BIOTECNOLOGIA

BRUNO SILVRIO FERREIRA CLEITON DA SILVA OLIVEIRA KAMYLLA M. DOS SANTOS LUCAS EMANUEL N. GONALVES

IPAMERI, JUNHO DE 2011.

 Marcadores

Moleculares so etiquetas que identificam genes de interesse.

tcnica utilizada para produzir perfis moleculares atravs da amplificao(PCR) seletiva de fragmentos de restrio de diferentes comprimentos obtidos a partir da digesto(enzimas de restrio pr-definidas) de DNA genmico.

AFLP:

A tcnica baseia-se na propriedade de certas enzimas de restrio de deixar, aps a clivagem do DNA, extremidades coesivas de seqncia conhecida.

Construo de seqncias de nucleotdeos de fita dupla que se ligam s extremidades dos fragmentos de restrio, denominadas adaptadores.

Seqncia dos adaptadores e stio de restrio CONHECIDOS

Construo de Iniciadores Especficos

Pr-amplificao dos fragmentos de restrio.

 Os

primers seqncia complementar ao adaptador + seq. especfica do stio de restrio da enzima + extenso de nucleotdeos seletivos no terminal 3.

Na

fase de digesto, as duas enzimas(corte raro/corte freqente) podem ser usadas simultaneamente(digesto dupla) ou em duas etapas, caso no exista tampo de reao comum s duas enzimas.

 Submisso

do DNA eletroforese em gel poliacrilamida desnaturante.

perfis moleculares so revelados.

Os

Revela

polimorfismos causados por: - alteraes em bases no stio de restrio ou adjacncia. - delees, inseres e rearranjamentos que afetam o comprimento dos fragmentos de restrio.

 Alto No

rendimento de fragmentos de restrio;

demanda seqenciamento;
possibilidades de combinao;

Muitas Boa

reproducibilidade.

 Marcador

dominante.

 Anlise

de diversidade gentica; Identificao varietal; Seleo assistida; Ensaios de qualidade de mudas e sementes; Descobrimento de micro-satlites; Rpida construo e saturao de mapas moleculares; Integrao entre mapas fsicos e moleculares.

 Objetivos:

iniciar o estudo da diversidade gentica existente entre mini-roseiras utilizadas em cultivo comercial no Brasil mediante um teste de primers pelo marcador fAFLP.

 Principais

resultados: -Obteno de informaes teis ao manejo;

-Quantificao da variabilidade existente com tcnicas consistentes, resultados precisos(no influncia do meio).
-Tais resultados auxiliaro na definio de estratgias mais eficientes em programas de melhoramento gentico.

 Concluso:

-A tcnica molecular AFLP eficiente na identificao da variabilidade gentica existente entre mini-roseiras. -Trs pares de primers (E-ACA/M-CAG, EACA/M-CAC e E-ACA/M-CTG) so suficientes para caracterizar mini-roseiras.

 Objetivos:

-Estudar mediante a aplicao da tcnica de AFLP, a diversidade gentica de cultivares de videira e identificar marcadores associados resistncia ao mldio e ao odio.

 Principais

resultados: -Das amostras analisadas, somente aquelas correspondentes Gota de Ouro no apresentaram um perfil eletrofortico aceitvel. localizadas 236 marcas dissimilares como produto da anlise dos gis referentes s consideradas 14 melhores combinaes de primers.

Foram

Concluso:

-Os agrupamentos gerados por marcadores AFLP corresponderam classificao botnica das cultivares. -Os marcadores identificados por presena/ausncia em cultivares contrastantes para resistncia/suscetibilidade ao mldio e ao odio devem ser futuramente avaliados em bulks contrastantes de populaes que segreguem para suscetibilidade a estas doenas.

 Objetivo:

-Avaliar a diversidade gentica de isolados de C. guaranicola usando marcadores AFLP com o intuito de fornecer subsdios para o manejo da doena e melhoramento da cultura, baseado no conhecimento da variabilidade do patgeno.

 Resultados

e Discusses:

-grande plasticidade morfolgica um reflexo da grande variabilidade gentica que ocorre no gnero analisado.

-O estudo apresentou 97 bandas polimrficas;

Resultados e Discusses:

-A similaridade gentica variou de acordo com a procedncia dos isolados(variao intraespecfica) = variabilidade gentica. -O coeficiente de variao gentica entre os isolados = 0,0216 e a similaridade gentica entre todos os indivduos = 94,95%, indicando que os isolados pertencem mesma espcie, concordando com as observaes morfolgicas.

Consideraes Finais:
-Ainda so necessrios estudos adicionais para esclarecer a identidade taxonmica do agente causal da antracnose do guaranazeiro;

-De acordo com ONeill et al. (1997) a tcnica de AFLP pode facilitar a identificao de genes especficos associados com a especificidade por hospedeiro, virulncia e avirulncia, fornecendo subsdios para investigao de mecanismos geradores de variao gentica em fungos.

 Detecta

um maior nmero de locos; ampla cobertura do genoma;

Possibilita Baixo

custo por informao (loco);