TEMA: UROCULTIVO

GRUPO # 1

El Urocultivo se utiliza para diagnosticar bacteriuria, la orina constituye un mtodo excelente para cultivar la mayor parte de microorganismos que infectan el aparato urinario. La combinacin de piuria con bacteriuria considerable sugiere la presencia de una infeccin urinaria

La etiologa de las infecciones urinarias vara relativamente segn se hayan adquirido extra o intra hospitalariamente

En primer caso, son casi siempre monomicrobianas, y en el segundo acostumbran a ser polimicrobianas.

Entre los cocos Gram positivos destacan estreptococcus faecalis sobre estaphilococcus, que se presentan en la misma proporcin plasma coagulasa positivo que negativo.

Dentro de ellos bacilos Gram negativos predomina la E. coli, seguido de proteus mirabilis, y con menor frecuencia klebsiella pneumoniae, pseudomona aeruginosa y el resto Enterobacteriaceae.

Las bacterias que se encuentran en la parte baja de la uretra y pueden contaminar la orina sin producir por lo general infecciones, pertenecen a los gneros lactobacilos, Bacillus, y corynebacterium.

Otros microorganismos que tambin se hallan en la orina, sobre todo de mujeres y que proceden de vagina son trichomonas, la gardnerella vaginalis, y neisseria gonorrhoeae.

 BACTERIURIA SIGNIFICATIVA

Se refiere a la cantidad de bacterias que hay que encontrar en una orina para considerar que esta infectada. Los limites aceptados en los estudios de la parte media de miccin manital de nios y adultos son los siguientes:

Recuentos inferiores de 10.000 U.F.C/ ml: se considera probable contaminacin Entre 10.000 y 100.000 U.F.C/ml es dudoso y se debe repetir el estudio Mayor a 100.000 U.F.C / ml se considera infeccin.

Normas bsicas generales:



     

Las muestras deben venir acompaadas de su respectiva hoja de pedido donde deben llenarse todos los datos solicitados por el laboratorio: Nombre y Apellido completo N de Historia Clnica edad sexo servicio y cama tipo de muestra: catter, suprapbica, etc. recibi antibiticos en los ltimos 7 das, si es as anotar nombre del ATB y dosis control o sospecha de algn germen anterior

OBTENCION DE LA MUESTRA

En la mujer: consiste en apartarlos labios uretrales y lavar cuidadosamente la vulva con una esponja empapada en una solucin jabonosa no bactericida. La operacin se debe repetir 3 veces, y se eliminan los restos de lavado con una esponja seca. La miccin se efecta manteniendo los labios separados desechando la primera porcin y recogiendo la central en un recipiente estril.

En el hombre: se retira el prepucio, y se lava el glande con una esponja empapada en solucin no bactericida, durante 3 veces consecutivas, despus se seca con una gasa estril y se recoge la parte intermedia de la miccin en un recipiente estril.

En nios: Se lava la regin genital con una esponja empapada en detergente no bactericida, repitiendo la accin 3 veces y secndolo con una gasa estril. Se le sostiene boca a bajo, frotndole los msculos para espinales los cuales estimulan sus deseos de orinar (reflejo de Prez). Si o resulta se Colca una bolsa estril, sobre los genitales del nio esperando que la orina fluya espontneamente.

En recin nacidos, en nilos, y en pacientes con dificultades para orinar se recurre a la toma de muestras por puncin suprapubica, que debe efectuarla un especialista. No es recomendable extraer la orina por sondaje o catter, ya que fcilmente se puede provocar una infeccin.

En recin nacidos, en nios y en pacientes con dificultades para orinar, se recurre a la toma de muestras por puncin suprapbica, que debe efectuarla un especialista. A menos que sea necesario, no es recomendable extraer la orina por sondaje o catter, ya que fcilmente se puede provocar una infeccin.

ASPIRACIONES SUPRAPBICAS


Las aspiraciones suprapbicas estn reservadas casi con exclusividad para neonatos, nios pequeos y en ocasiones para adultos con sospechas clnicas de infeccin de las vas urinarias, en las cuales las muestras por captura limpia han fallado para establecer un diagnstico.

