INTRODUCCIÓN A LOS MÉTODOS

ÓPTICOS DE ANÁLISIS
Química Analítica Instrumental
Comisión B
 Los métodos ópticos de análisis cubren un amplio
campo de aplicación, incluyéndose bajo su
denominación todos aquellos que implican la medida
de la radiación electromagnética emitida por la
materia o que interacciona con ella.

Actualmente el uso de métodos espectroscópicos está

generalizado, debido a su rapidez, a la gran gama de
instrumentación disponible y sus grandes posibilidades
de automatización.
 Interacción entre la Radiación
Electromagnética (REM) y la Materia

La REM posee una doble condición

con sus propiedades respectivas: es
una onda en cuanto a su transmisión
y es partícula (Fotón) en cuanto
tiene una energía asociada.

Las Propiedades de onda nos

permite seguir su movimiento y
podemos ver como se transmite, si Las propiedades de partícula nos
es reflejada, si cambia de dirección o indica cual es su energía con la que
refractada, si es interferida si se puede interaccionar con la materia.
produce un dispersión anómala o
“scattering” o si es polarizada.
Clasificación de los métodos ópticos

Métodos espectroscópicos, son aquellos

en los que existe intercambio de energía
entre la radiación electromagnética y la
materia.
Es posible clasificar
los métodos ópticos
en
espectroscópicos
y no Se basan en procesos
espectroscópicos. En estos métodos se de absorción y
miden espectros, emisión, y las
siendo éstos debidos a transiciones entre
transiciones entre distintos niveles
distintos niveles energéticos pueden
energéticos. tener lugar a nivel
atómico o molecular.
Clasificación de los métodos ópticos

Métodos no
espectroscópicos

No se producen
transiciones entre los
Se caracterizan por no
diferentes estados Los principales
tener lugar intercambio
energéticos, sino que lo mecanismos de
de energía como
que realmente ocurre interacción implicados
consecuencia de la
son cambios en la son la dispersión,
interacción materia–
dirección o en las difracción, refracción y
radiación
propiedades físicas de polarización.
electromagnética.
la radiación
electromagnética.
Clasificación de los métodos ópticos
Absorción niveles moleculares:UV-visible.
ESPECTROSCOPICOS IR, microondas
niveles atómicos: absorción
atómica, rayos X
Emisión niveles moleculares:
luminiscencia (fluorescencia,
fosforescencia)
niveles atómicos: espectrometría
de emisión, fotometría de llama,
ICP, fluorescencia de rayos X,
fluorescencia atómica
Dispersión: turbidimetría,
ESPECTROSCOPICOS

nefelometría
Refracción: refractometría,
interferometría
NO

Difracción: rayos X,
electrones
Rotación óptica:
polarimetría, dicroísmo
circular
Características ondulatorias de la REM

Puede considerarse que

la REM está constituida
por ondas que se
propagan en el espacio a
la velocidad v.

Las ondas están

constituidas por
componentes eléctricos Onda polarizada en un plano que se
y magnéticos propaga a lo largo del eje X.
perpendiculares entre sí.
Características ondulatorias de la REM

Longitud
de onda, λ
Es la distancia entre dos puntos de
la onda que han pasado un ciclo
completo; esto es, por ejemplo, la
distancia entre máximos o mínimos
sucesivos.

1 angstrom (A) = 10–10 m

Se expresa en cualquier unidad de
1 nanometro (nm) = 10–9 m longitud, siendo las más frecuentes
1 micrometro (μm) = 10–6 m el m, cm, A, nm y µm.
Características ondulatorias de la REM

Frecuencia, ν Número de onda,

Es el número de ciclos Se define como la inversa

por unidad de tiempo. de la longitud de onda.
Veces que pasa por un Su unidad más utilizada es
determinado punto en 1 el cm–1.
seg.
La unidad de frecuencia
es el segundo recíproco,
s–1 o hertz (Hz)
Características ondulatorias de la REM
 La relación entre los parámetros mencionados es:
v = λν
 Donde v= velocidad de propagación de la onda.
 En el vacío la velocidad de propagación alcanza su
máximo valor, que es de 2.9979x1010 cm.s-1
 En cualquier medio distinto del vacío, la velocidad de
propagación, v, es menor que c.
 Su cociente se denomina índice de refracción, n

c
n=
v
ÍNDICE DE REFRACCIÓN

Debido a la relación entre c y v, cuando la radiación pasa del vacío a

cualquier otro medio material, su longitud de onda debe disminuir:
Propiedades corpusculares de la radiación
 Para describir cuantitativamente determinadas
interacciones con la materia se hace necesario considerar
a la REM como un flujo de partículas o corpúsculos,
llamados fotones.
 La energía del fotón es proporcional a la frecuencia de la
radiación (relación de Einstein–Planck):

 donde h es la constante de Planck (6.63x10–34 J.s).

ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO
ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO
EL ESPECTRO VISIBLE
Las λ asociadas con la luz visible son capaces de afectar la retina
del ojo humano, creando la impresión subjetiva de la visión y el
color.

Nosotros “vemos” los objetos por medio de la luz que ellos

emiten o reflejan.

Cuando la “luz blanca” (que contiene todas las longitudes de

onda) pasa a través de un objeto que es transparente a ciertas λ,
pero que absorbe otras, el medio aparece coloreado.

Dado que sólo las λ transmitidas llegan al ojo, éstas indican el

color del objeto. Este color es complementario a la luz que
absorbe el objeto.
EL ESPECTRO VISIBLE

λ (nm) Color Color

complementario
400-435 Violeta Amarillo-verde
435-480 Azul Amarillo
480-490 Verde-azul Anaranjado
490-500 Azul-verde Rojo
500-560 Verde Púrpura
560-580 Amarillo-verde Violeta
580-595 Amarillo Azul
595-610 Anaranjado Verde-azul
610-750 Rojo Azul-verde
Interacción Materia–REM

Puede ser absorbida por ella

(generalmente de forma
parcial)

Parte de la radiación puede

Incide REM sobre una ser dispersada o re-emitida,
muestra material con o sin cambio en la
longitud de onda.

Como consecuencia de la
Por otra parte, la muestra interacción, se puede
puede emitir REM si se la originar un cambio en las
excita bajo determinadas propiedades de la radiación,
condiciones. sin necesidad de producirse
absorción y emisión.
Niveles de energía de una molécula
 Además de la energía de traslación, la molécula posee una
energía interna que puede dividirse 3 clases.
 La molécula puede rotar alrededor de varios ejes y
poseer energía rotacional.
Niveles de energía de una molécula
 Los átomos o grupos de átomos que forman una
molécula pueden vibrar, esto es, moverse unos con
respecto a otros en sus posiciones de equilibrio.
 Esto da a la molécula una energía vibracional.
Niveles de energía de una molécula
 Una molécula posee energía electrónica, la cual es el
potencial asociado a la distribución de las cargas
eléctricas negativas (electrones) con relación al núcleo
cargado positivamente.

E =E +E +Erot
int elec vibr

Una molécula no puede poseer una cantidad

arbitraria de Eint, sólo puede existir en ciertos
estados de energía permitidos.
Cuantización de la energía

Al irradiar una
molécula con
Si una molécula un haz de
va a absorber Esta radiación
energía para cuantización policromático,
pasar de un establece la las moléculas
estado selectividad sólo
energético que poseen las absorberán
superior, debe moléculas para aquellas λ que
absorber la absorber correspondan a
cantidad energía la diferencia de
definida para la radiante. energía entre
transición. dos estados
permitidos de
la molécula.
Ley de distribución de Boltzman
 Relaciona el número de átomos o moléculas que pasan al
estado excitado con el de los que permanecen en el estado
fundamental y con la energía absorbida:

 Ni : número de átomos o moléculas en el estado excitado,

 N0 : átomos o moléculas que permanecen en el estado
fundamental,
 E la energía aplicada,
 k la constante de Bolzman,
 T la temperatura
 g0 y gi son constantes relacionadas con la probabilidad de que
el átomo o molécula interaccione con la energía aplicada.
Espectros de absorción y de emisión
 Cuando una especie absorbe REM pasa a un estado
excitado de mayor contenido energético:

 Para que tenga lugar la absorción es necesario que se

cumplan las siguientes condiciones:
 a) Tiene que existir una interacción entre el campo eléctrico de
la radiación y alguna carga eléctrica de la materia.
 b) La energía del fotón incidente debe satisfacer exactamente
los requerimientos de la energía cuantizada de la sustancia.
Espectros de absorción y de emisión
Espectros rotacionales
 Los niveles de energía rotacional están muy cercanos
entre sí.
 Las transiciones rotacionales requieren muy poca energía
(λ largas), correspondiendo al IR lejano y las microondas
(100µm – 10 cm).
 Los estudios de absorción en esta región se utilizan en la
determinación de estructuras moleculares.
Transiciones vibracionales–rotacionales
 Los niveles de energía de vibración, están algo más
separados.
 Para producir una transición vibracional se requieren
fotones más energéticos, de la zona del IR (2 – 100 µm).
 No se observan transiciones vibracionales puras, porque
los cambios rotacionales estarán siempre presentes.
Transiciones electrónicas
La absorción de radiación VIS y UV provoca transiciones
electrónicas en las moléculas.

