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Taller #1
De la toma de la muestra a la identificacin un reto de todos los das

Primera clasificacin
Comportamiento en presencia o ausencia de oxigeno
1. 2. 3. 4.

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Aerobias: Anaerobias Aerobias facultativas Microaerofilicas

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Aerobias

BNF, y tambin la familia de los Vibrio.

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anaerobias
Los

Clostridium y los Bacteroides. Clostridium tetani

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Anaerbicas facultativas
Enterobacterias Klebsiella pneumoniae

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Microaerofilicas
Neisserias,

campylobacter

Identificacin con pruebas convencionales

Tinciones

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: Simples : (Tinta china, Azul Metileno de Loeffler, Azul de lactofenol). Diferenciales: Los ejemplos clsicos sera la tincin de GRAM o la de Ziehl-Neelsen.

Tinciones

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Condiciones ambientales

Placas o medios de cultivo

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Los medios de cultivos son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas y en condiciones fsicas optimas, permite el crecimiento de los microorganismos .

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Pruebas Bioqumicas
Las

pruebas bioqumicas consisten en distintos test qumicos aplicados a medios biolgicos, los cuales, conocida su reaccin, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes. oxidasa, catalasa y coagulasa.

Ejemplos:

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Metodologa Actual
Kits

rpidos

Mtodos

semiautomatizados
Pruebas

convencionales (Microorganismos fastidiosos) serolgicas de Biologa Molecular

Pruebas Tcnicas

Para lectura de Pruebas Bioqumicas Deben utilizarse los mismos

Mtodos Convencionales para Identificacin de Bacterias

procedimientos y medios en los que se basan las tablas. reacciones presentes en la tabla deben estar en un intervalo de confianza arriba del 90% para que sean significativas.

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Las

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Bacilos Gram Negativos no Fermentadores (BNF) su Factores que dificultan

identificacin:
Bacterias

poco frecuentes. El personal no esta familiarizado con BNF. Algunos BNF desarrollan lentamente. Algunos BNF tienen reactividad

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Pruebas Serolgicas
Laserologaes

el estudio que permite comprobar la presencia deanticuerposensangre. Campylobacter

Para

Agar kliger

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Medio de cultivo frecuentemente usado en microbiologa de alimentos para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa y lactosa, y a la produccin de cido sulfhdrico.

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Catalasa

TCBS

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Pruebas Bioqumicas
Fermentacin

de hidratos de carbono

Mas utilizados

Arabinosa Sacarosa Manitol Xilosa Glucosa lactosa

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citrato

Pruebas de Indol

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Rojo de Metilo

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Voges Proskauer

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Pros kaue

Descarboxilacin de aminocidos

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Produccin de cido sulfhdrico

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Desaminacin de fenilalanina

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Reduccin de Nitratos

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Prueba de Oxidasa

Catalasa

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DNAsa

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Ureasa

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Pruebas de Identificacin Rpidas Para Bacilos Gram negativos.

oxidasa

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Indol (prueba de la mancha)

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onpg
Deteccin

de b-galactosidasa (onitrofenil-b-D-galactopiranosido)

MUG
Deteccin

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de b-glucoronidasa (metilumbeliferil-b-D-glucoronido)

Kits de Identificacin Rpidos

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OMP, NGP, Weetaps (Enterobacterias, 8 pruebas enzimaticas, adicionando ureasa)

A partir de colonias en agar:

El CPS ID 2 (Para IVU, se puede realizar la prueba de indol, detecta b-glucoronidasa y b-galactosidasa). El Rainbow UTI System (Reac. Cromognicas con tiras de papel filtro).

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E. COLI SCREEN (Carr-Scarborough) Lyfo-Kwik OMI (MicroBiologics) MUG Disk (Remel Inc) MUG Plus (Difco Laboratories)

Estos mtodos se basan en el hecho de que la mayora de cepas de E. coli son rpidamente positivas para indol, ONPG (bgalactosidasa) y MUG (b-glucoronidasa).

Sistemas de Identificacin Comerciales

API 20E (Biomeriux) API Rapid 20E API NFT Enterotube II (BD) Minitek (BD) Oxi/Ferm II (BD) Micro ID (Remel) Rapid ID SS/u (Remel)

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API 20E

Enterotub e II

Minite k

RAPID ONE

RAPID NF

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Sistemas Automatizado s

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Sensititre ARIS

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Vitek 2 Compact 30/60

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MicroScan WalkAway 40/96

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Phoenix 100

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VENTAJAS

Interface con computadoras. Ahorro de tiempo. Minimiza errores de transcripcin. Acceso a funciones computarizadas. (Suma de resultados, reportes epidemiolgicos, antibiogramas etc)

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ALGUNAS DESVENTAJAS

En Microorganismos fastidiosos o BNF. Microorganismos de lento crecimiento. Microorganismos que presentan reacciones dbiles. Algunos Microorganismos no estn en la base de datos.

