TINCIONES EN MICROBIOLOGIA

ALICIA NOEMI GARCIA TOVAR 20 DE SEPTIEMBRE DE 2011

Fundamentos de las tcnicas de tincin.

Es muy difcil ver las

bacterias en el microscopio, principalmente por la falta de contraste entre ellas y el medio que las rodea. Los colorantes son el medio ms simple de aumentar el contraste. Los colorantes pueden usarse para distinguir entre bacterias diferentes o para revelar algunas estructuras celulares como flagelos, esporas, cpsulas o paredes.

Fundamentos de las tcnicas de tincin continuacin

Previo a realizar la tincin es necesario fijar las

muestras, (coagulacin del protoplasma). Una vez que el frote ha sido fijado, no se producen cambios en el protoplasma de las bacterias al agregar el colorante. En microbiologa la fijacin generalmente se fija con calor, pero tambin pueden usarse sustancias qumicas como formaldehdo, alcoholes y cidos.

Fundamentos de las tcnicas de tincin continuacin

Los colorantes son sustancias que tienen alguna

afinidad especfica por los componentes de la clula. Algunos colorantes son molculas cargadas positivamente, (cationes) y se combinan con constituyentes celulares cargados negativamente, (cidos nucleicos), ejemplo, azul de metileno y cristal violeta y safranina. Otros colorantes son molculas cargadas negativamente (cationes) y se combinan con los componentes cargados positivamente como las protenas, ejemplo, eosina, fucsina cida y rojo congo.

Fundamentos de las tcnicas de tincin continuacin

Otro

grupo de colorantes son sustancias liposolubles que se combinan con los materiales lipdicos de la clula. Se usan para revelar gotculas de grasa. Ejemplo: Negro de Sudn B. Algunos colorantes tien mejor si la clula ha sido tratada con un mordiente, que reacciona con los constituyentes celulares alterndolo de tal modo que entonces si puede entrar el colorante, ejemplo, lugol.

Fundamentos de las tcnicas de tincin continuacin

Tincin negativa: es un

tipo de tincin a la inversa del proceso usual, las clulas se quedan sin teir, pero se colorea el medio que las rodea. El colorante que se utiliza es opaco y sin ninguna afinidad por los constituyentes celulares, ejemplo la tinta china. Su mayor utilidad radica en que revela las cpsulas.

Fundamentos de las tcnicas de tincin continuacin

Las molculas de colorante forman en ocasiones

precipitados o agregados que parecen estructuras celulares autnticas. Tales estructuras se denominan artefactos y se debe ser muy cuidadoso para no confundirlas con estructuras de inters.

La tincin de gram.

La tincin de gram continuacin

Procedimiento:
Previo al proceso de

Proceso de tincin:
Colorantes: 1. Cristal violeta (1

tincin: Realizar un frote con suficiente material sin llegar a engrosar demasiado la muestra. Fijar el frote con calor.

minuto)/lavar . 2. Lugol (1 minuto)/lavar. 3. Alcohol-acetona (2-3 segundos)/lavar. 4. Safranina (1 minuto)/lavar.

La tincin de gram continuacin

Desarrollada por Christian Gram en 1944.

En base a su reaccin a la tincin de gram, las

bacterias puedes dividirse en: Gram positivo Gram negativo Esta diferencia en la coloracin se debe a diferencias constitutivas en la estructura de las paredes celulares.

La tincin de gram continuacin

El peptidoglicano es la sustancia que le da

rigidez a las paredes bacterianas. La pared de las bacterias gram positivo es gruesa y consta de varias capas de peptidoglicano (80 a 90%) y cido teoico. La membrana de la bacteria gram negativo es delgada, con menos peptidoglicano, (10 a 20%), sin cido teoico y algunos fosfolpidos, lipopolisacaridos y protenas.

La tincin de gram continuacin

Los organismos gram positivo no se decoloran,

mientras que los gram negativo si lo hacen. La diferencia esencial est por tanto en su resistencia a la decoloracin. Esta resistencia se debe probablemente al hecho de que en el caso de bacterias gram-negativas, la mezcla de alcohol/acetona es un solvente lipdico y disuelve la membrana exterior de la pared de la clula y tambin puede daar la membrana citoplsmica a la que se une peptidoglicano.

La tincin de gram continuacin

La delgada capa de peptidoglicano es incapaz de

retener el de complejo cristal violeta-yodo y la clula se decolora. Las clulas grampositivo a causa de sus paredes celulares ms espesas (tienen ms peptidoglicano y menos lpido), no son permeables al disolvente ya que ste deshidrata la pared celular y cierra los poros, disminuyendo as el espacio entre las molculas y provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado.

La tincin de gram continuacin

Despus de la decoloracin las clulas gram

positivo son todava azules, pero las gram negativo son incoloras. Para poner de manifiesto las clulas gram negativo se utiliza una coloracin de contraste. Habitualmente es un colorante de rojo, como la safranina o la fucsina bsica. Despus de la coloracin de contraste las clulas gram negativo son rojas, mientras que las gram positivo permanecen azules.

Aspectos importantes en la tincin de gram

El tratamiento con cristal violeta debe preceder al tratamiento con yodo. El yodo por s solo tiene poca afinidad con las clulas. 2. La decoloracin debe realizarse con poca agua para evitar que pierdan la tincin las clulas grampositivas. EI proceso de decoloracin debe ser corto y es esencial un clculo preciso del tiempo para obtener resultados satisfactorios. 3. Los cultivos de ms de 24 horas pueden perder su habilidad de retener el complejo cristal violeta yodo. 4. El carcter de grampositivo no es siempre un fenmeno del todo o nada. Algunos organismos son ms grampositivos que otros y algunos son gramvariables, es decir, unas veces grampositivos y
1.

Morfologa bacteriana.
La tincin de gram aporta dos ideasorientadoras en la clasificacin de las bacterias: 1. El color: Gram positivo/Gram negativo 2. La forma: cocos, bacilos, cocobacilos Cocos: Bacterias de forma esfrica Bacilos: Bacterias alargadas, en forma de bastn.

Morfologa bacteriana continuacin

Cocos:

La divisin celular

ocurre a lo largo del mismo plano. Diplococos: dos cocos juntos. Estreptococos: 4-20 cocos en cadenas.

Morfologa bacteriana continuacin

La divisin celular

ocurre en dos planos distintos: Tetradas. La divisin celular ocurre en tres planos distintos: Agrupacin irregular: estafilococos Agrupacin regular:sarcinas.

Morfologa bacteriana continuacin

Bacilos:

Forma alargada Cocobacilos: Bacterias cocoides, ligeramente alargadas.

Gracias.