Aminocidos e Protenas

-Protenas so os componentes celulares mais abundantes - Diversificadas em forma e funo - So polmeros de aminocidos. - Componentes tpicos de um aminocido

Exceo: grupo iminocido da prolina.

Aminocidos e Protenas

- Em pH fisiolgico, grupos amino e carboxila esto na forma ionizada.

- A natureza do grupo R importante para definir conformao das molculas proticas

Aa. podem ser classificados de acordo com a polaridade do radical: - Polares (hidroflicos)

- Apolares (hidrofbicos)

Aminocidos apolares: Radical com carter de hidrocarboneto, no interagem com a gua.

- Em cadeias polipeptdicas, os aminocidos apolares tem localizao interna.

Aminocidos polares: Radical com carga lquida ou residual que permitem interao com a gua. Geralmente na superfcie das molculas proticas.
- So classificados em 3 categorias com base na carga do radical em pH 7: bsicos (carga +), cidos (carga -) ou polares sem carga (carga lquida igual a 0)

- O carbono de todos os aminocidos (exceto glicina) assimtrico porque est ligado a 4 grupos diferentes. Isso permite a existncia de dois ismeros pticos (D e L)

exceo - Aminocidos tem pelo menos dois grupos ionizveis: (-NH3+ e COOH) formas protonadas ou (-NH2 e COO-) formas desprotonadas. Disposio dessas formas depende do pH e do pKa

A converso das formas depende do pH, sendo refletida na curva de titulao. Quando h dois grupos ionizveis apenas, as curvas de titulao so semelhantes s curvas dos cidos fracos com 2 pKas distantes (1 para o grupo amino e outro para o grupo carboxila)

Observe:1) em pH muito baixo (muito H+) predomina forma I (protonada). medida em que se adiciona lcali (pH sobe), ocorre ionizao do grupo carboxila (predomina forma II). Adicionando-se mais lcali, passa a predominar a forma III (desprotonoada). 2) A forma eletricamente neutra predomina existe acima do pKa da carboxila e abaixo do pKa do grupo amino; ela ser mais abundante no pH equidistante dos dois valores de pKa. Generalizando: o pH onde predomina a forma neutra a mdia aritmtica de dois valores de pKa. Este valor de pH chamdado de ponto isoeltrico. pI= pka1 + pKa2 2 Neste ponto, as molculas comportam-se como se fossem neutras (no migram quando submetidas a um campo eltrico)

Aminocidos monoamnicos e dicarboxlicos: A forma eletricamente neutra (carga lquida igual a zero) existe quando 1 carboxila estiver protonado (-COOH sem carga) e o outro desprotonado (-COO- carga negativa). A carga do COO- ser compensada pelo grupo NH3+.

Aminocidos com 1 COOH e 2 NH3+: forma neutra em pH eqidistante dos pkas dos grupos bsicos.

Generalizando: para aminocidos com 3 grupos ionizveis usam-se pkas de grupos com mesmo sinal durante o clculo do ponto isoeltrico

Aminocidos

pI= pka1 + pKa2 2

Cadeia polipeptdica: polmero de aminocidos

- grupamento aminoterminal e carboxiterminal Protena: biomolcula formada por uma ou mais cadeias polipeptdicas (mais de 50aa. ou 6KDa) - propores dos aminocidos variam de uma protena para a outra

- funcionalidade depende da estrutura

- Aminocidos se unem por meio de pepetdicas formando cadeias polipeptdicas.

ligaes

- Nos seres vivos, as ligaes peptdicas jamais ocorrem diretamente (h participao de ribossomos e RNP. - Apresenta carctersticas intermedirias entre ligao simples e dupla devido fenmeno de ressonncia.

Caractersticas da ligao peptdica:

- comporta-se como dupla ligao parcial - rgida e planar

Estrutura das Protenas - Seqncia de aminocidos determina a estrutura espacial (precisa organizao tridimensional essencial para funo das protenas) 4 Nveis de Organizao: Estrutura Primria: - Corresponde seqncia de aminocidos - Determinada geneticamente - Extremidade n-terminal e c-terminal

Estrutura Secundria: -A cadeia de aminocidos se dobra sobre si mesma em virtude do estabelecimento de pontes de hidrognio envolvendo grupos NH e C=O - 2 principais formas de estrutura secundria: -hlice e folha pregueada.

-Hlice: - Pontes de Hidrognio foram uma organizao em espiral da molcula (voltas em torno de um eixo) -Pontes de hidrognio entre grupamento amino e carbonila so paralelas cadeia polipeptdica -Cadeias laterais dos aminocidos voltadas externamente.

