You are on page 1of 15

1.

TITULO
Producción de ácidos grasos poliinsaturados, obtenidos por
variación de temperatura en la etapa de crecimiento
constante de la fermentación de micro alga
“Nannochloropsis oculata” usando sanguaza y agua de mar
como medio de cultivo.
ASESOR:
• Ms. Víctor Castro Zavaleta

TESISTAS:
• Avalos Ludeña Jenrry
• Bazan Plascencia Jeimison
2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

• ¿Cuál será el efecto de la concentración de sanguaza/agua de mar


(%v/v) y la temperatura, sobre la producción de ácidos grasos en la
fermentación de micro alga (nanochloropsis oculata) ?

3. HIPOTESIS

• La concentración de 5% de sanguaza/agua de mar, y una temperatura


de 10°C en la etapa de mantención de la fermentación de micro alga
“Nannochloropsis oculata” producirá 40% de ácidos grasos
polinsaturados.
4. OBJETIVOS ESPECÍFICOS
• Realizar el análisis proximal de la sanguaza.
• Determinar los parámetros físico-químicos del agua de mar.
• Acondicionamiento de la cepa de nanochloropsis oculata.
• Preparar el medio de cultivo para la etapa de fermentación a diferentes concentraciones de
sanguaza/agua de mar.
• Inocular la cepa nanochloropsis oculata en las diferentes concentraciones en base de sanguaza y
agua de mar.
• Controlar los parámetros físico-químicos en la etapa de crecimiento durante la fermentación.
• Realizar la cinética de crecimiento en condiciones normales.
• Someter a diferentes temperaturas de refrigeración en la etapa de crecimiento constante: [5-15]
ºC por 7 días; para la producción de ácidos grasos polinsaturados.
• Realizar la extracción de lípidos de cada cultivo después de la fermentación, mediante el método
de Bligh y Dyer.
• Cuantificar la composición de ácidos grasos poliinsaturados mediante cromatografía de gases
(GC).
5. DIAGRAMA DE FLUJO DE LAS ACTIVIDADES PRINCIPALES
AGUA DE MAR
SANGUAZA
BIOMASA SECA

MICRO ALGA SEDIMENTACION


ESTERILIZACION
(nannochloropsis oculata) (24 horas)
(70º x 20 min) EXTRACCION DE LIPIDOS
POR SOLVENTE
ACONDICIONAMIENTO DE FILTRACION (2:1, CH3OH:CHCl3)
CENTRIFUGACION LA CEPA (Whatman 5/
(4000 rpm x 25 >2.5um)
min)

ESTERILIZACION
CENTRIFUGA (5000 RPM, Rendimiento
Temperatura: 20-22ºC. Aireación: 15L/h.
SEPARACION DEL pH: entre 7.0 y 9.0 Luz: de 40 w de 10 cm.
QUIMICA (hipoclorito de 20' 5ºC) (% lípidos)
sodio al 4,9%) x 24
SOBRENADANTE horas

FOTO REACTOR PREPARACION DE


AGUA DE MAR
SANGUAZA
UTILIZABLE
MUESTRA
UTILIZABLE (DERIVATIZACION)
DETERMINACION DEL
CRECIMIENTO
POBLACIONAL

ANALISIS Perfil de acidos


CROMATOGRAFICO grasos
TRATAMIENTO TERMICO
(5ºC,
(510ºC
- 15)Y ºC
15ºC)

CENTRIFUGAR (4000 RPM


X 20 min)

Figura02: Procedimiento experimental para


SECADO
LIOFILIZADO BIOMASA SECA cuantificación de ácidos grasos

Figura01: Procedimiento experimental para obtención de biomasa seca.


