UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

UNIVERSIDAD DEL PERÚ, DECANA DE AMÉRICA

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
ESCUELA PROFESIONAL DE TOXICOLOGÍA

INVESTIGACIÓN FORENSE DE FORMALDEHIDO EN PRODUCTOS

ILÍCITOS PARA TRATAMIENTO DE CABELLO MEDIANTE DAD-HPLC: UN
CASO DE ESTUDIO

PÉREZ SALDARRIAGA, RUT INÉS

 Publicado en Julio 2016 por la Revista de Ciencias Forenses

 Responsables: Erica Oiye, Maria Fernanda Ribeiro, Leonardo

Okumura, Adelir Saczk, Pietro Ciancaglini, Marcelo Oliveira

 Financiado por: Consejo Nacional de Desenvolvimiento científico

y tecnológico; Coordinación de perfeccionamiento de nivel
superior y la Fundación de Apoyo a la Investigación del Estado
de Sao Paulo.
Resumen

El uso ilegal de formalin (nombre comercial de

formaldehido) en productos cosméticos daña la salud
de los individuos expuestos a esta sustancia.
En los últimos años, la disponibilidad comercial de estos
productos, especialmente los que contienen una
cantidad desconocida de formaldehido, ha aumentado
en Brasil.

Este trabajo analiza algunos de los productos para el tratamiento de cabello disponibles en el
mercado brasilero y verifica su seguridad.

 Metodología analítica usada:

- Incluye la derivatización de la muestra con 2,4 – dinitrofenilhidrazina, seguido por HPLC con
detección UV (UV-Vis) a λ = 365 nm. El límite de cuantificación es de 2.5x10-3% w/w, y el
porcentaje de recuperación fue de 93%.
- Algunas de las muestras contenían altos niveles de formaldehido, lo cual es ilegal, en un rango
de 9-19% w/w y otros presentaban cantidades considerables del analito. Basados en los
resultados se puede indicar que este trabajo indica la eficiencia y la practicidad de esta técnica
analítica para propósitos forenses.
… Química forense
 Aplica la ciencia para asegurar el cumplimiento de la
ley.
 Por tanto, la cuantificación de formaldehído en
productos cosméticos, está inmerso en el campo forense,
pues su mal uso genera consecuencias legales para
aquellos que producen estos cosméticos y por las
víctimas que presenten daños en su salud.

Este estudio fue desarrollado por la sospecha de

intoxicación en algunas personas por la exposición a altas
concentraciones de esta sustancia.
Palabras clave

 Ciencia forense: Es la aplicación de prácticas

científicas dentro del proceso legal. Por tanto, se
trata de la comprobación de la evidencia por medio
de pruebas de laboratorio.

 Formaldehido: es un gas inflamable incoloro de olor

penetrante característico. Se le conoce con otros
nombres (metanal, óxido de metileno, metaldehído y
oxometano). Se usa en producción de papel, madera
contraparchada, pero también como preservativo en
ciertos alimentos y productos del hogar, ya sean
antisépticos, medicamentos e incluso cosméticos.
Palabras clave

 Fortalecimiento del
cabello.

 High Performance Liquid Cromatography (HPLC):

Es un tipo de cromatografía en columna que se usa
para separar, identificar y cuantificar cada
componente en una mezcla.
Palabras clave

 Derivatización: es el proceso mediante el cual se

modifica químicamente un compuesto para producir
un derivado con nuevas propiedades que faciliten y
permitan su análisis, se busca mejorar su
volatilidad, estabilidad térmica y detección del
analito.

 Derivatización con 2,4 dinitrofenilhidrazina: se

obtiene hidrazona y esta se lee en el
espectrofotómetro.
DAD-HPLC: HPLC con detector de diodos
Formalin
 Formaldehido en solución acuosa
 La concentración comercial usualmente es de 37% w/w.
 Se usa como antibacterial y preservativo en algunas
comidas y productos como antisépticos, medicinas y
cosméticos.

Hay formulaciones que no usan

directamente formaldehido, sin embargo
contienen sustancias que podrían
generarlo. Por ejemplo:
POLIETILENGLICOL, presente en algunos
cosméticos.
Formaldehido

 Es considerado dañino para la salud del ser humano.