Folhas -Pregueadas:
- Aspecto de folha de papel dobrada em sanfona (pregueada) - Estabilizada por pontes de hidrognio perpendiculares s cadeias polipeptdica. - Radicais dos aminocidos se projetam para cima ou para baixo do plano da folha.

Mioglobina (-hlice)

Concanavalina A (Folha pregueada)

Toxina Diftrica (-hlice + folha )

Estrutura terciria:
- Cadeia polipeptdica dobra-se novamente sobre si mesma. - Segmentos distantes se interagem por meio dos radicais dos aminocidos

Tipos de terciria:

Ligaes

que

estabilizam

estrutura

- Pontes de hidrognio entre radicais de aminocidos polares com ou sem carga

- Interaes inicas entre aminocidos com radicais de cargas opostas (aa. bsicos e aa. cidos)

Interaes Hidrofbicas: - Ocorrem em ambiente aquoso quando radicais de aa. apolares se aproximam, diminuindo exposio ao solvente. - Como existem muitos aminocidos hidrofbicos, essas interaes so abundantes

Pontes dissulfeto: - Ligao covalente entre 2 resduos de cistena - Reao de oxidao catalisada por enzimas - Raras em protenas intracelulares, mas abundantes em protenas extracelulare (Ex: insulina, colgeno)

Ligaes que estabilizam a estrutura terciria

1- Interaes hidrofbicas

2- Pontes de hidrognio
3- Interaes inicas

Estrutura Quaternria: - Associao de 2 ou mais cadeias polipeptdicas - Mantida por ligaes no covalentes semelhantes estrutura terciria.

Ex: Hemoglobina

Protenas Globulares: forma final aproximadamente esfrica ( relao comprimento largura menor que 10:1); geralmente solveis. Ex: hemoglobina, mioglobina

Protenas Fibrosas: Forma alongada; geralmente insolvel; basicamente papel estrutural. Ex: colgeno

Protenas Simples: constituda somente por aminocidos Protenas Conjugadas: Parte protica (cadeia polipeptdica) associada a um grupo prosttico (parte no protica) Exs: nucleoprotenas: polipeptdio associado a cidos nuclicos glicoprotenas: polipeptdio associado a polissacardeo lipoprotenas: polipeptdio associado a lipdio
Grupo Heme

Mioglobina

pI (ponto isoeltrico) de uma protena

- Carga eltrica total de uma protena: somatrio das cargas dos radicais dos aminocidos
- Carga dos radicais depende do valor de seu pKa e do pH, contudo as protenas possuem muitos aminocidos. - pI das protenas determinado experimentalmente como sendo o valor de pH no qual elas no migram quando submetidas a um campo elrico (equivalncia no nmero de cargas positivas NH3+ e negativas COO-) - Valor do pI vai depender do balano entre aminocidos bsicos e cidos. - Protenas cidas: pI abaixo de 7 - Protenas bsicas: pI acima de 7 - Em pH menor que pI: carga lquida + - Em pH maior que pI: carga lquida -

Fatores que influenciam na solubilidade das protenas

- Solubilidade das protenas definida principalmente pela estrutura primria (define capacidade de interao com a gua).
Outros fatores que tambm interferem com a solubilidade das protenas: a) pH: no ponto isoeltrico, as protenas tm menor solubilidade que em outros valores de pH.

Fatores que influenciam na solubilidade das protenas b) Concentrao de sais: da concentrao de sais aumenta solubilidade at certo ponto (aumenta a interao de grupos carregados da protena com os ons adicionados, diminuindo interao protena-protena.
Em concentraes muito elevadas, a quantidade de ons muito grande competindo com a prpria protena pela solvatao.

c) Solventes orgnicos: sofrem hidratao, competindo com as protenas pela gua de solvatao.

Metodos de Purificao de Protenas

Cromatografia de Excluso: Separa protenas pelo tamanho (massa molar) - Matriz: gel (dextrana polmero de glicose) com esferas de poros bem definidos - Molculas menores demoram mais a atravessar a coluna (so eludas mais lentamente) e percorrem maiores distncias.

Metodos de Purificao de Protenas Cromatografia de afinidade: utiliza uma matriz (agarose) com um ligante que possui afinidade por uma substncia especfica. Ex: matriz com substrato se liga a uma enzima a ser separada de uma soluo.

Metodos de Purificao de Protenas

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