ENZIMAS

Eng. Qumica Gisanara Dors

Estgio de Docncia

ENZIMAS - HISTRICO
Catlise biolgica incio sc. XIX digesto da carne: estmago; digesto do amido: saliva. Dcada de 50 Louis Pasteur - concluiu que a fermentao do acar em lcool pela levedura era catalisada por fermentos = enzimas. Eduard Buchner (1897) extratos de levedo podiam fermentar o acar at lcool; enzimas funcionavam mesmo quando removidas da clula viva.

ENZIMAS - HISTRICO
James Sumner (1926) Isolou e cristalizou a urease; Cristais eram de protenas; Postulou que todas as enzimas so protenas. John Northrop (dcada 30) Cristalizou a pepsina e a tripsina bovinas; Dcada de 50 sc. XX 75 enzimas isoladas e cristalizadas; Ficou evidenciado carter protico. Atualmente + 2000 enzimas so conhecidas.

ENZIMAS

Aminocidos: H

Definio: Catalisadores biolgicos; R C* COOH Longas cadeias de pequenas molculas chamadas aminocidos. NH2 Funo: Viabilizar a atividade das clulas, quebrando molculas ou juntando-as para formar novos compostos. Com exceo de um pequeno grupo de molculas de RNA com propriedades catalticas, chamadas de RIBOZIMAS, todas as enzimas so PROTENAS.

ENZIMAS PROTENA
Classificao protenas
Protenas globulares Protenas fibrosas Estrutura das protenas
Primaria Secundaria Terciria Quaternria

ENZIMAS Protenas globulares Estrutura terciria

Protenas com alto peso molecular, maioria entre 15 a 1000 Kilo Daltons Unit (KD) OBS: 1 Dalton = 1 unidade de peso molecular (AMU)

ENZIMAS ESTRUTURA
Estrutura Enzimtica

Holoenzima Protena Apoenzima ou Apoprotena Cofator

Ribozimas RNA

Pode ser: on inorgnico molcula orgnic

Coenzima Se covalente
Grupo Prosttico

ENZIMAS CARACTERSTICAS GERAIS

Apresentam alto grau de especificidade; So produtos naturais biolgicos; Reaes baratas e seguras; So altamente eficientes, acelerando a velocidade das reaes (108 a 1011 + rpida); So econmicas, reduzindo a energia de ativao; No so txicas; Condies favorveis de pH, temperatura, polaridade do solvente e fora inica.

ENZIMAS
Comparao das enzimas com catalisadores qumicos. Caracterstica Enzimas Catalisadores Qumicos
Especificidade ao substrato Natureza da estrutura Sensibilidade T e pH Condies de reao (T, P e pH) Custo de obteno (isolamento e purificao) Natureza do processo Consumo de energia Formao de subprodutos Separao catalisador/ produtos Atividade Cataltica (temperatura ambiente) Presena de cofatores Estabilidade do preparado Energia de Ativao Velocidade de reao alta complexa alta suaves alto batelada baixo baixa difcil/cara alta sim baixa baixa alta baixa simples baixa drstica (geralmente) moderado contnuo alto alta simples baixa no alta alta baixa

ENZIMAS NOMENCLATURA
Sculo XIX - poucas enzimas identificadas
- Adio do sufixo ASE ao nome do substrato: * gorduras (lipo - grego) LIPASE * amido (amylon - grego) AMILASE - Nomes arbitrrios: * Tripsina e pepsina proteases

10

ENZIMAS NOMENCLATURA
1955 - Comisso de Enzimas (EC) da Unio Internacional de Bioqumica (IUB) nomear e classificar. Cada enzima cdigo com 4 dgitos que caracteriza o tipo de reao catalisada: 1 dgito - classe 2 dgito - subclasse 3 dgito - sub-subclasse 4 dgito - indica o substrato

11

ENZIMAS CLASSIFICAO
Classificao das enzimas segundo a Comisso de Enzimas.
1. Oxido-redutases 1.1.atuando 1.2.atuando 1.3.atuando 1.4.atuando 1.5.atuando 1.6.atuando (reaes de oxidao-reduo ou transferncia de eltrons) em CH-OH em C=O em C=Oem CH-NH2 em CH-NHem NADH, NADPH

