INTRODUCCION

 El concepto de dilución puede definirse simplemente

como la disminución de la concentración de una
sustancia en una solución.
 La preparación de diluciones es una tarea cotidiana en
el laboratorio y es fundamental en una gran variedad
de técnicas, por lo que la comprensión de sus aspectos
básicos y prácticos de suma importancia.
Utilidad
 La Dilución de una muestra en inmunología es una
manera de conocer la cantidad aproximada de
antígeno o anticuerpo presente en dicha muestra.
 Las diluciones se realizan con una parte de suero del
paciente y otra parte generalmente mayor de solución
fisiológica ( diluyente)

 Muestra problema: Suero del paciente.

 Suero: parte liquida de la sangre resultante de la

coagulación. Y su diferencia con el plasma sanguíneo
es la presencia de factores de la coagulación en este
último.
Diferencia entre plasma y suero
• En el plasma están presentes todos los factores de la coagulación
• Se consigue utilizando un anticoagulante
• Casi todos los anticoagulantes impiden la coagulación quelando
el calcio que es uno de los componentes indispensables para
que ocurra la coagulación.
 Suero

Coagulo
• En el suero, no están los factores de la coagulación
• Se obtiene sin aditivos(anticoagulantes).
 El nivel de anticuerpos en el suero es un reflejo de una
exposición pasada a un antígeno o a algo que el cuerpo
no reconoce como propio. El cuerpo utiliza los
anticuerpos para atacar y eliminar las sustancias
extrañas.
 Una dilución es directa cuando se realiza en un solo
paso, desde la solución original hasta la dilución final.
Note que al pasar 1 ml de la solución original al
tubo que contiene 9 ml del solvente, obtenemos
un volumen final (VF) de 10 ml, con lo que
habremos disminuído la concentración 10 veces.
Es decir, el factor de dilución (FD) es 10.
El FD es el número de veces que disminuye la
concentración de la sustancia original en un paso
de dilución.
 Cuando se prepara un conjunto de
diluciones en secuencia, cada una a partir de la
anterior, con un FD constante, las llamamos
diluciones seriadas:
 En cada paso de la dilución en serie, estamos
diluyendo 10 veces la solución del tubo precedente, por
lo que el factor de dilución es 10.
 Conociendo el factor de dilución, podemos calcular
cuál es la dilución de la sustancia original que hay en
cada tubo (concentración relativa).
 En el tubo#1 la concentración es 1/10 con respecto a la
muestra original. En el tubo #2 la concentración es 1/10
con respecto al tubo anterior, y es (1/10) (1/10) = 1/100
con respecto a la muestra original, y así sucesivamente.
 En serología se utiliza ampliamente el proceso de
dilución seriada para la realización de diversas pruebas
de rutina clínica y de investigación. Pero antes de
describir los detalles prácticos del montaje de las
diluciones seriadas, es necesario señalar una de sus
características importantes, que las diferencia de las
diluciones directas:
 Las diluciones directas permiten obtener resultados
cuantitativos.
Las diluciones seriadas solo permiten obtener resultados
semi-cuantitativos.
¿A qué se debe esta diferencia? Toda medida conlleva un
cierto grado de error, o incertidumbre.
A mayor número de pasos en un proceso, mayor es la
incertidumbre que se acumula.
Pruebas serológicas de titulación
 Muchas pruebas serológicas consisten en estimar, de
modo semicuantitativo, la cantidad relativa de
anticuerpos séricos contra un determinado antígeno,
en un individuo.
 Para esto se realiza una serie de diluciones de su suero
(u otros tipos de muestras) con un solvente apropiado
para la prueba, y luego se enfrenta cada dilución contra
el antígeno de interés, mediante algún tipo de reacción
inmunológica.
 A mayor concentración de anticuerpos en la muestra,
mayor será la dilución capaz de dar una reacción
positiva a la prueba.
 En este caso, observamos que el suero 2 posee mayor
cantidad de anticuerpos contra el antígeno que se
probó, en comparación con el suero 1, ya que aún
diluyéndolo 1:128 fue capaz de dar una reacción
positiva, mientras que el suero 1 alcanzó a dar positivo
hasta una dilución máxima de 1:16.
 Los resultados se pueden expresar con el término de
"título" de una muestra, que se define como el inverso de
la máxima dilución que da una reacción francamente
positiva en una prueba determinada.
 En el Ej. 4, diríamos que el título del suero 1 es de 16,
mientras que el título del suero 2 es de 128. También puede
expresarse el título en la forma 1/16, ó 1:16, ó "16 diluciones",
etc.
 Todas estas maneras de expresión tienen un mismo
significado. Note que el suero 3 tendría un título de 8 (o
1:8) porque es la mayor dilución francamente positiva (la
reacción en 1:16 fue dudosa).
Cómo preparar diluciones seriadas
 La primera decisión al diseñar una dilución seriada es
cuál va a ser el volumen final
(VF) que queremos que quede en los tubos.
 Para algunas pruebas es conveniente que el VF sea
exactamente el volumen requerido para la técnica a
realizar.
 Una vez determinado el VF, se adiciona a cada tubo de
la serie un volumen de solvente igual al VF deseado.
 El volumen de transferencia (VT) es el volumen de
solución original (muestra) que agregamos al primer
tubo, y que seguimos transvasando a cada tubo hasta
completar la serie.
 Ejemplo: ¿Cómo preparar una serie de diluciones (5
tubos) para una prueba de aglutinación que utiliza 0,4
ml de muestra y 0,1 ml de antígeno, con FD=3 y
utilizando NaCl 0,15 M como solvente?
Ejemplos
 Preparar una dilución 1:2 de una muestra problema con
un volumen final de 2mL.

 Preparar 2,5 mL de una dilución 1:10 y a partir de esta

preparar 3,0 mL de una dilución 1:300

 Preparar una serie de diluciones de 4 tubos cuyo factor

de dilución sea de 2 de tal modo que el volumen final
de cada tubo sea 0,5 mL.