MOLECULA

R
Biotecnología y bioingeniería.
 La Biología Molecular es una ciencia cuyo objetivo
fundamental es la comprensión de todos aquellos
procesos celulares, que contribuyen a que la
información genética se transmita eficientemente de
unos seres a otros, y se exprese en los nuevos
individuos.
 El surgimiento y consolidación de la ciencia
experimental constituye, sin lugar a dudas, uno de
los grandes logros de la humanidad al convertirse en
poderosas herramientas para modificar la realidad
natural.
 Objetivos
Objetivo General:
El objetivo general es
fortalecer los
conocimientos sobre las
¨Técnicas básicas de la
Biología Molecular¨ y sus
aplicaciones mediante la
recopilación bibliográfica y
científica.
Objetivos Específicos
Conocer el origen de la biología
molecular, y las Disciplinas
científicas que forman parte de la
misma.
Definir e identificar las Etapas en la
obtención de un organismo
transgénico.
 HISTORIA
LOS PRIMEROS PASOS

 Desde hace muchísimos años, el hombre busca descubrir un orden

para el Universo y ubicarse a sí mismo dentro de ese orden.
 La Biología aparece en Grecia antigua nos da cuenta de ese
esfuerzo por encontrar las respuestas a viejas y nuevas preguntas.
 La historia de la Biología tradicionalmente ha sido dividida en tres
etapas de desarrollo, cada una de estas se caracteriza por una
serie de descubrimientos y propuestas, un desarrollo tecnológico y
una forma de organizar el pensamiento
 Biología antigua Biología moderna Biología molecular
•• se
se inicia
inicia aa mediados
mediados del
del siglo
siglo XVII
XVII y
y se
se extiende
extiende hasta
hasta poco
poco antes
antes del
del año
año 1920.
1920.
•• Uno de
de los
los inventos
inventos más
más importantes
importantes de de esta
esta época,
época, es
es sin
sin lugar
lugar aa dudas
dudas el
el microscopio

• se inicia hacia el año • Se inicia

Uno microscopio
•• Entre los primeros microscopistas destacados podemos citar a los siguientes:
Entre los primeros microscopistas destacados podemos citar a los siguientes:
•• Marcello Malpighi
Marcello Malpighi
•• Jan
Jan Swammerdam
Swammerdam

500 A.C. en Grecia; aproximadamente en

•• Anton van
Anton van Leeuwenhoek
Leeuwenhoek
•• etapa
etapa caracterizada
caracterizada por
por un
un método
método de de trabajo
trabajo experimental
experimental :surgen
:surgen nuevos
nuevos campos
campos de
de la
la biología
biología
como
como lala microbiología,
microbiología, citología,
citología, genética
genética yy evolución
evolución entre
entre otras.
otras.

muchos de los 1920 y se caracteriza

resultados obtenidos por el estudio de la
en esta época se estructura celular y
fundamentaban en la sus funciones, tanto a
observación y en el nivel fisiológico como
pensamiento lógico, a nivel molecular.
el método científico • Otro hecho
como herramienta importante dentro de
para la investigación esta época, es el
aún no se conocía. establecer qué tipo de
• durante la etapa sustancias químicas
surgieron las primeras intervienen en la
ideas sobre el origen estructura de la
de la vida, se empieza célula, también se
a describir la explica cuál es la
anatomía y fisiología función que
humana, así mismo, desempeña cada una
surgen la botánica, la de estas sustancias
 Es la información genética con que
cuentan los seres la cual está
almacenada en los genes y estos a su
vez en los cromosomas.
GENOM Prácticamente todos los genomas están
A formados por ADN
La secuencia de nucleótidos del ADN es
la que determina la información
contenida en los genes. (Valverde Peralta,
2010).
INFORMACIO
N GENETICA Y se emplea para guardar la información
EL GENOMA. genética de una forma de vida orgánica.
Para todos los organismos el material
MATERIA genético es casi exclusivamente (ADN o
DNA).
L
Las células modernas usan el ARN
GENETIC principalmente para construir proteínas
O de las instrucciones del ADN, en la forma
de ARN mensajero, ARN ribosómico y ARN
de transferencia. (Valverde Peralta, 2010)
 El DNA nunca está desnudo. En eucariotas
interacciona con una gran variedad de
proteínas, se espiraliza y condensa para formar
Cromatina y los
Cromosomas la cromatina y los cromosomas.