Transporte de la muestra


La orina es un buen medio de cultivo que permite la multiplicacin de los microorganismos incrementando el recuento bacteriano, por lo que las muestras deben procesarse antes de 2 horas de obtenidas. Si ello no es factible, las muestras deben refrigerarse a 4C. Una muestra puede mantenerse refrigerada, sin que se altere el recuento bacteriano, durante 24 horas. Los preservantes que inhiben la multiplicacin bacteriana no han resultado mejores que la refrigeracin, son de alto costo y tienen el inconveniente de interferir con algunas determinaciones de la tira reactiva de orina.

Metodos para la obtencin de muestras



Se considera una etapa crucial en el procesamiento de los urocultivos ya que la posibilidad de contaminacin con bacterias de la flora comensal de piel, perin y uretra distal, es muy alta e induce a la generacin de resultados falsamente positivos. La Sociedad Americana de Microbiologa considera aceptable un porcentaje de contaminacin en las muestras de orina no superior a 5%. Se describen al menos 5 mtodos para la obtencin de orina a cultivar, los que se muestran en la Figura 1.

MATERIALES
MEDIOS

Las bacterias para su desarrollo requieren de sustancias nutritivas cuyos componentes bsicos deben satisfacer las mnimas exigencias nutricionales y condiciones de atmsfera (aerobiosis, anaerobiosis, microaeroflia), pH y temperatura ptima para su crecimiento in vitro. La eleccin de los medios de cultivo se realiza en funcin a la localizacin de las infecciones y las bacterias a investigar. Los errores cometidos durante este paso del ciclo de procedimientos pueden invalidar la lectura e interpretacin de los cultivos.

 Los medios usados son: Placas con agar sangre de carnero (AS) Placas con agar Mc Conkey (McC) Otros medios: para hongos si es necesario Agar Sabouraud

Asa calibrada: asas de de platino o descartable , se pueden usar las siguientes medidas: 0.001 ml ( 1ul) para detectar colonias mayores de 1000 UFC/ml 0.01 ml (10ul) para detectar colonias entre 100 1000 UFC/ml

ETAPA ANALITICA
I.- MICROSCOPIA Y OTROS METODOS DIRECTOS Tincin de Gram y Examen directo de la muestra Es un mtodo rpido, econmico, sensible y especfico para detectar bacteriuria. Para determinar el tipo y conteo de bacterias y clulas en la orina. Se recomienda realizarlo como respaldo frente a discordancias o hallazgos especiales

 Debe aplicarse a la muestra recin agitada sin centrifugar, con el mismo asa de 1l (o de 10 l) empleado en la siembra del urocultivo, depositando este volumen en un portaobjetos; pueden colocarse hasta 10 muestras por lmina. Estas se tien y pueden ser observadas cuando existen discordancias entre el urocultivo y el examen directo. La presencia de una bacteria/campo de inmersin tiene buena correlacin con > 100.000 UFC/ml en ~ 85% de los casos. La presencia de muchas clulas epiteliales y morfotipos microbianos diferentes sugieren contaminacin

Cultivo microbiolgico


La metodologa de la inoculacin de la muestra en medios de cultivo o siembra microbiolgica depende de la forma de obtencin de la muestra: Para orinas de segunda miccin, recolector y catter a permanencia, las muestras deben sembrarse con asa de 1 l en placas de un medio enriquecido como Agar Sangre y algn medio selectivo-diferencial: Agar Mac Conkey. El desarrollo de una colonia en el cultivo debe multiplicarse por 1000. Para orinas obtenidas por cateterizacin vesical, las muestras pueden sembrarse con asa de 10 (1 colonia = 100 ufc/ml) y 1 l (1 colonia = 1000 ufc/ml). Para orinas obtenidas por puncin vesical, se recomienda la siembra en agar sangre ms un medio selectivo-diferencial para bacilos Gram negativos o siembra directa de 100 l (1 colonia = 10 ufc/ml).

INOCULACIN

Usar el asa calibrada, flamear, dejar enfriar, mantener en posicin vertical introducir solo el aro debajo del nivel de la orina previa mezcla de la orina sin centrifugar. Estriar en la placas de cultivo de la siguiente manera: Estriar de arriba hacia el centro de la placa y estriar la orina en una serie de pasos de ngulo de 90 a travs del inculo (solo para el mtodo de 0.001 ml). Otra forma es dejar la muestra con el asa en el primer cuadrante y estriar en V, luego proceder con los otros cuatro cuadrantes siguientes.