 La IARC ha observado una relación positiva entre la
exposición al formaldehido y cáncer sinonasal.
 La IARC ha evaluado como el formaldehido se
relaciona al cáncer nasofaríngeo y a la leucemia, por
tanto esta clasificado en el Grupo 1 (carcinógeno
para los seres humanos).
Formaldehído

 De 0.4 – 3ug/mL de formaldehído en aire irrita la

naríz, garganta y los ojos aumentando las lágrimas.
 La Agencia de sustancias tóxicas y enfermedades
registradas (ATSDR) afirma que el formaldehido es
peligroso para la vida y la salud a partir de 20
ppm.
Formaldehído
 La toxicidad del formaldehido esta regulado por
ANVISA (Agencia Nacional de Vigilancia Sanitaria), la
cual permite el uso del formaldehido hasta un máximo
de 0.2% de concentración, como preservante.
Sin embargo, su
efecto fortalecedor
en el cabello ha
logrado que se use
ilegalmente en
cremas, shampoos,
lociones y pomadas.
 En Brasil, los productos para el cabello se encuentran
entre los cosméticos más vendidos.
 Ya que el costo de alisar el cabello es bastante alto, el
cliente busca un costo más bajo que substituya el otro
tratamiento.
 A pesar de las acciones reguladoras que se han
tomado por las agencias de salud oficiales de Brasil, el
uso de cremas hechas en casa y sin registro, con
contenido de formol, se ha convertido en una práctica
común.
 Además de esto, estos productos no presentan un
etiquetado que indique la composición del producto.
 Muchos de los cosméticos brasileros para el
tratamiento de cabello traen consigo información
falsa, registrando en su etiqueta: “Sin Fomaldehído”
cuando no es así. Inclusive muchos de estos
presentan concentraciones inaceptables de esta
sustancia.
 La cuantificación del formaldehído en cosméticos y
su riesgo de evaluación se vienen estudiando
alrededor del mundo, y es posible ver ese hecho
relacionado con su concentración.
 Es entonces que se resaltan mucho las metodologías
distintas para esta clase de análisis, y pueden
incluir técnicas alternativas como espectroscopia 1H
NMR y otros procedimientos para la preparación
de la muestra.
 Es posible determinar formaldehido por diversas
metodologías, incluyendo la reacción entre 2,4
dinitrofenilhidrazina (DNPH) y el grupo carbonilo
presente en la estructura de aldehídos y cetonas.
 La reacción y el complejo como su producto final son
ilustrados en la fig. 1.
 La reacción tardía permite el análisis de este grupo
en diversas matrices, como polímeros, combustibles, y
cosméticos seguidos por técnicas cromatográficas.
 High performance liquid cromatography (HPLC) y la
cromatografía gaseosa han encontrado una amplia
aplicación en la química analítica, puesto que son
técnicas muy buenas y precisas y permite la
cuantificación inclusive con cantidades mínimas del
analito.
 Su versatilidad combinada con su sensitividad es
aplicable para propósitos forenses, inclusive en el caso
de que hayan diversas matrices.
 En los análisis de rutina forense, las técnicas más usadas
son las de cromatografía instrumental y las técnicas
espectrométricas.
 Más aun, la literatura reporta que la derivatización con
DNPH para análisis en cosméticos con HPLC es una
metodología específica, sensitiva y selectiva.
 Okumura et al. Reportó una metodología simple para
derivatizar acetaldehídos con DNPH en combustibles.
En este estudio se usó este procedimiento para analizar
muestras comerciales de cosméticos para cabello y
para determinar la concentración de formaldehído en
su composición, así como las condiciones experimentales
descritas por Wu et al.
 Más específicamente, el propósito de este trabajo
fue detectar la presencia de fomarlin en diversas
muestras de lociones comerciales para laceado de
cabello y la cuantificación de esta sustancia usando
la derivatización con DNPH y HPLC.
 Se buscó demostrar que esta metodología es
potencialmente aplicable a industrias y laboratorios
policiales, debido a sus resaltantes parámetros
exactos y sensibles.
METODOLOGÍA

 Todos los reactivos, como el metanol y H2SO4, fueron

valorados analíticamente y comprados de la Compañía
Química Aldrich (Milwaukee, WI). El metanol usado para la
fase móvil fue valorado mediante HPLC y fue obtenido de
Mallinckrodt (Xalostoc, Mexico). El agua fue
desmineralizado en un sistema para agua Milli-Q (Millipore,
CA). 2,4 DNPH (Merck- Darmstadt, Alemania) y purificada
por tres recristalizaciones exitosas con metanol.