La región de absorción está determinada por la diferencia entre

los niveles electrónicos.

Los efectos rotacionales y vibracionales están presentes en un

espectro electrónico, dando la “estructura fina”.
Procesos de desactivación: Relajación
vibracional

Tiene lugar sin emisión de

radiación.

Se transfiere la energía
mediante colisiones a otras
especies vecinas.

La pérdida de energía tiene

lugar en forma de calor, el cual
se distribuye por todo el
medio.
Procesos de desactivación:
Fluorescencia
La molécula se relaja hasta el
estado electrónico
fundamental emitiendo el
exceso de energía en forma
de radiación
electromagnética.

Las longitudes de onda de

estas radiaciones emitidas
son mayores que la longitud
de onda correspondiente a la
radiación incidente.
Emisión de resonancia
Se produce cuando la energía
previamente absorbida por una
especie se pierde íntegramente
en forma de radiación
electromagnética, siendo ésta de
la misma frecuencia que la de la
radiación absorbida.

Este proceso es muy poco

frecuente, presentándose casi
exclusivamente en sistemas de
átomos aislados en los que la
probabilidad de choques es
prácticamente nula.
ESPECTROFOTOMETRÍA DE
ABSORCIÓN UV-VISIBLE
Fundamentos
 Se basa en la absorción de radiación UV y Vis por un
analito
 Se origina un estado excitado que posteriormente elimina
su exceso de energía en forma de calor
 Esquemáticamente:

 La cantidad de calor disipado es muy pequeño.

Leyes de absorción de la radiación.
Ley de Beer

Ambas leyes se combinan en la ley de Bouguer-Lambert-Beer,

o más comúnmente, ley de Beer, por ser la concentración el
parámetro de mayor aplicación en Química Analítica.
LEY DE BEER
POSTULADOS Y DEDUCCIÓN
En la deducción de
la ley de Beer se
considera que:

el único mecanismo de
interacción entre radiación y
materia es la ABSORCIÓN

la radiación utilizada es
MONOCROMÁTICA
Consideremos un haz de
potencia radiante Po que
atraviesa un medio los centros absorbentes son
absorbente de sección S y INDEPENDIENTES
espesor b.
La potencia del haz la sección transversal es
emergente es P. UNIFORME
LEY DE BEER
Si analizamos un elemento de espesor
infinitesimal dx, al atravesarlo, la
potencia del haz disminuirá en una
cantidad dP por la interacción con las
dn partículas que allí.

- dP = dS Probabilidad de
Fracción absorbida
P S captura de un fotón
dS = suma de las áreas de captura
de las dn moléculas en el elemento
de volumen S.dx considerado
Con cada partícula podemos
asociar una sección eficaz de
captura α
dS= αdn
LEY DE BEER
Reemplazando e integrando para todo el
espesor del material absorbente 0 ≤ x ≤ b

Llamaremos TRANSMITANCIA T= P
P
y ABSORBANCIA o

A = -logT = α n
2,303S
 LEY DE BEER
Para su uso en Química Analítica, se prefiere expresar la
absorbancia en función de la concentración:

6,023 . 10 23.α.b.c
A= = ε.b.c
2,303.1000

-εbc
T =10
 ε se donomina absortividad molar, si la concentración está
expresada en mol/L.
 Es una característica de la especie absorbente, de la λ de la
radiación incidente, de la naturaleza del solvente, de la temperatura,
etc..
 Es independiente del camino óptico (b) y de la concentración de la
sustancia (c).
Medida de la Transmitancia y de la
Absorbancia
En cada interfase que separe
medios de diferentes valor
de n habrá pérdidas por
reflexión de radiación.

Normalmente,T y A no
pueden medirse Aproximadamente un 8.5%
directamente ya que la de la radiación se pierde
solución que contiene al cuando atraviesa una cubeta
analito debe colocarse en llena de agua.
una cubeta.

Además hay pérdidas de

radiación cuando la presencia
de ciertas moléculas grandes
dispersan la radiación
Pérdidas por reflexión y dispersión
Medida de la Transmitancia y de la
Absorbancia

Para compensar estos efectos, se compara la

potencia del haz transmitido por la solución del
analito con la potencia del haz transmitido por
una cubeta idéntica que sólo contiene solvente
DESVIACIONES DE LA LEY DE
BEER
Desviaciones de la ley de Beer

De acuerdo con la expresión

A = ε.b.c, una gráfica de A
versus c debería ser una
recta de pendiente εb.