2.Transferases (transferem grupos funcionais entre molculas) 2.1.grupos com um carbono 2.2.grupos aldedo ou cetona 2.3.grupos acil 2.4.grupos glicosil 2.7.grupos fosfatos 2.8.grupos contendo enxofre 3.Hidrolases (reaes de hidrlise) 3.1.steres 3.2.ligaes glicosdicas 3.4.ligaes peptdicas 3.5.outras ligaes C-N 3.6.anidridos cidos

12

ENZIMAS CLASSIFICAO
Classificao das enzimas segundo a Comisso de Enzimas.
4.Liases (catalisam a quebra de ligaes covalentes e a remoo de molculas de gua, amnia e gs carbnico) 4.1. =C=C= 4.2. =C=O 4.3. =C=N5.Isomerases (transferncia de grupos dentro da mesma molcula para formar ismeros) 5.1.racemases 6.Ligases (catalisam reaes de formao de novas molculas a partir da ligao entre duas pr-existentes, sempre s custas de energia) 6.1. C-O 6.2. C-S 6.3. C-N 6.4. C-C

13

ENZIMAS CLASSIFICAO
Subclasses

Exemplos de Tipo de reao catalisada Subclasses Hidratases Adicionam H2O ligas duplas Quinases Transferem fosforilas do ATP Mutases Movem fosforilas dentro da mesma molcula Sintases Sntese independente de ATP Sintetases Sntese dependente de ATP

Classe Liases Transferase Isomerase Transferases Ligases

14

ENZIMAS NOMENCLATURA
ATP + D-Glicose ADP + D-Glicose-6-fosfato

IUB - ATP:glicose fosfotransferase

E.C. 2.7.1.1
2 - classe - Transferase 7 - subclasse - Fosfotransferases 1 - sub-subclasse - Fosfotransferase que utiliza grupo hidroxila como receptor 1 - indica ser a D-glicose o receptor do grupo fosfato

Nome trivial: Hexoquinase

15

ENZIMAS CATALISADORES
Aceleram reaes qumicas
H2O2 Ex: Decomposio do H2O2
Condies da Reao
Catalase

H2O +

O2
Velocidade Relativa

Energia livre de Ativao KJ/mol Kcal/mol

Sem catalisador Platina Enzima Catalase

75,2 48,9 23,0

18,0 11,7 5,5

1
2,77 x 104 6,51 x 108

16

ENZIMAS CATALISADORES
No so consumidos na reao

H2O2

Catalase

H2O + O2

E+S

E+P

17

ENZIMAS CATALISADORES
Atuam em pequenas concentraes
decompe 5 000 000 de molculas de H2O2 pH = 6,8 em 1 min

1 molcula de Catalase

Nmero de renovao = n de molculas de

substrato convertidas em produto por uma nica molcula de enzima em uma dada unidade de tempo.

18

ENZIMAS CATALISADORES
No alteram o estado de equilbrio Abaixam a energia de ativao; Keq no afetado pela enzima. No apresenta efeito termodinmico global G no afetada pela enzima.
Energia
Energia de ativao sem enzima

Diferena entre a energia livre de S e P

Energia de ativao com enzima

Caminho da Reao

19

ENZIMAS COMPONENTES DA REAO

E+S

ES

P+E

Substrato se liga ao STIO ATIVO da enzima

20

ENZIMAS STIO ATIVO

Regio da molcula enzimtica da reao com o substrato. que participa

Pode possuir componentes no proticos:cofatores. Possui aminocidos auxiliares e de contato.