7. TÉCNICAS E INSTRUMENTOS DE RECOLECCIÓN Y DATOS

1. Métodos de análisis del agua de mar: 2. Análisis proximal de la sanguaza:

• Determinación de pH del agua de • Humedad: se determinara por el método


mar: se determinara por método A.O.A.C. (1995).
potencio métrico recomendado por la • Grasa: Se determinara por el método de
A.O.A.C. (1995). Soxhlet utilizando hexano como solvente
NTP-INTIENTEC 204.033
• Determinación de la salinidad: Se
determinara la salinidad midiendo la • Cenizas: Se determinara por incineración de
concentración del ion más abundante: la muestra a 600ºC por 4 horas según
el ion cloruro. La concentración del ión A.O.A.C. (1995) 942.05
cloruro se determina titulando el agua
• Proteínas: Se determinara según el método
con una solución de nitrato de plata. El
de A.O.A.C. 984.13
punto de equivalencia de la titulación
Determinación de solidos solubles: se
se determina utilizando cromato de
realizara a través de brixometro del método
potasio. APHA Standard Methods for
A.O.A.C. (1995).
the Examination of Water and
Wastewater, 1992 Salinidad (‰) = • Determinación del pH: se determinara por
0.03 + (1.805 x Clorinidad, ‰) método potencio métrico recomendado por
la A.O.A.C. (1995).
RESULTADOS 01:
Cuadro 01: Análisis proximal de la sanguaza
COMPONENTES PORCENTAJE
 PROTEINA 1,17± 0.08 %
• NITROGENO TOTAL 0,189 ± 0.012%
• NITROGENO AMONIACAL 0,945%
• NITROGENO ORGANICO 0,066%
 GRASA 0,08 ± 0.01%
 HUMEDAD 97,21%
 CENIZAS 3,13 ±0.8 %
 SOLIDOS TOTALES 2,79 ± 0.13 %
• SOLIDOS EN SUSPENSIÓN 0,25 ± 0.01 %
• SOLIDOS DISUELTOS 2,54%
pH 6,38 ± 0.05
Discusiones
• Es un hecho que las microalgas incrementan su contenido de lípidos al ser
sometidas a condiciones de estrés en particular bajo restricciones de nutrientes
(Gonzales y Magallanes, 2012).
• N. oculata es una especie rica en lípidos y su contenido en lípidos puede ser
incrementado exitosamente a través de la carencia de nitrógeno. (Cobos, 2016)
• Mientras la cantidad de lípidos totales puede llegar a incrementar
significativamente cuando existe limitación de nitrógeno sin embargo la tasa de
crecimiento o producción de biomasa es disminuida. (Caroline, 2016)
• Para Nannochloropsis sp. se evidenció un incremento en los ácidos grasos
poliinsaturados (linoleico, araquidónico, eicosapentanoico, docosahexaenoico) al
aumentar la concentración de nitrato y fosfato en el medio (Hu y Gao, 2006),
mientras el contenido de ácido eicosapentanoico se incrementó en un medio rico
solo en nitrógeno (Xu et al., 2004)
Discusiones
• Es la parte líquida orgánica del pescado, especialmente de la sangre y
vísceras ocurrido por la presión del pescado en las pozas de recepción
y bodegas de las embarcaciones. Este efluente tiene considerable
carga orgánica. Presenta entre 6.0 a 8.0% de sólidos totales y entre
1.0 - 2.0% de grasa (Pesca Perú, 1995)

• Según estudios realizados en Chile, la producción de sanguaza en las


plantas de harina de pescado puede alcanzar un 2 a 10% del pescado
almacenado (Parin et al., 1979, citados por Nuñez,(2014) )
Discusiones
• Las características físico químicas de la sanguaza, según, se muestra
en el cuadro A.
Cuadro A: Características físico químicas de la sanguaza
Solidos Totales Grasa Proteína Total Ceniza pH Autor
4.6 - 7.3% 0.8 – 1.2 % 2.2 - 4.4 % - 6.9 Del Valle et al.,(1990)

13.2 % 4.0 % 6.0 % 3.2 % - Silva B.,(2011)


6 - 8% 1-2% - - - Pesca Perú, (1995)

2.79 ± 0.13 % 0,08 ± 0.01% 1,17± 0.08 % 3,13 ±0.8 % 6,38 ± 0.05

Los resultados obtenidos de la caracterización de la muestra nos siguieren que la sanguaza recolectada para este
Trabajo tiene una cantidad de proteína menor a lo que reportan otros autores, esto se debe a que la sanguaza varia
Su composición dependiendo del lugar de donde es recolectado en este caso fue de las cubetas llenas de pescado y
Hielo derretido, este ultimo haciendo mas diluida esta sanguaza.
RESULTADOS 02:
Cuadro 02: Parámetros físico-químicos del agua de mar
COMPONENTES PORCENTAJE
 SALINIDAD 38 oo/o
pH 7,42 ± 0.03

• El contenido lipídico de las microalgas marinas y halófilas varía de


acuerdo a la concentración de sal en el medio. El incremento de
salinidad aumenta el contenido de lípidos intracelulares, triglicéridos,
ácidos grasos saturados y monoinsaturados; mientras la proporción
de ácidos grasos poliinsaturados decrece (Xu, Beardall, 1997)
RESULTADO 03: 160

140

Determinación de la curva de
crecimiento 120

100

BIONASA (MG/L)
P-1 (2% v/v) P-2 (8% v/v)
80
Volumen inoculo (ml): 100 100
Cel/ml (inicial): 21,95*10^8 21,95*10^8
60
Sanguaza (ml): 58 232
Agua de mar (ml): 2842 2668 40

Cel/ml (cultivo): 7,3*10^7 7,3*10^7


20

0
0 1 2 3 4 5 6 7
TIEMPO (DIA)

P-1 (2% v/v) P-2 (8% v/v)

P-1 (2% v/v) P-2 (8% v/v)


Umax 0,93 dia-1 Umax 1,4 dia-1
TG 0,7 día TG 0,45 día
ANEXO
CURVA DE CALIBRACION DENSIDAD OPTICA (D.O.) Nannchloropsis Oculata 1

peso papel peso filtro + y = 247,74x - 9,036


Dilución Nº Experimento Dilucion peso 50 ml mg.L¯¹ Abs 570 0.9
(filtro) 50 ml de alga R² = 0,9922
de alga
0.8
1:1 1 1 0,358 0,3948 0,0368 0,0368 0,05
0.7
1:2 2 2 0,355 0,3741 0,0188 0,0375 0,22
1:3 3 3 0,3712 0,3839 0,0127 0,0380 0,34 0.6