Los cromosomas constituyen el orden superior

de empaquetamiento del DNA y está formada
por una unidad estructural que es la cromatina
que se visualiza al microscopio electrónico

Lo que hace el ADN capaz de producir copias es

que al igual que el viviente completo, tiene una
estructura simétrica duplicada: es una molécula
de doble cadena en forma de escalera en espiral.
(Valverde Peralta, 2010)
 LOS GENES
8
Gen es la unidad de herencia,
partícula de material genético o
hereditario que determina la
herencia de una característica
determinada, o de un grupo de
ellas. En términos moleculares
puede definirse como la secuencia
lineal de nucleótidos considerada
como unidad de almacenamiento de
información, y físicamente está
formado por un segmento del ADN
del cromosoma localizado en el
núcleo celular y se disponen en
línea a lo largo de cada uno de ellos.
Cada gen ocupa en el cromosoma
una posición, o locus (plural: loci).
Tipos y Composición de los Ácidos Nucleicos
9

Ácido Nucleico

Los ácidos nucleicos son macromoléculas, polímeros formados

por la repetición de monómeros llamados nucleótidos, es decir,
unidos mediante enlaces fosfodiéster. Se forman, así, largas
cadenas o polinucleótidos, lo que hace que algunas de estas
moléculas lleguen a alcanzar tamaños gigantes (de millones de
nucleótidos de largo). La información contenida en los ácidos
nucleicos es transcripta y luego traducida a las proteínas. Son
las proteínas las moléculas que finalmente ejecutarán las
"instrucciones" codificadas en los ácidos nucleicos. A las
unidades químicas que se unen para formar los ácidos
nucleicos se les denominan nucleótidos. (Valverde Peralta,
2010)
10
Tipos de Ácidos Nucleicos

Existen dos tipos de ácidos nucleicos: - ADN (ácido

desoxirribonucleico) - ARN (ácido ribonucleico) En los
eucariotas la estructura del ADN es de doble cadena
helicoide, mientras que la estructura del ARN es
polinucleótido lineal monocatenaria, aunque puede
presentarse en forma extendida, como el ARNm, o en forma
plegada, como el ARNt y el ARNr. La masa y el peso molecular
del ADN es generalmente mayor que la del ARN. El ADN
contiene la información genética de todos los seres vivos.
Ambos ácidos nucleicos, se encuentran simultáneamente en
organismos eucariotas y procariotas (bacterias, etc.), y sólo
uno de ellos en los virus. (Valverde Peralta, 2010)
 Composición de los Ácidos Nucleicos
11
Los ácidos nucleicos polímeros de alto peso molecular
constituidos por unidades elementales denominadas
nucleótidos. Cada nucleótido es una molécula compuesta por
tres unidades: (Valverde Peralta, 2010) a) Molécula de azúcar o
glúcido de tipo pentosa (monosacárido de cinco átomos
carbonos), puede ser:
 b) Base orgánica nitrogenada.- son compuestos
orgánicos cíclicos, que incluyen dos o más átomos de
12
nitrógeno y son la parte fundamental de los ácidos
nucleicos. Biológicamente existen cinco bases
nitrogenadas, que se clasifican en: Las Bases Purínicas,
derivadas de la estructura de las Purinas (con dos anillos):
la Guanina (G) y la Adenina (A). Ambas se encuentran tanto
en el ADN como el ARN.
Las Bases Pirimidínicas, derivadas de la estructura de
las Pirimidinas (con un anillo): la Timina (T), Citosina (C) y
Uracilo (U). La timina sólo se encuentra en la molécula de
ADN, el uracilo sólo en la de ARN y la citosina, en ambos
tipos de macromoléculas.
13 c) Grupos o radical fosfato.- uno o
varios derivados del ácido fosfórico (H3PO4 - ).
En la cadena de ácido nucleico une dos pentosas
a través de una unión fosfodiester.
14 Funcione y Estructura de los Ácidos Nucleicos
- Así como las proteínas están formadas por cadenas largas de
aminoácidos, los ácidos nucleicos están formados por cadenas largas
de nucleótidos. Un nucleótido, sin embargo, es una molécula más
compleja que un aminoácido. El DNA y el RNA desempeñan papeles
biológicos muy diferentes. El DNA es el constituyente primario de los
cromosomas de las células y es el portador del mensaje genético. La
función del RNA es transcribir el mensaje genético presente en el DNA
y traducirlo a proteínas. Los nucleótidos, además de su papel en la
formación de los ácidos nucleicos, tienen una función independiente y
vital para la vida celular. Cuando un nucleótido se modifica por la unión
de dos grupos fosfato, se convierte en un transportador de energía,
necesario para que se produzcan numerosas reacciones químicas
celulares. (Valverde Peralta, 2010)
 Tipos de ADN
15
- ADN de copia única (el 57 % del total) formados por segmentos de
aproximadamente 1000 pares de nucleótidos longitud, una pequeña
parte de este ADN contiene los genes. - ADN repetitivo (20 %) son
unidades de aproximadamente 300 pares de nucleótidos que se repiten
en el genoma unas 105 veces (Unidades de repetición). - ADN satélite
(altamente repetitivo: 28 %) son unidades cortas de pares de nucleótidos
que se repiten en el genómico
Según su estructura se distinguen los siguientes tipos de ADN:

- Monocatenarios o de una cadena. - Bicatenarios, con dos hebras o

cadenas (algunos virus, las bacterias y los eucariotas).

