1234Introduo Formas de formao de ATP Mitocondria caractersticas gerais componentes da cadeia xido reduo: conceitos, organizao dos componentes da
cadeia de acordo com seus potenciais de xido reduo

5 - Esquema geral de funcionamento da cadeia de transporte de e6 - Inibidores e desacopladores do Sistema 7 - Produo de ATP por molcula de glicose
Aproveitamento de NADH citoplasmtico atravs de lanadeiras

8 - Produo de calor 9 - Regulao do Sistema

A variao de energia livre na hidrlise do ATP grande e negativa

Os produtos formados na hidrlise do ATP so mais estveis porque fazem ressonncia e apresentam menos repulso eletrosttica

A hidrlise diminui a repulso entre as cargas

Estabilizao por ressonncia

Ionizao

Existem duas formas de formao do ATP

(nos animais)

1 Fosforilao ao nvel de Substrato 2 Fosforilao atravs da cadeia transportadora de eltrons acoplada a fosforilao

Gliceraldeido 3-fosfato desidrogenase

(1)

Produto desta reao contm energia para fosforilar ADP em ATP

Enzima da via glicoltica

NADH produzido no citoplasma* Destino do NADH em meio aerbico e meio anaerbico

Fosforizao ao nvel de substrato

(1)

Converso do succinil-CoA em succinato Etapa de fosforilao da enzima GTP ou ATP (G = 0)

Mecanismo da reao da succinil-CoA sintetase

Inicialment e o succinilCoA se liga enzima succinil-CoA sintetase.

No passo 1, um grupo fosforil ocupa o lugar da CoA no succinil-CoA ligado a enzima, formando um composto acila-fosfato de alta energia. No passo 2, o succinil-fosfato cede seu grupo fosforil para um resduo de histidina da cadeia polipeptdica da enzima, formando um derivado de alta energia. No passo 3, o grupo fosforil transferido desse resduo de His para o grupo fosfato terminal da molcula de GDP (ADP) formando GTP (ATP).

Transporte de ltrons e fosforilao oxidativa

1 - Introduo 2 - Formas de formao de ATP 3 - Mitocondria caractersticas gerais componentes da cadeia 4 - Esquema geral de funcionamento da cadeia de transporte de e5 - xido reduo: conceitos, organizao dos componentes da
cadeia de acordo com seus potenciais de xido reduo

6 - Inibidores e desacopladores do Sistema 7 - Produo de ATP por molcula de glicose

Aproveitamento de NADH citoplasmtico atravs de lanadeiras

8 - Produo de calor 9 - Regulao do Sistema

OXIDAES BIOLGICAS: Cadeia respiratria e fosforilao oxidativa

Estrutura da mitocondria
Membrana externa Membrana interna Matriz mitocondrial

Estudo dos componentes da membrana mitocondrial

Complexos protecos transportadores de eltrons

O que so grupos prostticos?

COMPONENTES DA CADEIA RESPIRATRIA

COMPLEXO I: recebe eltrons do NADH COMPLEXO II: recebe eltrons do FADH2 UBIQUINONA (Q) COMPLEXO III CITOCROMO c e COMPLEXO IV

FOSFORILAO OXIDATIVA DO ADP

4H+

4H+

2H+

Fumarato Succinato

O2 H2O

NADH

NAD+

Nucleotdeos: transporte energia

2H+
Cit c Espao intermembran a

4H+ 4H+

F1 Fo

Matriz

H2O

Fumarato Succinato

1/2 O2 + 2H+

H+
F0 F1

NADH + H+ NAD+

ADP + Pi

H+

H+ H+

H+ H+ + H+ H

H+

Espao intermembrana

Matriz

ATP

H+

HPO4

2-

NH2 N
OO H

Ligaes fosfoster

NH2 N

N N N
-O

+
O-

Ligaes fosfoanidrido

N
OO H

OO

OO

H O

P O P O CH2 O
O H H O H H O H

P O P O P O CH2 O
H H O H H O H

+
H2O

ADP

ATP

O gradiente eletroqumico de prtons gerado durante o transporte de eltrons usado para sntese de ATP atravs do complexo ATPsintase

Modelo mostrando a sntese de ATP

Protenas transportadoras de eletrons
Protenas integrais e perifricas Extruso de prtons Complexo ATP sintase

Gradiente qumico
Gradiente eltrico Gradiente eletroqumico

Transporte de ltrons e fosforilao oxidativa

12345Introduo Formas de formao de ATP Mitocondria caractersticas gerais componentes da cadeia Esquema geral de funcionamento da cadeia de transporte de exido reduo: conceitos, organizao dos componentes da
cadeia de acordo com seus potenciais de xido reduo

6 - Inibidores e desacopladores do Sistema 7 - Produo de ATP por molcula de glicose

Aproveitamento de NADH citoplasmtico atravs de lanadeiras

8 - Produo de calor 9 - Regulao do Sistema

Potencias de xido-reduo

Reaes de xido-reduo
Ared Aox + eoxidao
As formas oxidada e reduzida do composto (Ared / Aox ) constituem um sistema chamado par redox.

