Instituto Politcnico Nacional Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnologa Ingeniera Enzimtica

Mtodos Basados en Electroforesis Concentracin de enzimas: secado, liofilizacin y ultra filtracin

Grupo: 4BM1 EQUIPO 3

Medina Chvez Olin Mucio Olmos Erick Andrs Ramrez Resendiz Josu Armando Snchez Snchez Erick No

ELECTROFORESIS

Objetivo
Conocer los principios generales y los diferencias que existen entre los distintos tipos de electroforesis.

Principios Generales
Cuando se aplica un campo elctrico a una solucin, las molculas de soluto con carga neta positiva se desplazan hacia el ctodo y las molculas con carga neta negativa se desplazan hacia el nodo.

Electroferograma

Electroforesis capilar por zona.

 La velocidad con la que las molculas migran depende de dos factores.

q [=] Fuerza ejercida por el campo elctrico sobre la partcula. x q [=] Carga de la partcula en Coulomb ( C ) x [=] Fuerza del campo elctrico ( volts por metro)

Sin embargo resistindose al movimiento existe una fuerza de friccin (fv).

fv [=] Fuerza de friccin. x f [=] coeficiente de friccin que depende del tamao y forma de la molculas. x v [=] velocidad de la partcula. Nota: las molculas grandes o asimtrica tienen
mayores coeficientes de friccin que las molculas pequeas y compactas.

 Cuando se activa el campo elctrico, la molcula acelera rpidamente hasta alcanzar una velocidad en la que estas fuerzas se equilibran y luego se mueve constantemente a esa velocidad. La velocidad constante viene determinada por el equilibro de las fuerzas.
fv = q Se reescribe la ecuacin para expresar la velocidad del movimiento por unidad de fuerza del campo, v/

= movilidad electrofortica de la molcula. Ze= carga sobre la molcula. e = carga del protn o electrn . Z = numero de unidades de carga( un numero entero positivo o negativo).
Nota: Esta ecuacin es una aproximacin ya que no se toma en cuenta los efectos de la atmosfera inica.

 Aunque la electroforesis pueda llevarse a cabo de modo libre en una disolucin, es mas conveniente utilizar alguna clase de medio de soporte. Los dos medios de soporte mas utilizados, el papel y el gel.

Electroforesis en papel y electroforesis en gel

Electroforesis en papel

Electroforesis en gel

Electroforesis en papel
Se extiende un trozo de papel filtro humedecido con una solucin amortiguadora pata controlar el pH, entre dos cubetas que contiene electrodos. Se coloca en el papel una gota de la mezcla que se va a analizar y se aplica la corriente elctrica. Cuando las molculas se han desplazado durante un periodo de tiempos suficiente, se retira el papel y se tie con un colorante que da color a las sustancia que se van a examinar.
Cada clase de molcula cargada de la mezcla se habr desplazado hacia una distancia determinada hacia el nodo o haca el ctodo, dependiendo de su cara y dimensiones, y aparecer como una mancha coloreada en el papel en la nueva posicin.

Electroforesis en gel
Se coloca un gel que contenga la solucin amortiguadora adecuada a modo de lamina entre dos placas de cristal. Los materiales mas corrientes son la poliacrilamida (polmero soluble en agua), y la agarosa (polisacrido).
La lamina se coloca entre los compartimientos de los electrodos, seleccionado la parte inferior como nodo o como el ctodo, dependiendo de si se van a separar aniones o cationes. Con una pipeta se coloca una pequea cantidad de solucin de cada muestra en la parte superior de las muescas en la parte superior del gel. (generalmente a la muestra se la aade glicerol y un colorante de localizacin catinico o aninico soluble en agua.
x Glicerol.- Hace que la mezcla se mas densa para evitar que se mezcle con la solucin amortiguadora en la cmara del electrodo superior. x El colorante.- Se desplaza mas rpido que la mayora de los macroiones por lo que permite seguir la evolucin del experimento.

 La corriente se mantiene conectada hasta que la banda de colorante est cerca de la parte inferior de la lamina. Entonces se retira el gel de entre las placa de cristal u generalmente se tie con un colorante que se une a las protenas o a los cidos nucledos. En ese momento se toma una fotografa del gel para guardar la informacin obtenida.

Bibliografa
Bioqumica, C.K. Matthews; K. E. Van Holde; K. G. Ahern, 3era edicin, Editorial Pearson, Madrid 2002, pags 59-63, 498, 1039-1041.