Ativador:ons inorgnicos que condicionam a ao cataltica das enzimas. Fe+ Coenzima: molcula orgnica complexa.NAD+

Poro protica Cofator APOENZIMA

HOLOENZIMA Grupamento prosttico

21

ENZIMAS COFATOR
Algumas enzimas que contm ou necessitam de elementos inorgnicos como cofatores
ENZIMA PEROXIDASE CATALASE CITOCROMO OXIDASE LCOOL DESIDROGENASE HEXOQUINASE UREASE Cu+2 Zn+2 Mg+2 Ni+2 COFATOR Fe+2 ou Fe+3

22

ENZIMAS COENZIMAS
Maioria deriva de vitaminas hidrossolveis Classificam-se em: - transportadoras de hidrognio - transportadoras de grupos qumicos

Transportadoras de hidrognio Coenzima Abreviatura Reao Origem catalisada Nicotinamida adenina NAD+ Oxi-reduo Niacina ou
dinucleotdio Nicotinamida adenina NADP+ dinucleotdio fosfato Flavina adenina FAD dinucleotdio

Vitamina B3 Oxi-reduo Niacina ou Vitamina B3 Oxi-reduo Riboflavina ou Vitamina B2

23

ENZIMAS COENZIMAS
Transportadoras de grupos qumicos Coenzima Coenzima A Biotina Piridoxal fosfato Metilcobalamina Tetrahidrofolato Tiamina pirofosfato THF TPP PyF Abrev. Reao catalisada Origem Pantotenato ou CoA-SH Transferncia de
grupo acil Transferncia de CO2 Transferncia de grupo amino Transferncia de unidades de carbono Transferncia de unidades de carbono Transferncia de grupo aldedo Vitamina B5 Biotina ou Vitamina H Piridoxina ou Vitamina B6 Cobalamina ou Vitamina B12 cido flico Tiamina ou Vitamina B1

24

ENZIMAS
LIGAO ENZIMA - SUBSTRATO

Emil Fischer (1894): alto grau de especificidade das enzimas originou Chave-Fechadura , que considera que a enzima possui sitio ativo complementar ao substrato.

25

ENZIMAS
LIGAO ENZIMA - SUBSTRATO

Koshland (1958): Encaixe Induzido , enzima e o o substrato sofrem conformao para o encaixe. O substrato distorcido para conformao exata do estado de transio.

26

ENZIMAS
ATIVIDADE ENZIMTICA
Enzyme Commission: uma unidade (U) de atividade a quantidade de enzima que catalisa a transformao de 1 micro mol de substrato ou a formao de 1 micro mol de produto por minuto. Expressa: U = micro moles produto/minuto Atividade especfica = U/mg de protena Enzima pura, condies que permita a velocidade da reao seja mxima o substrato [S] de modo a permitir que toda a enzima [E] [ES]. V = K[E] = K[ES]

27

ENZIMAS
ATIVIDADE ENZIMTICA

Fatores que alteram a velocidade de reaes enzimticas: - pH; - temperatura; - concentrao das enzimas; - concentrao dos substratos; - presena de inibidores.

28

ENZIMAS INFLUNCIA DO PH
O efeito do pH sobre a enzima deve-se s variaes no estado de ionizao dos componentes do sistema medida que o pH varia. Enzimas grupos ionizveis, existem em estados de ionizao.

29

ENZIMAS INFLUNCIA DO PH
A estabilidade de uma enzima ao pH depende: - temperatura; - fora inica; - natureza qumica do tampo; - concentrao de ons metlicos contaminantes; - concentrao de substratos ou cofatores da enzima; - concentrao da enzima.
ENZIMA Pepsina Tripsina Catalasa Arginasa Fumarasa pH TIMO 1,5 7,7 7,6 9,7 7,8

30

ENZIMAS
INFLUNCIA DA TEMPERATURA

temperatura dois efeitos ocorrem: (a) a taxa de reao aumenta, como se observa na maioria das reaes qumicas; (b) a estabilidade da protena decresce devido a desativao trmica. Enzima temperatura tima para que atinja sua atividade mxima, a temperatura mxima na qual a enzima possui uma atividade cte. por um perodo de tempo.

31

ENZIMAS
INFLUNCIA DA TEMPERATURA

O efeito da temperatura depende: - pH e a fora inica do meio; - a presena ou ausncia de ligantes. Acima desta temperatura, o velocidade de reao devido a temperatura compensado pela perda de atividade cataltica devido a desnaturao trmica.
ENZIMA Pepsina Tripsina Urease TEMPERATURA TIMA (C) 31,6 25,5 20,8

32

ENZIMAS
INFLUNCIA DA TEMPERATURA

Ea Lei de Arrehenius
k = Ae Ea / RT log k = Ea 1 + log A 2,3RT T

Ea pode ser determinada medindo-se a cte de velocidade da reao em temperaturas. Curva A: grfico usual. Curva B: o grfico mostra uma variao definida na inclinao, se em determinada temperatura, uma etapa se torna limitante da velocidade. Curva C: uma queda brusca na curva indica inativao enzimtica.

