Vrus quimricos

Vacinas tradicionais
Vacina contra o vrus da Raiva Vrus inativado Vacina contra o vrus da Febre amarela Vrus atenuado Eficincia Segurana

Vacinas com tecnologia do DNA recombinante

Ausncia do agente etiolgico Utilizao de eptopos virais

Interao com Sistema Imunolgico

Importncia
Vacina da Hepatite B 3 doses HBsAg

Importncia
Vacina do HPV Vrios sorotipos 2 formulaes Expresso
Leveduras Clulas de inseto

Raiva
Encefalite aguda Leva vtimas a bito em praticamente 100% dos casos

2 casos registrados de cura Jeanna Giese (Wisconsin-EUA) Marciano Menezes Silva (Recife- Brasil)

Transmisso: Saliva do animal infectado

Mordedura Arranhadura Lambedura

Transmisso inter-humana por transplantes

Rabies virus
Vrus RNA de fita simples polaridade negativa Linear, no segmentado Formato de projtil, envelopado Familia Rhabdoviridae Gnero Lyssavirus Espcie Rabies virus (RABV) Raiva clssica Genoma
Cinco protenas:

nucleoprotena (N), fosfoprotena (P), RNA polimerase (L), protena de matriz (M) e uma glicoprotena transmembrana (G)

GlicoG
Determinante primrio da patogenicidade Responsvel pela induo de anticorpos

neutralizantes Adsoro entre vrus e clula

Objetivo: Fuso de GPV com poliedrina

Protenas de fuso contendo o gene da poliedrina so capazes de formar corpos de ocluso em insetos infectados com baculovrus recombinantes
Densidade de Sacarose

Purifica o atravs de gradiente de sacarose

antes

depois

Centrifuga

A new strategy for expression of the Rabies Virus Glycoprotein in insect cells Uma nova estratgia para a expresso da glicoprotena do vrus da Raiva em clulas de inseto
Maria Creuza do Esprito Santo Barros, Ana Carolina Oliveira de Araujo, Greice Kelly Menezes Martins, Pricles Norimitsu Teixeira Massunaga, Carlos Augusto Pereira, Tatsuya Nagata, Bergmann Morais Ribeiro.

Expresso da glicoprotena do vrus da Raiva em clulas de inseto

Construo do vrus recombinante vAcPHRVGP Expresso em clulas de inseto Anlise da protena recombinante SDS-PAGE e Western Blot Imunomarcao Microscopia confocal Purificao por Gradiente de sacarose

Construo de pFastPHGPV Digesto de pGEMGPV/PV com NcoI Clonagem em pFastPH Confirmao da clonagem na direo correta

Primer polAcAg310a348 e primer pRaivaGRNcoI 2044pb (pol 738-310=428 + 1616

Vrus recombinante vAcPHGPV Sistema Bac-to-Bac transposio de PHRVGP Confirmao do bacmdeo

Expresso em clulas de inseto Anlise da protena recombinante SDS-PAGE e Western Blot

SDS-PAGE e Western Blot de clulas de inseto 72 h.p.i.
1. Clulas Tn5B no infectadas (MOCK); 2. Clulas Tn5B infectadas com AcMNPV 3. Clulas Tn5B infectadas com vAcPHGPV

Infeco de clulas de inseto utilizando vAcPHRVGP

Protena de ~90kDa (GPV+PH) Anticorpo primrio anti-HIS Anticorpo secundrio anti-mouse fosfatase alcalina NBT-BCIP

Imunomarcao Microscopia confocal

Retirada da lamnula da placa Bloqueio com BSA 10% Anticorpo anti HIS Anticorpo anticamundongo conjugado com Alexa 488 Anticorpo DAPI (ncleo) Obs: Marcao negativa para clulas no infectadas e clulas infectadas com AcMNPV

Imunomarcao

Imunomarcao

Retirada da lamnula da placa Bloqueio com BSA 10% Anticorpo anti rbico (Butantan) Anticorpo anti-coelho conjugado com Alexa 488 Anticorpo DAPI (ncleo) Obs: Marcao negativa para clulas no infectadas e clulas infectadas com AcMNPV

Imunomarcao

Retirada da lamnula da placa Bloqueio com BSA 10% Anticorpo anti rbico conjugado com fluorescena (Zoonoses)

Obs: Marcao negativa para clulas no infectadas e clulas infectadas com AcMNPV

Marcaes negativas em clulas no infectadas A1 A2 B1 B2 B3 C1 C2 C3

Gradiente de sacarose
Infeco de lagartas no 3, 4 instar 96h.p.i: retirada do tecido adiposo

antes

depois

Centrifuga o

90kDa

Quimerismo: Aplicao em vacinas

ChimeriVax
Cepa vacinal da Febre Amarela Japanese encephalitis (JE) Sorotipos de Dengue (vacina tetravalente) Anticorpos neutralizantes Soroconverso Principais problemas