 El estándar de formaldehído fue provisto por la Compañía

Sigma-Aldrich (St. Louis, MO) valorado mediante ACS
(American Chemical Society).
Parámetros cromatográficos

 Para todas las muestras

analizadas, el aldehido fue
derivatizado con DNPH, seguido
por análisis con HPLC en Shimadzu
LC 10ADVP (Kyoto, Japón)
acoplado con una bomba binaria
de detección UV-Vis (SPD-10AVP)
a una λ = 365 nm.

 Se usó una columna de 10um ODS (octadecyl silica) 4,6 x 250mm.

 La fase móvil fue de 80:20 metanol/agua, a flujo de 1.0mL/min.
 Para estas condiciones, se estableció un volúmen de inyección de
20uL y la corrida cromatográfica fue realizada bajo condiciones
isocráticas.
Solución DNPH, soluciones estándar, y
muestra para derivatización.

 La solución de DNPH (0,4%) fue obtenida por

disolución (0.2 g; ca.1.0 mmol) en 50mL de metanol.
 Las soluciones estándares fueron preparadas por la
disolución de cantidades exactas de formaldehído-
DNPH (qp), de acuerdo al procedimiento reportado
en la literatura, donde la matriz de interés era el
combustible.
 Algunas alícuotas de esta solución fueron diluidas
con metanol, y la curva analítica fue preparada
con un rango de concentraciones de 2.1 a 184.6
ug/mL.
 El compuesto de formaldehído-DNPH fue
sintetizado por medio de la reacción bastante
conocida entre restos carbonilo y DNPH en medio
ácido. Esta reacción pronto a el grupo carbonilo.
Para este fin, se preparó 50mL de solución DNPH
0.4% y 20mL de H2SO4 0.05mol/L.
 Luego, se añadió la solución de 40mg de la
muestra disuelto en 30 mL de metanol. La solución
resultante fue almacenada en un ambiente
temperado por 30 min. Las muestras derivadas
fueron filtradas por un filtro de Milliporos de
0.45um e inyectadas al sistema HPLC.
Análisis de muestras de lociones
fortificadoras de cabello

 Se analizaron 3 diferentes productos

para fortalecer el cabello de la misma
marca pero de distintas fechas de
fabricación para determinar la
cantidad de formaldehido en su
composición. Estos productos fueron
 Todas las muestras eran expendidas en sospechosos de contener
recipientes de plástico blanco como mayor cantidad de
lociones blancas. formaldehido que aquellos
 Los productos se encontraban con fecha legalmente permitidas, ya que
vigente de uso. algunos profesionales que han
trabajado con estas lociones
 Sus etiquetas no mostraban en Ribeirao Preto – SP han
información alguna sobre su presentado signos de
composición química o el profesional toxicidad.
responsable de su producción.
 Fueron analizadas otras dos muestras comerciales
de diferente marca: loción selladora (SL) y loción
para cabello rizado (LH).
 Ambos indicaban “Libre de formaldehído” en sus
etiquetas y son ampliamente encontradas en los
supermercados brasileros.
 Se agregó un exceso de DNPH en todas las
muestras para poder reconocer el formaldehido.

 Con esto, inclusive los productos en los que no se

sabía si había o no este compuesto, podrían
reaccionar y producir el complejo final para la
detección cromatográfica.
Resultados y discusión

 Optimización de condiciones instrumentales

 La verificación de la mejor señal analítica en el rango
de absorbancias de 340, 353, 367, 373 nm y 397 nm
permitió fijar la longitud de detección en 365nm.
 La fase móvil optimizada, la flujo y el volumen de
inyección fueron de 80:20 metanol/agua, 1.0 mL/min y
20uL respectivamente.
Parámetros analíticos para cuantificación

 El área bajo el pico contra la concentración del analito

forman el área bajo la curva de formaldehído – DNPH,
descrito bajo la ecuación y=1.01x105 x=9.09x104, donde
“y” representa la lectura cromatográfica y “x” la
concentración formaldehído-DNPH en ug/mL.
 El coeficiente de correlación lineal fue de 0.993 para el
rango de 2.1 a 184.6 ug/mL de formaldehído-DNPH.