33

ENZIMAS INFLUNCIA DA [E]

Velocidade de transformao do S em P qtidade de E. Desvios da linearidade ocorrem: - Presena de inibidores na soluo de enzima; - Presena de substncias txicas; - Presena de um ativador que dissocia a enzima; - Limitaes impostas pelo mtodo de anlise. Recomenda-se: - Enzimas com alto grau de pureza; - Substratos puros; - Mtodos de anlise confivel.

34

ENZIMAS INFLUNCIA DA [S]

[S] varia durante o curso da reao medida que S convertido em P. Medir Vo = velocidade inicial da reao. [E] = cte.
vo

[S] pequenas Vo linearmente. [S] maiores Vo por incrementos cada vez menores. Vmax [S] Vo insignificantes. Vmax atingida E estiverem na forma ES e a [E] livre insignificante, ento, E saturada com o S e V no com de [S].

Vmax

[S]

35

ENZIMAS CINTICA ENZIMTICA

Victor Henri (1903): E + S ES

1913 Leonor Michaelis -Enzimologista Maud Menten - Pediatra

E+S

K1 K-1

ES

Kp

E+P

Etapa rpida

Etapa lenta

36

ENZIMAS CINTICA ENZIMTICA

Cintica Enzimtica

Determinar as constantes de afinidade do S e dos inibidores; Conhecer as condies timas da catlise; Ajuda a elucidar os mecanismos de reao; Determinar a funo de uma determinada enzima em uma rota metablica.

37

ENZIMAS CINTICA ENZIMTICA

v=
v
v = Vmax [S] Km 1

Vmax [S] Km + [S]

v = Vmax
2

Vmax
2

1- [S] Km>>[S]
3

2- [S] [S]>>Km 3- v = Vmax 2

Km

[S]

38

ENZIMAS CINTICA ENZIMTICA

Afinidade da enzima ao substrato. Km depende: aspectos especficos do mecanismo de reao; n de passos da reao; velocidades relativas dos passos individuais.
ENZIMA Catalase Hexoquinase H2O2 ATP D-Glicose D-Frutose Quimotripsina Gliciltirosinilglicina N-benzoiltirosinamida SUBSTRATO Km (mM) 25 0,4 0,05 1,5 108 2,5

39

ENZIMAS CINTICA ENZIMTICA Vmax: E+S E+S

K1 K-1 K1 K-1

ES ES

Kp K2

E+P EP
V

Vmax = Kp[Et]
K3

K-2

E+P
Vmax Vmax [2E] [E]

Vmax = K3[Et]

[S]

40

Enzimas ordem da reao

Quando a formao de P [S] [S] <<Km for proporcional [S] v = Vmax [S] v = K[S] a velocidade da reao Km de 1a ORDEM V
Quando a velocidade da reao independe da [S] a reao de ORDEM ZERO

[S] [S]>>Km [S] v = Vmax

41

ENZIMAS MTODOS GRFICOS

Grfico dos Recprocos de Lineweaver-Burk
1 v = Km Vmax [S] + 1 Vmax

1 v 1 Vmax -1 Km

Inclinao =

Km Vmax

1 [S]

42

ENZIMAS MTODOS GRFICOS

Grfico de Eadie-Hofstee
v v=V K max m [S]

Vmax v
Inclinao =

-Km Vmax Km v [S]

43

ENZIMAS MTODOS GRFICOS

Grfico de Hanes-Woolf
K [S] 1 m + = [S] v V V max max

[S] v Km Vmax -Km

Inclinao =

1 Vmax

[S]

44

ENZIMAS MTODOS GRFICOS

Grfico da equao integrada de Michaelis-Menten
[S]o Vmax 2,3 1 ([S]o [S]) log = t [S] Km Km t Vmax Km
2,3log[S]o t [S]
Inclinao =

-1/Km

Vmax ([S]o-[S]) t

45

ENZIMAS INIBIO ENZIMTICA

Qualquer substncia que reduz a velocidade de uma reao enzimtica.