Mtodos de Identificacin Comercial para bacterias productoras de Diarrea

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Ac inmunofluorescentes para E. coli O157. Premier EHEC (Toxina shiga VT1 y VT2). InmunoCard STAT E. coli O157 plus (cultivos) Deteccin de Ag de E. coli O157 (Antisuero, ELISA, aglutinacin en latex). E. coli ST IEA (ELISA, toxina termoestable, Denka Seiken Co). VET RPLA (Aglutinacin en latex, Toxina Termolbil de E. coli y V. cholerae, Oxoid).

Infeccin por Campylobacter jejuni

Despus de 3 das Fiebre elevada Diarrea con sangre Dolor abdominal Colitis ulcerativa Complicaciones: Artritis reactiva (60%). Sndrome Guillain-Barr (38%). Sndrome urmico-hemoltico (5%).

Identificacin de Campylobacter jejuni

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Tiene forma de espiral o coma, Gram negativo Requiere de medios especiales (antibiticos y factores de crecimiento) Atmsfera de 5 - 10% CO2 Temperatura de 42C

Identificacin de Campylobacter jejuni

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Cultivo: Agar CCDA, caldo Preston, 48h. 42 C. Tincin dbil al Gram Prueba de oxidasa y del Hipurato de sodio positivas. No fermentan ni oxidan los carbohidratos. INDX Campy y Campy Slide (Aglut. En latex). ProSpect Microplate y RIM inmmuno (Heces).

Identificacin de Helicobacter pylori

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Deteccin de ureasa (Biopsa) Cultivo especial a 37 C, microaeroflia Deteccin de Ac IgG, IgA, IgM (ELISA) Prueba del aliento (Urea marcada con C13 o C14) Deteccin de DNA o RNAr

Identificacin de Haemophilus influenzae

Cocobacilos Gram negativos, oxidasa + Biotipos I VIII (Urea, Ornitina e indol, Kilian 1976) Serotipos capsulares a-f

Identificacin de Haemophilus influenzae

Requiere de factores V y X Cultivo en agar sangre de caballo o agar chocolate + factor V

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Prueba del satelitismo para H. influenzae

H. influenzae Influenzae Biotipo III Biotipo I H. influenza e

H.

XV V

H. parainfluen

H. aphrophilus H.ducreyi

Identificacin de Haemophilus sp

Bacteria
H. influenzae Biotipo I-VIII H. aegyptius H. parainfluenzae Biotipo I-VIII

Req. Req. Sacarosa Factor V Factor X

Ribosa

Xilosa

+ + + -

+ + +

+ -

+ + -

+ -

H. ducreyi

Identificacin de Neisseria sp

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Identificacin de Neisseria sp

Diplococos Gram negativos, oxidasa + Requieren de Fe++ y cistena 5-10% de CO2 Medios de cultivo: Thayer Martin, Martin Lewis, New York City

N. meningitidis

N.

Identificacin de Cocos Gram Negativos

Bacteria
Neisseria meningitis Neisseria gonorrhoeae Neisseria lactamica Neiserias comensales Moraxella catarrhalis

OX

A sangre T. Martin Glu

Lac

Mal

DNAsa

+ + + + +

V + +

+ + + V V

+ + + V

+ V

UtiIizacin Carbohidratos para Neisseria sp

CTR GLU MAL LAC SAC

Mtodo rpido: SSB (Sol. Salina balanceada pH=7) + rojo de fenol + gotas de carbohidratos al 20%, incubar a 35C y leer en 4 horas. Medio de CTA (Agar cistina tripticaseina) carbohidratos al 1%, rojo de fenol , incubar a 35C de 24 a 72

Neisseria sp
N. elongata

N. flavescen s

M. catarrhali s

Sistemas comerciales para Identificacin de Haemophilus sp y Neisseria sp

Utilizacin de Carbohidratos RIM Haemophilus, RIM Neisseria API-NH (bioMerieux, 24h, Neisseria sp, Haemophilus sp y M. catarrhalis) Gonobio test (IAF Production, rpido, N. gonorrhoeae) Neisseria Kwik test (Micro-Bio-Logics, 4h, Neisseria sp) API Quad-Ferm+ (bioMerieux, 2h, Neisseria sp y M. catarrhalis), serie de pozos: control, GLU,

Sistemas comerciales para Identificacin de Haemophilus sp y Neisseria sp

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Pruebas con enzimas cromognicas

BactiCard Neisseria (Remel, 4h, Neisseria sp y M. catarrhalis) Gonochek II (E-Y Laboratories, 30 min, Neisseria sp y M. catarrhalis) Neisstrip (Lab M Ltd Rpido, Neisseria sp)

Sistemas comerciales para Identificacin de Haemophilus sp y Neisseria sp

Pruebas inmunolgicas:

Ac fluorescentes test (Syva, N. gonorrhoeae) Coaglutinacin (Phadebact, Haemophilus influenzae, N. Meningtidis y N. gonorrhoeae) GonoGen I y II test (New Horizons Diagnostics, N. gonorrhoeae)

Sistemas Automatizados para Identificacin de Haemophilus sp y Neisseria sp

MicroScan (HIND)

Vitek (NHI Card)

Frotis de Gram y Utilidad: Coaglutinacin

Proporcionan al mdico un diagnstico presuntivo Se puede iniciar un tratamiento antimicrobiano

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