Abs (570nm)
1:4 4 4 0,368 0,3776 0,0096 0,0383 0,43 0.5
1:5 5 5 0,356 0,3638 0,0078 0,0388 0,52
0.4
1:6 6 6 0,359 0,3655 0,0065 0,0392 0,621
0.3
1:7 7 7 0,349 0,3547 0,0057 0,0397 0,694
1:8 8 8 0,373 0,3780 0,0050 0,0399 0,751 0.2

1:9 9 9 0,362 0,3665 0,0045 0,0403 0,822


0.1
1:10 10 10 0,357 0,3611 0,0041 0,0406 0,9
0
0.0365 0.0370 0.0375 0.0380 0.0385 0.0390 0.0395 0.0400 0.0405 0.0410
Biomasa (mg.L-1)
ANEXO
Umax P-1
3.5
3 y = 0.9311x + 0.269
R² = 0.9457
2.5

Ln(X/Xo)
2
P-1 (2%v/v) P-2 (8% v/v) 1.5
Nº Expermiento abs mg/L U (dias-1) abs mg/L U(dias-1) 1
0 0,0547 4,51 0,00 0,053 4,02 0,00
0.5
1 0,12 20,69 1,52 0,190 38,03 2,25
2 0,217 44,68 2,29 0,355 78,85 2,98 0
3 0,350 77,77 2,85 0,507 116,52 3,37 0 1 2 3 4
4 0,394 88,45 2,98 0,600 139,60 3,55 Tiempo
5 0,446 101,48 3,11 0,620 144,56 3,58
6 0,582 135,21 3,40 0,618 144,06 3,58

Umax P-2
3.5
3 y = 1.4886x + 0.2532
2.5 R² = 0.9202

Ln(X/Xo)
2
1.5
1
0.5
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5
Tiempo
Cronograma de actividades (carta de gam)

MESES
AGO. OCT. DIC. 2017
Actividades ABR. 2017 MAY. 2017 JUN. 2017 JUL. 2017 ENE. 2018 FEB. 2018 MAR. 2018 ABR. 2018
SEP. 2017 NOV. 2017
Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana
1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4

Revisión bibliográfica x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x X x x x x x x x x x x x x x x x x x x

Elaboración del proyecto x x x x x x x x x x x x x x

Preparación de instrumentación x x x x x

Pruebas experimentales x x x x x

Pruebas definitivas x x x x x x

Procesamiento de datos x x x x x x x

Procesamiento de resultados x x x x x x x x

Informe de tesis x x x x x x x x x x x

Presentación del informe final x x x

Sustentación del informe x


Bibliografía
• Caroline R.P.S. Paesm, Gabrielle R. Faria, Natália A.B. Tinoco, Dominique J.F.A. Castro. Growth, nutrient uptake and
chemical composition of Chlorella sp. and Nannochloropsis oculata under nitrogen starvation. Lat. Am. J. Aquat. Res.,
44(2): 275-292, 2016.
• Cobos Ruiz M, Paredes Rodríguez JD, Castro Gómez JC. Inducción de la producción de lípidos totales en microalgas
sometidas a estrés nutritivo. Acta biol. Colomb. 2016;21(1):17-26. doi: http://dx.doi.org/10.15446/abc.v21n1.47439
• Gonzales A, Magallanes J. Efecto del estrés nutritivo (Nitrógeno y Fierro) sobre la producción de lípidos en tres cepas
de microalgas clorófitas. México D.F.: 1er Encuentro de Jóvenes Investigadores-CONACYT; 2012. p- 23-25.
• HU H, GAO K. Response of growth and fatty acid compositions of Nannochloropsis sp. to environmental factors under
elevated CO2 concentration, Biotechnol Lett. 2006;28(13):987-992.
• Silva B., J., & Vásquez V., V., & Merino M., F. (2011). Producción de biomasa de Tetraselmis suecica empleando agua
de mar con sanguaza. Scientia Agropecuaria, 2 (1), 13-23.
• XU F, CAI Z, CONG W, OUYANG F. Growth and fatty acid composition of Nannochhloropsis sp. grown mixotrophically in
fed - batch culture. Biotechnol Lett. 2004;26(17):1319-1322.
• PESCA PERÚ (1994).Informe de análisis de los efluentes. Composición de sanguaza y agua de bombeo. Departamento
de aseguramiento de la calidad. Pesca Perú. U.O 3411.Informe, Lima.50p.
• PESCA PERÚ (1995b).Informe de análisis de los efluentes. Composición de sanguaza y agua de bombeo.
Departamento de Aseguramiento de la Calidad Pesca Peru.U.O.3103.Informe, Lima.50p
• Xu, X. y J. Beardall. 1997. Effect of salinity on fatty acid composition of a green microalga from an Antarctic
hypersaline lake. Phytochemistry, 45. pp. 655–658.

You might also like