INIBIDORES

REVERSVEIS

IRREVERSVEIS

COMPETITIVOS

NO COMPETITIVOS

INCOMPETITIVOS

46

ENZIMAS INIBIO COMPETITIVA

Inibidor competitivo concorre com o S pelo sitio ativo da E
livre. I anlogo no metabolizvel, derivado de um S verdadeiro, S substituto da E ou um P da reao.
I compostos com estrutura molecular lembra S

afinidade da enzima pelo substrato

[substrato] necessria para obter a mesma [ES] Km aparente da enzima

47

ENZIMAS INIBIO COMPETITIVA E+S + I

KI
K1

ES

K2

E+P

EI

[ E ][ I ] KI = [ EI ] Vmax [ S ] v= [I ] K m (1 + ) + [S] KI

Michaelis-Menten

Km 1 1 [I ] 1 = + (1 + ) Lineweaver-Burk v Vmax Vmax K I [S]

48

ENZIMAS INIBIO COMPETITIVA

1- sem inibidor 2- com inibidor na concentrao [I1] 3- com inibidor na concentrao [I2] > [I1]

49

ENZIMAS
INIBIO NO-COMPETITIVA

Inibidor no-competitivo se liga reversivelmente, aleatria e independentemente em um stio que lhe prprio. I no tem semelhana estrutural com o S
[substrato] no diminui a inibio Km da enzima NO se altera Vmax na presena do inibidor

50

ENZIMAS
INIBIO NO-COMPETITIVA

E+S + I
KI

KS

ES + I
KI

K2

E+P
[ E ][ I ] [ ES ][ I ] KI = = [ EI ] [ EIS ] v= Vmax [ S ] ( 1 + [ I ] ) + [ S ](1 + [ I ] ) Km KI KI

EI + S

KS

EIS

Michaelis-Menten

Lineweaver-Burk

1 Km [I ] 1 1 [I ] = (1 + ) + (1 + ) v Vmax K I [ S ] Vmax KI

51

ENZIMAS
INIBIO NO-COMPETITIVA

1- sem inibidor 2- com inibidor na concentrao [I1] 3- com inibidor na concentrao [I2] > [I1]

52

ENZIMAS
INIBIO INCOMPETITIVA
Inibidor incompetitivo se liga reversivelmente, em um stio prprio, ao complexo ES. I no tem semelhana estrutural com o S I favorece a formao do ES
Km e Vmax da enzima

53

ENZIMAS
INIBIO INCOMPETITIVA

E+S

KS

ES + I
KI

K2

E+P
[ ES ][ I ] [ EIS ] Vmax [S] [I ] 1+ Ki v= Km +[ S ] [I ] 1+ KI KI = 1 K 1 1 [I ] = m + (1 + ) v Vmax [ S ] Vmax KI

EIS
Michaelis-Menten

Lineweaver-Burk

54

ENZIMAS
INIBIO INCOMPETITIVA

1- sem inibidor. 2- com inibidor na concentrao [I1] 3- com inibidor na concentrao [I2] > [I1]

55

ENZIMAS
INIBIO IRREVERSVEL
I se combina com um grupo funcional, na molcula da E, que essencial para sua atividade. Podem promover a destruio do grupo funcional Forma-se uma ligao COVALENTE entre o I e a E. Vmax parte da E completamente removida do sistema e Km permanece a mesma.

E+S + I EI

K1

ES

K2

E+P

56

ENZIMAS
INIBIO IRREVERSVEL
Graficando Vmax vs a quantidade total de E adicionada ao meio de reao em presena de I.

57

ENZIMAS
ENZIMAS REGULATRIAS
No obedecem a cintica de Michaelis-Menten. Controlam a etapa limitante em uma cadeia de reaes enzimticas. Tem sua atividade cataltica aumentada ou diminuda em resposta a determinados sinais, molculas sinalizadoras (pequenos metablicos ou cofatores). Classes de enzimas reguladoras: Enzimas alostricas; Enzimas reguladas pela modificao covalente reversvel.

