Rapid Identification of

Carbapenemase Types in
Enterobacteriaceae dan Pseudomonas
spp. By Using a Biochemichal Test

ANGGOTA KELOMPOK :
1. GALUH RATNA S K100150042
2. WARIH RUMANTI K100150043
3. M. AL AYUBI K100150045
 Resistensi multidrug sekarang muncul di seluruh
dunia dan sudah pada tingkat yang
mengkhawatirkan di antara berbagai jenis
spesies bakteri, yang disebabkan oleh dua
hal,yaitu masyarakat dan infeksi nosokomial.
 Terapi carbapenems, diperlukan untuk mengobati
infeksi nosokomial dan meningkatkan
ketahanannya. Saat ini ß-laktam sudah jarang
digunakan dan hampir tidak ada obat yang efektif
untuk menangani infeksi yang disebabkan oleh
bakteri Gram-negatif .
 Maka dari itu, deteksi produsen carbapenemase
di laboratorium klinik sekarang sangat penting
untuk penentuan skema terapi yang tepat dan
pelaksanaan langkah-langkah pengendalian
infeksi. Baru-baru ini,uji Carba NP telah
dikembangkan untuk identifikasi awal
carbapenemases di Enterobacteriaceae. Teknik
ini, berdasarkan pada deteksi hidrolisis cincin
beta -lactam dari carbapenem, imipenem yang
cepat, sensitif, dan spesifik.
 Banyak varietas carbapenemase pada Enterobacteriaceae
dan Pseudomonas spp. yang dikelompokkan ke dalam tiga
kelas menurut identitas asam aminonya,yaitu :
1. Ambler kelas A (Kebanyakan KPC)
2. Ambler kelas B (Metallo-ß-laktamase [MBLs] dari
VIM,IMP, dan jenis NDM)
3. Ambler kelas D (kebanyakan Oxa-48).

 Peneliti telah mengembangkan uji Carba NP

Versi II untuk mempercepat identifikasi jenis
carbapenemase yg dihasilkan di Enterobacteriaceae dan P.
aeruginosa.
 Cara kerja

• Diuji langsung strain yang diambil dari

Mueller-Hinton agar

• Disuspensi kembali dengan 200 μl bufer tris-HCL

• Diinkubasikan pada suhu ruang selama 30

menit

• Disentrifugasi hasil suspensi bakteri 10.000x

pada suhu ruang selama 5 menit
 • 1.) larutan fenol merah yang
mengandung 0,1mM ZnSO4

• 2.) larutan fenol merah yang

mengandung 00,1 mM ZnSO4 dan
3mg/ml imipenem monohydrat
Dicampur
30 μl
• 3.)larutan fenol merah yang mengandung
supernatan 00,1 mM ZnSO4 dan 3mg/ml imipenem
dengan monohydrat dan 4 mg/ml sodium
tazobactam

• 4.)larutan fenol merah yang mengandung

00,1 mM ZnSO4 dan 3mg/ml imipenem
monohydrat dan 0,003 M EDTA
 • Larutan fenol merah digunakan untuk persiapan dengan diambil
2ml dari fenol merah dan ditambahkan 16.6 mL air suling.

• pH 7,8Ditambahkan NaOH 1 N untuk mencapai

• Di campurkan larutan dan suspensi enzimatik yang akan diuji.

• Diinkubasi pada suhu 37⁰ C selama maksimal 2 jam

.
 Hasil dan Pembahasan
• jikawarna sumur yang mengandung imipenem ditambah ZnSO4 dan imipenem
ditambah EDTA berubah dari merah kekuning-oranye tapi sumur yang mengandung
imipenem ditambah ZnSO4 ditambah Tazobactam tetap merah, strain menghasilkan
kelas Ambler A carbapenemase.

• jikawarna sumur yang mengandung imipenem ditambah ZnSO4 dan imipenem

ditambah ZnSO4 ditambah Tazobactam berpaling darimerah ke kuning-oranye tetapi
imipenem juga mengandung ditambah EDTA tetap merah, ketegangan adalah produser
MBL.

• Jika
warna sumur yang mengandung imipenem ditambah ZnSO4, imipenem ditambah
ZnSO4 ditambah Tazobactam, dan imipenem ditambah EDTA berbalikdari merah ke
kuning-oranye, ketegangan yang dihasilkan carbapenemase milik tidak Ambler kelas A
atau kelas B yang kemungkinan besar kelas D carbapenemase.
• jika warna semua sumur tetap merah,
ketegangan itu bukan produsen carbapenemase.
• jika semua warna berubah dari merah ke kuning-
oranye, tes dianggap tidak ditafsirkan.
• Warna sumuran yang mengandung imipenem dan
ZnSO4 berubah warna dari merah ke oranye atau
kuning, untuk semua strain yang diuji
memproduksi carbapenemases.
 Kesimpulan

 Tes ini menggabungkan sensitivitas yang sangat baik (100%),

spesifisitas (100%), efektivitas biaya, dan kecepatan dengan
diskriminasi sifat Tazobactam dan EDTA sebagai inhibitor kelas Ambler
A dan kelas B ß-laktamase, masing-masing. Dengan demikian, tes ini
bisa dilakukan untuk deteksi dini menggunakan isolat bakteri
langsung dari antibiogram atau dari skrining media, dengan waktu
minimal 24 jam dibandingkan dengan fenotipik lainnya metode. Salah
satu kelemahan dari teknik ini mungkin kesulitan untuk
mengidentifikasi jenis carbapenemase ketika dua atau lebih banyak
jenis carbapenemase diproduksi, yang merupakan peristiwa langka.
Teknik ini lebih murah dan lebih cepat daripada teknik molekuler,
yang berguna terutama untuk tujuan epidemiologi dan penelitian.