Box + eAred + Box

Bred

reduo reao de xido-reduo

Aox + Bred

Nas reaes de xido reduo biolgicas, os eltrons transferidos so geralmente acompanhados de prtons ou seja h transferncia de tomos de hidrognio:

AH2 +
(red)

B
(ox)

A + BH2
(ox) ( red)

A tendncia do par redox (Ared / Aox ) em perder ou ganhar eltrons

expressa pelo seu potencial de xido-reduo, representado por E que depende das espcies envolvidas e das concentraes da forma oxidada e reduzidas das espcies.

Potenciais de Oxido-redues
Fe+3 + Cu+

Fe+2 + Cu+2

Fe+3 + e- Fe+2 (reduo) Cu+ Cu+2 + e- (oxidao) Potencial de reduo padro (E0)
2 H+ + 2eNAD+ + H+ + 2eH2 (referncia) NADH (teste)

Potencial de reduo padro bioqumico (E0)

2 H+ + 2eH2 (referncia) E=0V NAD+ + H+ + 2eNADH (teste)

Clula eletroqumica de referncia. H2 gasoso a presso de 101 KPa e 1M de H+

Clula teste contendo 1M das espcies reduzida e oxidada do par redox em exame

E0 = - 0,320 V

 Uma vez conectadas as meias clulas, os eltrons fluem de uma meia clula para outra Se a reao se proceder na seguinte direo: X- + H+ X + H2 Nas meias clulas as reaes sero: XX + eH+ + e H2 Os eletrons fluem da meia clula onde est a substncia teste (X) para a meia clula de referncia ( padro) Dessa forma , o eletrodo negativo em relao ao eletrodo padro. O potencial redox do par H+: H2 definido como sendo 0 V (volts) Potencial negativo significa que um substrato tem menor afinidade por eltrons do que H2 Potencial positivo significa que um substrato tem maior afinidade por eltrons que H2

OXIDAO DO NADH AT OXIGNIO

Potenciais de xido-reduo

NAD+ + H+ + 2e-

NADH

Eo' = - 0,32V

O2 + H+ + 2e-

H2O

Eo' = + 0,82V

A reao acontecer da seguinte forma:

O2 + NADH + H+ H2O + NAD+ Eo' = +1,14 V

Eo' = Eo' do oxidante - Eo' do redutor = 0,82 - ( - 0,32) = 1,14 V Aplicando a equao:
Go' = - nF.Eo' = -2 x 96.500 x [0,82 - (- 0,32)] = - 220 kJ /mol

 Um forte agente redutor, como NADH e FADH2 tem potencial redox negativo Um forte agente oxidante, como O2 , tem potencial redox positivo A variao de energia livre de uma reao de oxido-reduo pode ser facilmente calculada somente avaliando a diferena de potencial redox dos reagentes e produtos.

Protenas transportadoras de eletrons

Complexo I= NADH desidrogenase Complexo II= succinato desidrogenase Complexo III= ubiquinona: citocromo c oxidoredutase Citocromo c Complexo IV= citocromo oxidase

NADH: ubiquinona oxidoredutase

NADH desidrogenase (FMN) + 2H+ + 2eNADH desidrogenase (FMNH2) flavina mononucleotdeo derivado da riboflavina (vitamina B2) Os centros Fe-S no recebem protons , so transportadores de eletrons. Fe3+ para Fe2+. Os protons so transferidos para o espao intermembrana. Primeira etapa na formao do gradiente de prtons.

Complexo II tambm chamado de succinato desidrogenase. A enzima succinato desidrogenase faz parte do complexo

Grupo prostticos: FAD e centros Fe-S Eletrons so transferidos do succinato ao FAD, aos centros Fe-S e depois para a ubiquinona (Q).

Outras desidrogenases: acil-CoA desidrogenase da -oxidao transfere os eletrons para a enzima transferidora de eletrons (ETF) que tem o FAD como grupo prosttico e depois para a ETF: ubiquinona oxidoredutase e finalmente para a ubiquinona.

Aproveitamento do NADH do citosol gerado na gliclise

Coenzima Q ou ubiquinona

Cadeia lateral composta de unidades isoprnicas. No uma protena. Naureza hidrofbica = mobilidade na fase lipdica da membrana. Recebe 2 protons e dois eletrons e se torna reduzida (ubiquinol).

O ion Ferro presente no grupo heme o responsvel pela capacidade de transferncia de eletrons destas protenas, alternado seu estado de oxidao de Fe+2 e Fe+3. O grupo heme varia de citocromo para citocromo conforme seus grupos substituintes. Tambm diferem quanto aos ligantes axiais do ion ferro.