58

ENZIMAS
ENZIMAS REGULATRIAS
Enzimas alostricas Funcionam atravs da ligao no-covalente e reversvel de um metablito regulador chamado modulador; Moduladores podem ser inibidores ou ativadores; So maiores e mais complexas, possuem duas ou mais cadeias polipeptdicas.
Enzimas reguladas pela modificao covalente reversvel Grupos qumicos so ligados covalentemente e removidos da enzima reguladora por enzimas , podem ser: fosfato, adenosina monofosfato, grupos metil, etc.

59

ENZIMAS
ENZIMAS REGULATRIAS

1- Comportamento tipo Michaelis-Menten. 2- Comportamento Alostrico.

60

ENZIMAS -

IMOBILIZADAS

Enzimas Livres versus Enzimas Imobilizadas Livres Instabilidade Rpida perda da atividade cataltica No podem ser recuperadas Imobilizadas Reutilizao Maior estabilidade (faixas mais amplas de pH e temperatura) Menor interferncia de inibidores e/ou ativadores

61

ENZIMAS -

IMOBILIZADAS

A enzima livre imobilizada em um suporte inerte como vidro poroso, bentonite, etc.

O principal interesse em imobilizar uma enzima obter um biocatalisador com atividade e estabilidade que no sejam afetadas durante o processo, em comparao sua forma livre.

62

ENZIMAS -

IMOBILIZADAS

63

ENZIMAS -

IMOBILIZADAS

Vantagens da utilizao de enzimas imobilizadas

- As enzimas podem ser reutilizadas - Os processos qumicos podem ser continuamente operados e prontamente controlados - Os produtos podem ser facilmente separados - Os problemas com elfuentes e manipulaes de materiais so minimizados - A reprodutibilidade do procedimento analtico pode ser aumentada - Em alguns casos, as propriedades enzimticas (atividade e estabilidade operacionais) podem ser alteradas

64

ENZIMAS -

IMOBILIZADAS

Propriedades de Enzimas Imobilizadas

Efeitos sobre a atividade enzimtica: Modificao da estrutura tridimensional; Modificao do microambiente; Fenmenos de difuso no interior do complexo.

65

ENZIMAS -

IMOBILIZADAS

Medida da atividade: Atividade da enzima imobilizada mais fraca que a das enzima nativa, mas a estabilidade maior. Influencia das condies operacionais: pH e temperatura desnaturao parcial ou total da protena; imobilizada resistem melhor a variaes de pH e tratamentos trmicos;
Obs: origem da enzima, suporte utilizado e mtodo de fixao

66

ENZIMAS -

IMOBILIZADAS

Aplicaes de Enzimas Imobilizadas

Aplicaes analticas:
Facilita automatizao das cadeias de dosagem e simplifica as manipulaes. Biossensores: Imobilizao de colinesterase e anticorpos sobre cristal piezeltrico utilizadas na deteco de pesticidas organofosforados; Reatores para anlise cromatogrfica; Kits para titulaes e imunoensaios.

67

ENZIMAS -

IMOBILIZADAS

Indstria de alimentos: Glicose isomerase fixada para a produo de xaropes com alto teor de frutose; Celulase Converso de celulose em acares solveis; Imobilizao de fermento de po (Sacharomices cerevisae) lcoois enantiomericamente puros. Uso Industrial: Fonte para produo de penicilinas sintticas.

68

ENZIMAS -

IMOBILIZADAS

Lipases imobilizadas: Imobilizadas em organo-gel utilizadas na esterificao do cido olico com n-pentanol; Imobilizadas em carvo de coco, bauxita e gel de gar utilizadas na transformao de leo de soja em biodisel. Aplicaes na medicina: Hidrogel contendo enzimas imobilizadas Substrato presente - converso enzimtica - produto muda a conformao do hidrogel liberao da droga.

69

ENZIMAS -

IMOBILIZADAS

Em desenvolvimento: Estudos de filtros que utilizam enzimas imobilizadas na superfcie do meio filtrante para o tratamento do ar dos ambientes. Recentes avanos na imobilizao de enzimas por argilas, utilizadas em bioremediao. Estudos em desenvolvimento: imobilizao, estabilizao e aplicao da enzima esterase, de rim de porco, na sntese de produtos de interesse farmacutico.