Frecuentemente se
encuentran desviaciones a
este comportamiento, es por
este motivo que se debe
corroborar el cumplimiento
de la ley antes de hacer un
análisis cuantitativo.
Desviaciones de la ley de Beer
DESVIACIONES REALES
 En la deducción de la ley de Beer no se ha considerado que la
absortividad depende del índice de refracción, n, según la
expresión:

 Como, a su vez, n varía con la concentración, la absortividad

no es rigurosamente constante para cualquier concentración,
provocando desviaciones negativas.
 En la práctica, para concentraciones inferiores a 10–3 M puede
prescindirse de la influencia de este factor, al ser el índice de
refracción esencialmente constante.
DESVIACIONES INSTRUMENTALES
Las fluctuaciones producidas en la
corriente eléctrica, la inestabilidad
de algunas fuentes de radiación o
a) Uso de radiación no
la respuesta no lineal del detector
monocromática
pueden originar el
funcionamiento incorrecto de un
determinado aparato.

Además de éstos, pueden

considerarse los siguientes
factores de tipo instrumental b) Presencia de radiación parásita
como causas de desviaciones de la
ley de Beer:

c) Errores de lectura
Uso de radiación no monocromática
El cumplimiento estricto de la ley de Beer sólo se
observa cuando la radiación empleada es
monocromática.

En la práctica es raro el uso de radiación de una

única λ.

Los dispositivos empleados para seleccionar la λ de

trabajo generan una banda más o menos estrecha de
longitudes de onda.
Uso de radiación no monocromática
 Consideremos el siguiente sistema:
P0,1 P1
P0,2 P2

P = P +P y P = P +P (2)
0 0,1 0,2 1 2

ε1bc
P = P .10
La forma exponencial de
0,1 1
la ley de Beer ε 2 bc
P = P .10
0,2 2
 Uso de radiación no monocromática
ε bc ε bc
P = P .10 1 + P .10 2
0 1 2

ε1bc (ε 2 -ε1 )bc

P =10 (P + P .10 ) (1)
0 1 2

Haciendo el cociente de (1) y (2) y tomando logaritmos, obtenemos

la A:
P (ε - ε )bc
0
A = log = ε1bc+log( P1 + P2 .10 2 1 ) -log (P1 + P2 )
P

ε 1 ≠ ε 2 y no se cumple la ley de
ε 1 = ε2 y se cumple la ley de Beer, siendo mayor la desviación
Beer cuanto mayor sea la diferencia
entre ε 1 y ε 2
Uso de radiación no monocromática

Es un hecho experimental observado que las desviaciones de la ley de Beer resultantes

del uso de un haz policromático no son apreciables, con tal de que la radiación utilizada
no abarque una región del espectro en la cual el absorbente muestre cambios grandes en
la absorción en función de la longitud de onda.
 Desviaciones instrumentales originadas
por la radiación parásita
El haz de radiación que sale de un monocromador suele estar
contaminado con pequeñas cantidades de radiación parásita o
dispersada originada por reflexión de los distintos componentes
ópticos, dispersión por partículas de polvo atmosférico, etc.

Por otra parte, la propia muestra puede originar dispersiones.

Con frecuencia, la radiación dispersada tiene una longitud de onda

diferente respecto a la radiación principal, pudiendo además, en
ocasiones, llegar al detector sin haber atravesado la muestra.
Desviaciones instrumentales originadas
por la radiación parásita

 La absorbancia medida en
presencia de radiación parásita
es:

 donde Ps es la potencia del haz

dispersado.
Errores de lectura

Los errores indeterminados en la lectura de la

transmitancia o absorbancia son errores que
potencialmente siempre están presentes y es
necesario tenerlos en cuenta.

En ocasiones, pequeños errores en la lectura

de la transmitancia o de la absorbancia pueden
ocasionar errores grandes en la concentración
cuando se opera en los extremos de la escala.
 Errores de lectura

En λ1 el error absoluto cometido en la determinación de la concentración, para un

cierto error de lectura de T, es pequeño, pero al ser pequeña la concentración, el error
relativo puede ser grande.
En λ 3, la incertidumbre en la determinación de la concentración es alta, y en λ 2, hacia
la mitad de la escala, parece que se trata de la situación más favorable.
Errores de lectura
El mínimo error relativo se obtiene para una A de 0.434
(1)