Complexo citocromo bc1 ou ubiquinona: citocromo c oxido redutase (complexo III)

Constitudo de dois citocromos b (b562 e b566), por um centro Fe-S e pelo citocromo C1. Os eletrons da coenzima Q so transferidos para o complexo III e os prtons so transferidos para para o espao intermembrana.

Stios de ao de drogas que inibem a fosforilao oxidativa: antimicina e mixotiazol.

Complexo IV: transfere eletrons para o oxignio. Tambm chamado de citocromo c oxidase. Apresenta dois citocromos do tipo a (a e a3) e dois ons cobre, cada qual associado a um dos dois citocromos. Estados de oxidao do cobre: Cu+2 e Cu+1. O complexo IV responsvel pela doao de quatro eletrons para a molcula de oxignio, que ligando-se aos prtons do meio converte-se em H2O. 95% de todo oxignio consumido utilizado nesta operao e so produzidos cerca de 300 ml de gua, chamada de gua metablica (humanos). Animais que hibernam e animais que passam longos perodos sem ingerir gua (camelos) utilizam a gua metablica.

O G (fora prton-motora) resultante do gradiente qumico e do gradiente eltrico, capaz de realizar a sntese de ATP.

A PRODUO DE ATP ENZIMTICA

Complexo ATP sintase compreende dois componentes: cada componente constitudo de vrias cadeias polipeptdicas. Uma poro, esfrica, chamada de fator de acoplamento 1 (F1) que contm os stios de sntese de ATP. A segunda poro fica embebida na membrana interna mitocondrial interna, constituindo um canal para a entrada de prtons (Fo ) assim chamado porque contm um stio de ligao para a oligomicina, um inibidor da ATP sintase.

COMPONENTES DA FoF1ATPase

Transporte de ltrons e fosforilao oxidativa

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cadeia de acordo com seus potenciais de xido reduo

5 - Esquema geral de funcionamento da cadeia de transporte de e6 - Inibidores e desacopladores do Sistema 7 - Produo de ATP por molcula de glicose
Aproveitamento de NADH citoplasmtico atravs de lanadeiras

8 - Produo de calor 9 - Regulao do Sistema

ADP e Pi so substratos para a ATP sintase. Succinato o substrato da Succinato Desidrogenase Cianeto uma droga que inibe a

citocromo c oxidase (inibe o

transporte de eltrons)

Venturicidina e oligomicina inibem o complexo Fo (inibem a ATP sintase).

DNP um carreador de prtons hidrofbicos (desacoplam a Fosforilao do transporte de eltrons).

Desacopladores: so
compostos que dissociam o transporte de eltrons da sntese de ATP.

Exemplo: DNP e FCCP dissipam o gradiente de prtons.

Adenina nucleotdeo translocase e fosfato translocase

A produo de ATP acontece interligada a processos de transporte

ATP/ADP =

ATP/ADP =

Transporte de ltrons e fosforilao oxidativa

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cadeia de acordo com seus potenciais de xido reduo

5 - Esquema geral de funcionamento da cadeia de transporte de e6 - Inibidores e desacopladores do Sistema 7 - Produo de ATP por molcula de glicose
Aproveitamento de NADH citoplasmtico atravs de lanadeiras

8 - Produo de calor 9 - Regulao do Sistema

NADH via lanadeira glicerol fosfato = 1,5 ATP NADH via lanadeira malato-aspartato = 2,5 ATP NADH = 2,5 ATP FADH2 = 1,5 ATP

Aproveitamento do NADH do citosol gerado na gliclise

Lanadeira malato-aspartato

Transporte de ltrons e fosforilao oxidativa

1234Introduo Formas de formao de ATP Mitocondria caractersticas gerais componentes da cadeia xido reduo: conceitos, organizao dos componentes da
cadeia de acordo com seus potenciais de xido reduo

5 - Esquema geral de funcionamento da cadeia de transporte de e6 - Inibidores e desacopladores do Sistema 7 - Produo de ATP por molcula de glicose
Aproveitamento de NADH citoplasmtico atravs de lanadeiras

8 - Produo de calor 9 - Regulao do Sistema

FORMAO DE CALOR (tecido adiposo marron)

Esta protena que tem a sigla em ingls de UCP, a principal produtora de calor em mamferos. Ocorre principalmente em animais que hibernam. Tambm tem relao com diferenas no metabolismo entre as diferentes pessoas. A energia derivada do transporte de eltrons liberada como calor.

UCP

Regulao do Sistema Transporte de eltrons e a sntese de ATP so processos intimamente relacionados.

Os substratos deste processo so: coenzimas

reduzidas, oxignio, ADP e Pi.

O limitante destes processos a concentrao

de ADP. Da o regulador mais importante. A regulao da velocidade de oxidao das coenzimas exercida pela concentrao de ADP chama-se controle respiratrio.

As vias que dependem da reciclagem das

coenzimas oxidadas pela cadeia de transporte de eltrons (por exemplo, o ciclo de Krebs) dependem da razo ATP/ADP. O prprio ADP participa das regulaes das enzimas alostricas.