70

ENZIMAS APLICAES
Permitem s indstrias usarem processos mais econmicos, diminuindo o consumo de energia e recursos; mais confiveis e que poluem menos. So eficientes; Muito especficas; Permite produo segura e ambientalmente amigvel.
ENZIMA Papana FONTE mamo abacaxi malte mucosa gstrica suno Candida rugosa APLICAO

Origem vegetal Origem animal Origem microbiana

Ajuda na digesto, Mdica, bebidas, carnes

Bromelina Diastase Pepsina Lipase

Ajuda na digesto, Mdica, bebidas, carnes

Panificao, xarope

Amaciamento de carne

Tratamento de efluentes

71

ENZIMAS APLICAES
Proteases
Leite: na preparao do leite de soja. Carnes e Peixes: recuperao de protenas do osso ou espinha. Vinhos: clarificao. Queijo: coagulao da casena.

72

ENZIMAS APLICAES
Lactase
Sorvete: preveno da cristalizao da lactose. Leite: estabilizao das protenas do leite em leites congelados por remoo da lactose. Hidrlise da lactose, permitindo o uso por adultos deficientes na lactase intestinal e em crianas com deficincia em lactase congnita. Rao: converso da galactose em lactose e glicose.

73

ENZIMAS APLICAES
-amilase
Fermentados: converso do amido a maltose por fermentao. Remoo da turbidez do amido Cereais: converso do amido a dextrinas e maltose. Chocolate/cacau: liquefao do amido

74

ENZIMAS APLICAES
Peroxidase Deteriorao - Frutas: contribui na reao de escurecimento.

Polifenoloxidase
Ch/Caf: desenvolvimento do escurecimento durante o amadurecimento e fermentao. Deteriorao - Frutas e Vegetais: reao de escurecimento e perda de vitaminas.

75

ENZIMAS APLICAES
Enzimas utilizadas em raes para aves.
Enzima Xilanase Glucanases Pectinases Celulases Proteases Amilases Fitase
Galactosidases

Substrato Arabinoxilanas -glucanos Pectinas Celulose Protenas Amido cido ftico Galactosdios Lipdios e cidos graxos

Efeitos Reduo da viscosidade da digesta. Reduo da viscosidade da digesta. Menor umidade na cama. Reduo da viscosidade da digesta. Degradao da celulose e liberao de nutrientes Suplementao das enzimas endgenas. Degradao mais eficiente de protenas. Suplementao das enzimas endgenas. Degradao mais eficiente do amido. Melhora a utilizao do fsforo dos vegetais. Remoo do cido ftico. Remoo de Galactosdios Melhora a utilizao de gorduras animais e vegetais

Lipases

76

ENZIMAS APLICAES

Tratamento de efluentes Preocupao ambiental desencadeou uma

procura por outras alternativas, as chamadas "tecnologias limpas. Enzimas substituir muitos componentes qumicos utilizados nos processos industriais atuais.

77

ENZIMAS APLICAES
Enzimas utilizadas em tratamento de efluentes.
Enzima e fonte Azorredutase (Pseudomonas luteola) Catalase (Baccilus sp.) -glicosidase e Mangans peroxidase Polifosfatase e Fosfotransferase Protease pronase (Pseudomonas aeruginosa) Indstria de tinta Remoo de H2O2 presente em efluentes de branqueamento de tecidos Remoo de corantes azo na industria de alimentos e da industria txtil Remoo de fosfato biolgico de efluentes Inativao de vrus bacterifago Cox A9 de efluentes, para reutilizao da gua Remoo de naftaleno Remoo do teor de DQO de efluentes de leo de oliva Reduo do teor de lipdeos e DQO efluentes avcolas Reduo do teor de lipdeos e SS de efluentes da indstria de derivados lcteos Poluentes e efluentes

Naftaleno-dioxigenase Lipase (Penicillium P4) (Candida rugosa) (pncreas de porco)

78

ENZIMAS APLICAES
Industria de lcool; Industria de detergentes; Industria txtil; Industria de papel e celulose; Curtumes; Produo de cido ctrico, cido glutmico, insulina, vacinas, esterodes, vitaminas e antibiticos; Bioremediao: de polmeros, de hidrocarbonetos e clorados.

