APLICABILIDADE DA BIOLOGIA MOLECULAR

Medicina Legal e Diagnstico

MEDICINA LEGAL

Aplicao e elaborao de leis aspectos mdicos e biolgicos

Campos de atuao desenvolvimento de mtodos e tcnicas para percia de identificao mdico-legal

Identificar suspeitos ou falsos suspeitos crime ou paternidade

Marcadores genticos

Herana simples mendeliana Transmisso gentica bem estabelecida Presente ao nascimento ou logo aps Perene e imutvel Identificado por mtodos seguros e reprodutveis

MEDICINA LEGAL

Marcadores utilizados:

Antgenos Eritrocitrios

Sistema ABO, Rh, MNSs, Duffy, Kell-Cellano, XG

Protenas sricas Enzimas eritrocitrias Antgenos leucocitrios humanos HLA Escolha:

Quanto maior o polimorfismo Frequncia maior que 1% Condio do laboratrio em realizar o exame Qualidade do material biolgico

MEDICINA LEGAL
Exemplo de escolha de marcador:

Sistema ABO:

Sistema HLA:

4 fentipos e 6 gentipos:

A IAIA, IAi B IBIB, IBi AB IAIB O ii

Locus A: 59 variaes Locus B: 118 variao Hapltipos transmitidos em bloco

GENTICA MOLECULAR

Manipulao do DNA in vitro DNA genmico igual em qualquer clula

Me e Pai

Estudo:

Enzimas de restrio Amplificao PCR Eletroforese

Migrao para polo POSITIVO Fragmentos maiores X menores Concentrao de agarose PM de DNA conhecidos Brometo de etdio UV

TIPOS DE DNA

Genoma Humano = 3 bi pares de base

75% sequncias simples

2 a 3% genes

25% DNA repetitivo (sequncias em tandem)

Repeties em tandem de nmero varivel (VNTR) DNA satlite maioria prximos aos centrmeros DNA minissatlite presente nos telmeros DNA microssatlite mais frequente ao longo de todo o genoma VNTR posies constantes N de sequncias polimrfico

DNA extranuclear mitocndrias

Herana materna

POLIMORFISMO DE DNA

Identificao de polimorfismos:

Sondas:

Sondas multiloci hibridizam em mltiplos loci Sondas singlelocus hibridizam em regies especficas Digesto enzima de restrio especfica Separao Eletroforese em gel de agarose Identificao sondas de DNA para regies conhecidas de VNTRs Revelao identificao de diversas bandas VNTRs so transmitidos de maneira independente Chance de 2 indivduos com o mesmo padro de banda = 5 x 10-19 ou 1 em 300 bilhes Grande quantidade de DNA ntegro

Anlise:

Interpretao:

Problemas:

POLIMORFISMO DE DNA

Atualmente:

Amplificao do DNA PCR

Quantidade mnia de DNA degradado Regio a ser amplificada ntegra Material misturado com DNA da vtima Dois ou mais agressores Material no humano

Anlise de loci nicos de DNA STR ou repeties em tandem curtas

STR menos informativo que o sistema ABO

13 marcadores polimrficos diferentes

POLIMORFISMO DE DNA

Melhoramento da Anlise por Automao

PCR com primers ligados a corantes fluorescentes amplificando regies de STR

PCR Multiplex

15 ou mais locais de STR podem ser amplificados simultaneamente

Excluso

Incluso

IDENTIFICAO DE DNA PATOLGICOS

Pesquisa de um DNA estranho: Hepatite B

No sangue: Dot Blot Tecido heptico

Pesquisa de um DNA anormal: Cncer

Mutao pontual PCR e sondas complementares

Doenas Hereditrias: Anemia Falciforme

Mutao simples Eletroforese da hemoglobina Southern Blot

Ensina de restrio MstII CCTNAGG Separa o gene da globina em 3 nveis 2 fragmentos: 1,15 e 0,20 kb Mutao: sem reconhecimento 1 fragmento 1,32 kb Eletroforese e Transferncia Sonda especfica