Sin flamear el asa estriar atravesndola lnea del inoculo en el sentido de las flechas.

Incubacin Una vez sembradas las placas deben incubarse durante 24 horas a 35 - 37 C. Incube 48 horas.

Examinacin del medio de cultivo



   

Al momento de informar los urocultivos, se recomienda revisar el resultado del sedimento para que ambos informes sean concordantes. Es necesario definir qu se entiende por sedimento sugerente de ITU para poder evaluar las discordancias entre el sedimento y el urocultivo: Piocitos: > 10 /ul > de 5-6 por campo de 40x Leucocitos: > 10 /ul > de 5-6 por campo de 40x Bacterias: Regular o abundante cantidad La presencia de clulas descamativas y/o mucus en una paciente mujer, sugiere que la muestra est contaminada con secrecin vaginal.

UROCULTIVO POSITIVO


Recuento de colonias de acuerdo al asa calibrada usada, multiplicar segn la dilucin. 0.001 mL 1 colonia = 1000 UFC/ml 0.01 mL 1 colonia = 100 UFC/ml Cuando las colonias son tan numerosas para el recuento, tener en cuenta que el mximo de una asa de 0.001 es > 10 UFC/ml y el mximo para el asa de 0.01 es >10 UFC/ml.

Placas de agar McConkey y de agar CLED, donde ha crecido un Escherichia Coli en cultivo puro, con un recuento superior a 100.000 UFC/ml. (cultivo sembrado con asa calibrada de 1/1000).

ETAPA POST-ANALITICA POSTREPORTE DE RESULTADOS

a) Reporte de la Tincin Gram: resultados de bacterias y clulas. b) Cultivos Negativos, Reportar: de acuerdo al asa calibrada utilizada. Negativo dil 1/100UFC/ml o Negativo dil 1/1000 UFC/ml. por 24 o 48 horas. c) Cultivos positivos, reportar:

Si solo se observa flora microbiota de piel o urogenital: 10000 UFC/ml microbiota urogenital normal. Reportar el recuento de colonias de cada patgeno separadamente seguido por la identificacin presuntiva o definitiva con la susceptibilidad Cuando se observa inhibicin por antimicrobianos, reportar: Se detect inhibidor antimicrobiano con su recuento respectivo. Notificar al clnico posibles hallazgos inusuales (Ejm: Salmonella tiphy o Burkholderia pseudomallei).

Tabla 1. Interpretacin microbiolgica del urocultivo y conducta recomendada

Recuento de colonias (UFC/ml) 0 Cualquier recuento 1.000 Condicin clnica o mtodo de recoleccin Puncin suprapbica Cateterizacin transitoria Sedimento urinario Microorganismo aislado Interpretacin/ Conducta recomendable Urocultivo negativo Identificacin y estudio de susceptibilidad Idem

Independiente del resultado Independiente del resultado Independiente del resultado

Cualquier microorganismo < 2 especies uropatgenas

> 10.000

Segunda miccin en paciente especial* Orina por catter permanente Segunda miccin

Independiente del resultado

< 2 especies uropatgenas

Idem

> 10.000

Patolgico

< 2 especies uropatgenas < 2 especies uropatgenas

Idem

> 10.000

Patolgico

Idem

Recuento de colonias (UFC/ml)

Condicin clnica o mtodo de recoleccin

Sedimento urinario

Microorganismo aislado

Interpretacin/ Conducta recomendable

> 100.000

Segunda miccin

Patolgico

2 uropatgenos + otra bacteria con recuento 10 veces menos < 2 especies uropatgenas

Identificacin y susceptibilidad slo de los uropatgenos Identificacin y estudio de susceptibilidad Polimicrobismo. Solicite nueva muestra

> 100.000

Segunda miccin

Sin antecedente del sedimento

> 100.000

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>3 microorganismos, sin predominio de alguno

TIPOS DE COLONIAS DE ALGUNAS BACTERIAS STAPHILOCOCCUS: Convexa, de borde entero de dos a tres mm, cremosa, amarillenta.

ESTREPTOCOCCUS: Convexa o pulvinada, traslucida, butirosa

PROTEUS: Plana, gris, que se despliega como una delgada pelicula sobre la superficie del agar, olor a chocolate quemado.

MICROORGANISMOS MS FRECUENTES AISLADOS EN UROCULTIVOS