Propiedades del DNA

- Insolubles en soluciones diluidas de NaCl - Soluble en soluciones

concentradas de NaCl
 Características del ADN

16 - Es una doble hélice enrollada helicoidalmente “a derechas” (sentido

dextrorso). Por lo común su estructura tridimensional posee giro hacia la
derecha (ß-ADN, dextrogiro) que es la forma más estable y
ocasionalmente posee giro ha la izquierda (z-ADN, levógiro) (Valverde
Peralta, 2010)
 Estructura del ADN

17 - El ADN es una molécula por lo general bicatenaria, formada por dos

cadenas dispuestas de forma antiparalela y con las bases nitrogenadas
enfrentadas. El ADN existe en muchas conformaciones. Sin embargo, en
organismos vivos sólo se han observado las conformaciones ADN-A, ADN-
B y ADN-Z. La conformación que adopta el ADN depende de su secuencia,
la cantidad y dirección de superenrollamiento que presenta, la presencia
de modificaciones químicas en las bases y las condiciones de la solución,
tales como la concentración de iones de metales y poliaminas. (Valverde
Peralta, 2010)del ADN
Replicación

- La replicación del ADN es el proceso por el cual se obtienen copias o

réplicas idénticas de una molécula de ADN El mecanismo consiste
esencialmente en la separación de las dos hebras de la doble hélice, las
cuales sirven de molde para la posterior síntesis de cadenas
complementarias a cada una de ellas. El resultado final son dos moléculas
idénticas a la original.
 La replicación del DNA en la naturaleza donde obtienen
18
dos moléculas hijas exactamente iguales consiste en:

1. Separación de las dos cadenas que forman la doble hélice, de lo

cual se encargan enzimas y proteínas que se encuentran en la
célula eucariótica. biotecnología 17

2. Unión de los cebadores ('primers' o iniciadores) de DNA en una de

las hebras separadas.

3. Unión de la polimerasa a los lugares donde se encuentra el "primer"

para comenzar a copiar de manera progresiva la hebra de DNA, ya que
la polimerasa necesita un cebador que le indique dónde empezar, por
ser incapaz de copiar DNA monocatenario. El sentido de la síntesis es
siempre 5'- 3'.

4. Constitución de las nuevas copias siempre formadas por una hebra

madre y otra hija, por lo al proceso se le denomina replicación
semiconservativa del DNA
 Funciones biológicas del ADN
19
- El ADN es el portador de la información genética y a través
de ella puede controlar, en forma indirecta, todas las
funciones celulares. Debemos recordar aquí que las enzimas
son proteínas que catalizan todas las funciones biológicas y se
sintetizan en las células de acuerdo a la información genética
(Valverde Peralta, 2010)

Ácido Ribonucleico o ARN

- Esta macromolécula representa alrededor del 7% del

peso de una célula, constituida por largas cadenas de
ribonucleotidos, unidos por enlaces fosfodiester.
TIPOS DE ARN

ARN Mensajero (ARNM)

TIPOS DE ARN

ARN Ribosomal (ARNR)

TIPOS DE ARN

ARN de Transferencia (ARNT)

TIPOS DE ARN

ARN
Pequeño Nuclear
PROPIEDADES DEL
ARN
-Soluble en soluciones diluidas de NaCl

-Insoluble en alcohol

-Puede ser disociado de las proteínas por

tratamiento con un detergente o fenol.
 FUNCIÓN DEL ARN

Un gen está compuesto, como hemos visto, por una

secuencia lineal de nucleótidos en el ADN, dicha
secuencia determina el orden de los aminoácidos en
las proteínas. Sin embargo, el ADN no proporciona
directamente de inmediato la información para el
ordenamiento de los aminoácidos y su polimerización,
sino que lo hace a través de otras moléculas, los ARN.
(Valverde Peralta, 2010).
 Dogma
Central de
la Biología
Molecular
Universidad Nacional de Tr u j i l l o
 La
Durante
Transcripción
la transcripción la enzima ARN

polimerasa, copia la secuencia de una hebra del ADN

y fabrica una molécula de ARN complementaria al

fragmento de ADN transcripto.