Este rango de trabajo mostró que podría ser fácil

determinar el formaldehido en un intervalo amplio de
concentraciones con buena sensibilidad y linealidad.
Parámetros analíticos para cuantificación

 El porcentaje de recuperación para este ensayo

fue de 93%, calculado a partir del análisis de
una solución estandar de formaldehido-DNPH
de concentración conocida.
Porcentaje de recuperación
Corresponde a la diferencia (en porcentaje) entre la
concentración medida de un analito en una muestra
fortificada (que quiere decir que se le ha agregado un
estandar) y la concentración medida en la misma muestra
sin fortificar, entre la concentración de sustancia
agregada.
Parámetros analíticos para cuantificación

 Considerando el Límite de detección (nivel más bajo

en que el analito da una respuesta medible) y el
límite de cuantificación (concentración mínima en la
que el analito provee una respuesta precisa para
cuantificación),
 las pruebas estadísticas indican:
 Límite de Detección = 0.003 ug/mL
 Límite de cuantificación = 0.01 ug/mL
Por lo tanto es posible usar este método para determinar todos los
derivados de formaldehído-DNPH a niveles bajos.
De hecho, el siguiente paso de este trabajo empleó este método para
determinar formaldehído en muestras de lociones fortificadoras de cabello.
Análisis de muestras

 Usando las condiciones experimentales optimizadas

previamente, se trataron 3 muestras de loción
fortificadora para cabello con DNPH, descritos ya
en la sección experimental, y luego se analizaron
alicuotas de 20uL de las muestras resultantes por
HPLC.
 Esta señal de DNPH libre garantiza la ocurrencia
de la reacción de formaldehído en las muestras.
 El formaldehído estuvo presenten en todas las
muestras comerciales; el método de la curva
analítica proveyó el contenido de formaldehído-
DNPH en todas las muestras.
 Afortunadamente, las muestras de loción selladora (SL)
y loción rizadora (LH) mostraron concentraciones
bastante bajas de formaldehído, indicando que es un
producto adecuado para el uso.
 Ambas muestras son encontradas en las supermercados
brasileros y son usadas con frecuencia.
 La metodología está disponible para usarla en
cuantificación de valores bastante pequeños del
complejo formaldehído-DNPH.
 Por otro lado, algunas de las muestras de cosméticos contenían entre
9-19% de formaldehído.
 Este valor reveló que el proceso de producción de estos productos
no era adecuado y el control de calidad era deficiente.
 Los resultados refuerzan la importancia de la vigilancia a los
productos cosméticos, principalmente aquellos de origen
desconocido.
 Muchas personas estuvieron expuestas a altos niveles de
formaldehído, con todos sus daños a la salud.
 Por lo tanto, es importante el análisis químico ya que resuelve un
caso legal y es esencial para el contexto jurídico.
 El método analítico es fácil; la preparación de la muestra es
simple y no requiere de muchos pasos, mientras que la
corrida cromatográfica dura menos de 10 minutos.
 El producto obtenido como el intermediario DNPH es
colorido, lo que indica una reacción positiva.
 La metodología empleada genera resultados relevantes
para la determinación de formaldehído, un compuesto de
bajo peso molecular y volátil.
 En el contexto forense, esto es un descubrimiento valioso –
este análisis cubre un amplio rango analítico y da muy
buenos resultados en un corto periodo de tiempo.
Conclusiones

 El método propuesto en este trabajo es potencialmente aplicable en

análisis forense de rutina, tanto para confirmar como para
cuantificar formaldehído en productos sospechosos.
 Es un método simple, de bajo costo y preciso por medio del uso de
la derivatización del formaldehído con DNPH.
 Se puede usar en un amplio rango de trabajo.
 La preparación de la muestra es simple y rápido.
 La aplicación de la metodología desarrollada para este análisis de
productos comerciales, reveló que estos presentan una alta cantidad
de formaldehído en su composición, lo cual puede conllevar a
peligros para la salud del consumidor así como complicaciones
legales.
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