(2)

donde ∂T representa el error indeterminado en la lectura de la

escala de T y ∂C indica la incertidumbre en la concentración.
Derivando esta ecuación de nuevo e igualando a cero, se obtiene
que la T óptima corresponde a 36.8 %, que equivale a una A de
0.434.
 DESVIACIONES QUÍMICAS

Se incluyen en este ítem toda una serie de

desviaciones aparentes de la ley de Beer producidas
como consecuencia de procesos químicos en los que
participan las especies absorbentes
Influencia del equilibrio

Cuando la sustancia problema

interviene o forma parte de un
sistema en equilibrio con otras
especies, el desplazamiento del
equilibrio implica una modificación
en la concentración, y, en
consecuencia, en la absorbancia
Equilibrio de Dimerización
 Cuando una solución de K2Cr2O7 no tamponada se
diluye, ocurre una transformación parcial en CrO4=, como
consecuencia del equilibrio dímero-monómero:

  
Cr2O  H 2O  2CrO  2 H
7 4
Equilibrio ácido–base
 Tomemos como ejemplo el caso de un ácido débil HA:

_
HA⇔H+ + A [H ][A
+ _
]
Ka =
[ HA ]
Si se trabaja a una λ a la que absorbe sólo la especie HA, se
cometerá un error si no se considera correctamente la
concentración de esta especie.

A =ε .b. HA A=ε .b.c

obs HA HA
Equilibrio ácido–base
 Podemos poner Aobs en función de la
concentración analítica de HA:
c = [ HA ] + [A _ ]

c [A _ ]
= 1+
[ HA ] [ HA ]
c.[H + ]
[ HA ] =
[A ]_
Ka
([H + ]+ K a )
y de Ka: =
[ HA ] [H + ]
c.[H + ]
A obs = ε HA .b.
([H + ]+ K a )
Influencia del solvente
Como consecuencia de las
interacciones soluto–solvente se
originan con frecuencia
No es posible hacer predicciones de
desplazamientos espectrales,
forma general.
ensanchamientos de bandas y otros
fenómenos que pueden provocar
desviaciones en la ley de Beer.

Desplazamiento batocrómico o
desplazamiento hacia el rojo,
consiste en un desplazamiento del
máximo de absorción hacia λ
mayores (este efecto suele
producirse en disolventes de alta
constante dieléctrica).
Algunos términos relacionados con
los desplazamientos espectrales:

Desplazamiento hipsocrómico o
desplazamiento hacia el azul, es el
desplazamiento hacia λ más cortas.
Influencia de la temperatura
La temperatura puede influir modificando el
equilibrio químico de algunos sistemas, así
como, en ocasiones, dar lugar a
desplazamientos batocrómicos.

De todas formas, la temperatura no suele ser

un factor a considerar en la mayor parte de
los sistemas absorbentes sencillos.
Presencia de impurezas en los reactivos
Muchos métodos espectrofotométricos son lo
suficientemente sensibles como para detectar
cantidades a nivel de trazas, por lo que la presencia
de impurezas absorbentes en los mismos reactivos
pueden originar errores considerables.

En la práctica analítica ordinaria, las medidas

espectrofotométricas se llevan a cabo frente a un
blanco constituido por el solvente y los reactivos.

Interesa que la absorbancia del blanco sea pequeña,

pues si es grande, un pequeño error en su medida
puede implicar un gran error relativo en el
resultado final.
 Interacciones entre especies
absorbentes

La interacción entre
ellas puede producir
alteraciones en la
Cuando en una distribución de cargas, Estas alteraciones en
solución existen varias como consecuencia de la distribución de
especies absorbentes, lo cual puede cargas también
la ley de Beer se modificarse la energía pueden ser originadas
cumple para cada una requerida para la por la presencia de
de ellas, si todas absorción y, en sales inertes
actúan consecuencia, (influencia de la fuerza
independientemente. variaciones en la iónica)
posición, forma y
altura de las bandas de
absorción.
 ERRORES PERSONALES

Recomendaciones:
Los
mayores
errores
suelen
cometerse
por el uso
inadecuado No deben secarse
de las Es necesario
asegurarse de que las Una vez limpias, las
interiormente,
mientras que el
cubetas. cubetas están
perfectamente
Las cubetas de vidrio
y cuarzo pueden
cubetas deben
enjuagarse con agua
exterior debe secarse
con papel suave,
limpiarse con ácido comprobando,
limpias, no rayadas y destilada y con varias
nítrico o con agua además, que, una vez
sin huellas o porciones de la
regia en frío. llena con la
adherencias en las solución a medir.
disolución problema,
paredes.
no contiene burbujas
de aire.