Regulación hormonal de las

respuestas de los cítricos al estrés

salino e hídrico:

Rutas moleculares de señalización

de los estímulos hormonales
 Líneas de investigación
Condiciones adversas
Adaptación
Señal Respuesta
Estímulo
hormonal Fisiológica
Daños

Transducción Expresión
De la señal Función
génica
 Respuestas al estrés
• Cierre estomático
• Ajuste osmótico
• Activación del sistema antioxidante
• Reducción del crecimiento y cosecha
• Abscisión
 Potencial hídrico (MPa)
A
Las condiciones -0.5

-1.5
de estrés hídrico
-2.5
alteran la
-3.5
fisiología de los Estrés hídrico Rehidratación

Conductancia estomática
140 B
cítricos
(mmol / m · s)
100

2 60

20

0 10 20 30 40 50
Tiempo (horas)
Efecto del estrés hídrico sobre la abscisión de hojas

Experimento

A B

EH EH+R EH EH+R

(%) (%)

- NFZ 0 47 ± 6 0 27 ± 4
+ NFZ 0 10 ± 2 0 7±2
 ABA (nm
40

20

0
Estrés hídrico Rehidratación
ABA (nmol / g peso seco)

6 15
A

ACC (nmol / g P S)
12
B
4
9

2 6

3
0 0
Estrés hídrico Rehidratación
20

Etileno (nL / g P S · h)
C
ACC (nmol / g peso seco)

75
B
15
50
10
25
5

0 0

0 10 20 30 40 50 0 10 20 30 40 50
Tiempo (horas) Tiempo (horas)
Efecto de la adición de ABA (1 mM) sobre los niveles
de ACC en raíces

ACC (nmol / g PS)

Infiltración Irrigación

Control 3.7 ± 0.1 4.9 ± 0.3

ABA 12.3 ± 2.1 10.7 ± 0.4

ABA+NFZ 9.6 ± 0.6 9.0 ± 0.2

NFZ ND 4.1 ± 0.3

 ABSCISIÓN FOLIAR

Oxidación de ACC a etileno en hojas

Transporte de ACC de raíces a hojas

Acumulación de ACC en raíces

Acumulación de ABA en raíces

ESTRÉS
Efecto del estrés salino sobre los cítricos
 RESPUESTAS A LA SALINIDAD

• Respuesta inicial, intensa y transitoria, que se

debe principalmente al estrés osmótico.

• Segunda fase de respuesta acumulativa y

drástica que depende de la acumulación de
iones tóxicos.
RESPUESTAS FRENTE AL ESTRÉS OXIDATIVO
RESPUESTAS FRENTE AL ESTRÉS OXIDATIVO

• Los cítricos son capaces de activar todos sus

sistemas antioxidantes y evitar el estrés oxidativo
provocado por elevadas concentraciones salinas

• La abscisión foliar provocada por la salinidad en

cítricos se debe a la intoxicación celular por iones
cloruro ya que el sistema antioxidante celular evita
la acumulación de ROS y el daño de membranas
 TRATAMIENTOS PALIATIVOS

• Tratamientos que eviten la condiciones adversas:

• Hidrogeles
• Desalinizadores
• Tratamientos que induzcan mecanismos de defensa:
• Fitorreguladores
• Fertilización nitrogenada
 Líneas de investigación
Condiciones adversas
Adaptación
Señal Respuesta
Estímulo
hormonal Fisiológica
Daños

Transducción Expresión
De la señal Función
génica
 Sistema Experimental
Embryo-less half seed

Germination

Sugars & Starch &

Amino acids Proteins

α -
GA Amylases
Proteases

Aleurone Layer
ABA
Seed Coat
 Ventajas de la capa de aleurona
como sistema modelo

• Tipo celular homogéneo y diferenciado

• Tejido especializado en la secreción de
enzimas hidrolíticas
• Expresión génica relativamente simple
• Alta sensibilidad a hormonas (GA y ABA)
 Sistema de expresión génica transitoria

Pistola de genes
Tejido transformado

Proyectiles cargados
con partículas
recubiertas de DNA

Tejido diana
Funcionamiento del sistema de expresión transitoria

Construcción informadora
Promotor α -amylase GUS Amy-T

Actividad GUS (x103)

50
40
30
20
2 3

10
0
GA3 _ + +
ABA _ _ +
 Rutas de señalización hormonal
en la capa de aleurona
Genes inducidos por ABA
ABA (HvA1, HvA22)

Moléculas implicadas en el bloqueo de la

transducción de la señal de las GA por ABA

α -Amilasas
GA Proteinasas
 Moléculas candidatas

GAMyb:
• Factor de transcripción
• Expresión inducida durante la germinación y en
respuesta a GA
• El pico de expresión precede al de la α -amilasa
• Transactiva α -amilasas

α -Amilasas
GA GAMyb
Proteinasas
 Moléculas candidatas
PKABA1:
ABA • Protein kinasa
• Expresión en
embriogénesis tardía
PKABA1 • Inducida por ABA,
salinidad, frío y sequía

α -Amilasas
GA Proteinasas
GAMYB transactiva el gen de la α -
amilasa

Construcción inductora
Promotor Ubiquitina NOS-T
GAMyb

Construcción informadora
Promotor α -amilasa GUS Amy-T
GAMYB transactiva el gen de la α -
amilasa
B
Relative GUS activity (x10-3 ) 40

30

20

10

0
0 50 100 150
RELATIVE AMOUNT OF EFFECTOR (%)
PKABA1 bloquea la expresion del gen α -
amilasa

Construcción inductora
Promotor Ubiquitina NOS-T
PKABA1

Construcción informadora
Promotor α -amilasa GUS Amy-T
Efecto de PKABA1 sobre la expresión
del gen de la α -amilasa
Intersección entre las dos rutas de transducción

Genes inducidos por ABA

ABA (HvA1, HvA22)

PKABA1

?
?
α -Amilasas
GA GAMyb
Proteinasas
Ni el ABA ni PKABA1 bloquean la inducción
por GAMyb del gen de la α -amilasa
Relative GUS activity (x10-3 )
50

40

30

20

10

0 2 3 5 6

GA3 _ + + + _ _ _
_ ABA _ + _ _ + _
PKABA1 _ _ _ + _ _ +
GAMyb _ _ _ _ + + +
PKABA1 bloquea la expresión de GAMyb

Construcción inductora
Promotor Ubiquitina NOS-T
PKABA1

Construcción informadora
Promotor GAMyb GUS Amy-T
PKABA1 bloquea la expresión de GAMyb
Relative GUS activity (x10-3 ) 60

50

40

30

20

10

0
GA3 _ + _+ _ + _ +
null-
EFFEC T O R _ PKA BA 1 CDPKci PKA BA 1
 ABA actúa “upstream” de GAMyb

Genes inducidos por ABA

ABA (HvA1, HvA22)

PKABA1

α -Amilasas
GA GAMYB
Proteinasas
 ABA-induced genes
ABA (e.g. HvA1, HvA22)

PKABA1

cGMP α -Amylases
GA SLN1 GAMyb
Proteinases