Universidad Nacional de Tr u j i l l o
La Traducción
La factoría celular responsable de la

síntesis de proteínas es el ribosoma. La

molécula especifica que va a trasladar los

aminoácidos (componentes elementales

de las proteínas) siguiendo las pautas

dictadas por el RNAm es el RNAt. Cada

RNAt tiene un anticodón especifico

(formado por tres bases denominados

codones). La molécula del ARN mensajero

se traslada a los ribosomas donde ocurre

la etapa de traducción. A medida que el

ribosoma lee la secuencia de codones va

Universidad N a c iformando
o n a l d eunaTrproteína,
u j i l l o a partir de la
ENZIMAS
Los enzimas son estructuras de carácter proteico,
catalizadores biológicos muy potentes y
eficaces, tienen una extraordinaria capacidad,
tanto así, que permiten reacciones que sin ellas se
tendrían que realizar en temperaturas, pH o
presiones incompatibles con la vida. Existe un
grupo particular de enzimas que tiene funciones a
nivel de genético (PCR, hibridaciones,
secuenciación de ADN, clonación, etc.)
32
EC1 Oxido Reductasas EC2 Transferasas
EC3 Hidrolasas EC4 Isomerasas
EC5 Liasas EC6 Sintetasas

Acompañantes no
proteicos:
- Cofactores
- Coenzimas
- Grupos prosteticos
OBTENCIÓN Y
PREPARACIÓN
DE UN
ORGANISMO
TRANSGÉNICO
35
 Uno de los objetivos principales de la
biotecnología moderna es lograr que una célula
realice una tarea específica y útil de manera
predecible y controlable.
Existen técnicas permiten estudiar biomoléculas,
en particular ADN, ARN y proteínas, y se las
denomina técnicas de biología molecular
 Etapas en la obtención de un organismo
transgénico
- Corroborar que existe un gen que codifica para la
característica de interés.
- Clonado del gen.
- Modificar el gen.
- Transferir el gen al organismo receptor
CLONADO DEL GEN

Principios De Clonación Molecular:

La denominación "ADN recombinante" se refiere a
combinaciones muevas de ADN creadas entre
secuencias o fragmentos de esta molécula y moléculas
de ADN bacteriano (o de otra clase) capaces de
duplicarse indefinidamente en el laboratorio.
En este proceso, primero se obtiene un fragmento del
ADN de interés denominado inserto, el cual se une a
otra molécula de ADN (generalmente de mayor
tamaño) llamado vector.
 Pasos para una clonación molecular.

 Una fuente adecuada de ADN.

 Vectores de clonación (ADN
recombinante).
 Plásmidos, Bacteriófagos, Cósmidos,
Cromosomas artificiales de levaduras,
Enzima.
TÉCNICA DIRECTA DE LA AMPLIACIÓN
DEL ADN MEDIANTE LA REACCIÓN EN
CADENA DE LA POLIMERASA.

- La Reacción en Cadena de la
Polimerasa (PCR) es una técnica de
laboratorio que permite la copia in vitro
de secuencias específicas de DNA y
que ha revolucionado el campo de la
Biología Molecular. Conceptualmente,
la PCR es una técnica sencilla
consiste en la separación por calor
de las dos cadenas del DNA que se
quiere amplificar, y su copia
simultánea a partir de un punto,
determinado por un fragmento de
DNA artificial llamado cebador,
mediante la acción de una enzima
denominada DNA polimerasa.
Fundamento molecular de la
PCR.
Explicación de la imagen:
La técnica de PCR permite obtener, a
partir de una sola molécula de ADN,
millones de copias de un fragmento de
ADN particular. La base de esta técnica
consiste en que la enzima polimerasa de
ADN cumpla su función: sintetizar ADN a
partir de un pequeño fragmento llamado
cebador, y de los nucleótidos.
Aplicaciones:

 La técnica de la PCR tiene multitud de

aplicaciones: ya en ciencia básica, como
herramienta de detección y/o generación
de acervos de fragmentos de ADN de
interés; ya en ciencia aplicada, como
elemento resolutivo en sí mismo, por
ejemplo en diagnóstico clínico.
Medicina:

En medicina, la PCR se emplea

fundamentalmente como herramienta de
diagnosis:
Permite el genotipar la especie o especies que
provocan un determinado cuadro infeccioso:
para ello, se amplifica una zona del genoma
bacteriano cuyo producto de PCR posea unas
características de tamaño o temperatura de
fusión que permitan identificarlo de forma
inequívoca.