79

ENZIMAS APLICAES
Aplicao da Lipase no tratamento de guas residurias com elevados teores de lipdeos
JUSTIFICATIVA

Efluentes com teores de gorduras e leos e que utilizam o processo anaerbio, a 1 etapa m.o. para degradar as gorduras a produo de enzimas capazes de hidrolisar os triglicerdeos. Etapa lenta e nem sempre h m.o. especficos para a produo de lipase no consegue atingir bons resultados. Gorduras se solidificam a baixas temperaturas: formao de uma camada gordurosa sobre as lagoas, caminhos preferenciais e arraste da biomassa.

80

ENZIMAS APLICAES
OBJETIVO

Viabilizar tecnicamente a aplicao de um prtratamento enzimtico para remoo de gorduras, utilizando preparaes de lipases pancreticas fornecidas pelas empresas Kin Master (LKM) e Nuclear (LNU).
Caracterizar o efluente Caracterizar as propriedades catalticas das enzimas Testar tempos de hidrolise na formao de cidos graxos (2h, 4h, 8h, 12h e 24h) Avaliar o impacto do tratamento enzimtico por meio de testes de biodegradabilidade expressa pela formao de metano, DQO e atividade metanognica.

81

ENZIMAS APLICAES
MATERIAIS E MTODOS

Determinao da Atividade Hidroltica

Substrato:Controle = azeite de oliva Efluente = efluente de indstria de produtos avcolas Tampo e soluo enzimtica (5mg/mL). Branco Incubados em banho-maria sob agitao Soluo de etanol:acetona parar a reao cidos graxos liberados titulados com KOH (0,02M) e indicador fenolftalena

(Va Vb ).M.10 6 U= t.m

(moles/mg.min)

82

ENZIMAS APLICAES
RESULTADOS
Influncia do pH na atividade hidroltica das lipases LNU e LKM
4350 3850 LNU - Controle LNU - Efluente 240 220 200 180 160 140 120 100 8,5

Atividade (U)

3350 2850 2350 1850 1350 850 350 5,5 6 6,5 7 7,5 8

pH

83

ENZIMAS APLICAES
RESULTADOS
Influncia do pH na atividade hidroltica das lipases LNU e LKM
3050 LKM - Controle LKM - Efluente 550 450 350 250 150 50 5,5 6 6,5

Atividade (U)

2550 2050 1550 1050 550 50

pH

7,5

8,5

84

ENZIMAS APLICAES
RESULTADOS
Influncia do pH na atividade hidroltica das lipases LNU e LKM
700 235 LKM- E fluente LN - E U fluente 220 205 190 175 160 145 130 5,5 6 6,5 600 500 400 300 200 100 0

Atividade (U)

pH

7,5

8,5

85

ENZIMAS APLICAES
RESULTADOS
Influncia da Tem peratura na atividade hidroltica das lipases LNU e LKM
LN - C U ontrole 3750 LN - E U fluente

610 560 510 460 410 360 310

Atividade (U)

3250 2750 2250 1750 1250 750 25 31 37 43 49 55 61

260 210

Temperatura (C)

86

ENZIMAS APLICAES
RESULTADOS
Influncia da Tem peratura na atividade hidroltica das lipases LNU e LKM
600 LK - C M ontrole

Atividade (U)

3000

LK - E M fluente

550 500

2500 450 2000 400 350 1500 300 1000 25 30 35 40 45 50 55 60 65 250

Tem peratura (C )

87

ENZIMAS APLICAES
RESULTADOS
Influncia da Tem peratura na atividade hidroltica das lipases LNU e LKM
650 600 Atividade (U) 550 500 450 400 350 300 250 200 25 30 35 40 45 Temperatura (C) 50 55 60 65 LN - E U fluente LKM- E fluente 600 550 500 450 400 350 300 250

88

ENZIMAS APLICAES
RESULTADOS
Influncia da concentrao de substrato na atividade hidroltica das lipase LKM e LNU
900

800

Lipase Pancreatina (LKM)

Atividade (U)

700

600

500

Lipase Pancreatina (LNU)

400

300

10

20

30

40

50

60

concentrao (%)