Introducción

Las pruebas bioquímicas son una serie de análisis clínicos que

sirven como apoyo a la hora de identificar bacterias.

Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en

determinar la actividad de una via metabólica a partir de un
sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la
bacteria al crecer incorpora o no.
• De acuerdo a los productos de su actividad química, las bacterias se pueden
clasificar en:
• 1. Zimógenas

• 2. Aerógenas

• 3. Anaerógenas

• 4. Cromógenas

• 5. Fotógenas
 Objetivo
• Conocer distintas pruebas bioquimicas
• Poner de manifiesto algunas bacterias que
utilizan carbohidratos y acidos organicos como
fuente de carbono
• Analizar e interpretar los resultados obtenidos
en dichas pruebas
Medio de Kligler
 Fundamento
• Permite un diagnóstico rápido orientativo del
tipo de enterobacteria aislado. Las
enterobacterias mas patógenas no suelen
fermentar la lactosa. Se detecta la producción
de ácidos (acompañada o no del
desprendimiento de gases) de glucosa o
lactosa y producción de SH2.
REACCIONES
procedimiento
 Resultados

• amarillo=acidez
• rosa=alcalinidad
• negro = SH2
• fractura o
desplazamiento
del medio =
gases
CONCLUCION
Fermentación de carbohidratos
prueba rojo de metilo
(MR)
Fundamento
La prueba de rojo de metilo es una prueba
cuantitativa basada en el uso de un indicador
de pH, para determinar la concentración de
ion H cuando un microorganismo fermenta la
glucosa

La concentración del ion H depende de la

relación de gases (CO2 y H2)
COMPOSICION
 Reacciones :
Microorganismos RM+

Glucosa + H2O 2-ácido láctico + ácido acético + etanol + 2CO2 + 2H2

Microorganismos RM-
Glucosa + O 2-3butanodiol + H2O + 2CO2
Procedimiento:
Inocular los tubos Incubar los tubos
con las sepas A 37°C durante 24 horas

Esperar la formación
de un anillo rojo en la Añadir al tubo RM sin agitar
Parte superior del tubo
• Interpretación de Resultados

antes después

RM+ debido al anillo rojo que se formo en la superficie del tubo

Las muestras RM- no se observo la presencia del anillo
Conclusión
• Mediante la aplicación de esta prueba
bioquímica es de importancia para la
identificación de especies de bacterias que
producen ácidos fuertes a partir de la glucosa
Citrato de simmons
 FUNDAMENTO
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de
citrato permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico. El
desdoblamiento
del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este último, en
presencia de un medio alcalino, da origen a ácidos orgánicos que, al ser
utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos
alcalinos.
 COMP

Fuente de C Citrato de sodio

Mantiene el balance Cloruro de sodio

osmotico
Sistema buffer Fostato dipotasico

Fuente de N Fosfato
monoamonico
Cofactor encimatico Sulfato de magnecio

Indicador de pH Azul de bromotimos

 PROCEDIMIENTO
• Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar en superficie un
inóculo ligero , usando una ansa sin arrastrar el agar.

Incubación
A 35-37 ºC, durante 24-48 horas, en aerobiosis.
Algunos microorganismos pueden requerir hasta 4 días de incubación
 Interpretación de resultados

Una reacción positiva se

observa por el crecimiento negativa es indicada por
en el medio con un intenso la ausencia, o pobre
color azul. crecimiento sin cambio
de color en el medio
 Colcuciones

• Citrato de Simmons un medio sólido en tubo

con pico de flauta el cual posee un indicador
de pH (azul de bromotimol) si el
microorganismo es capaz de crecer, producira
ácidos organicos provenientes de la utilización
del citrato
Caldo malonato
 Fundamento
Principio igual al del citrato de
Simmons
METABOLISMO Oxalacetato Medio
CITRATO y piruvato Ácidos
alcalino
Orgánicos
(Carbonatos y
Bicarbonatos
alcalinos)

COLORACION AZUL

Principio igual al del citrato de

Simmons

El malonato es un inhiobidor
(inhibición competitiva) de la enzima
succinico deshidrogenasa
 COMP

Aporta nutrientes Extracto del levadura

Fuente de N Sulfato de amonio
Sistema buffer Fosfato dipotásico
SISTEMA BUFFER Fosfato monopotásico
Mantiene balance Cloruro de sodio
osmótico

FUENTE DE CARBONO Malonato de sodio

Indicador de ph Azul de bromotimol
Fuente mínima de C Dextrosa
fermentable
p/estimular crec
Procedimento

Incubar a
37˚C
INTERPRETACION DE RESULTADOS
Los organismos capaces de
utilizar
malonato y sulfato de
sodio,
producen alcalinidad en el
medio

El color del medio no

cambia en
presencia de
organismos que no
puedan utilizar estas
sustancias
DURHAM
FUNDAMENTO
Fermentación de carbohidratos
prueba Voges Proskauer
(VP)
Introducción
La prueba Voges-Proskauer (VP) Esta prueba se
realiza para determinar la capacidad de un
microorganismo de fermentar la glucosa con
producción de ácido por la vía ácido mixta o
con producción de un producto final neutro
(acetoína) por la vía butanodiólica.

Esta prueba junto con MR son muy útiles para la

clasificación de Enterobacterias
Objetivo

Probar la capacidad de los microorganismos de

producir acetoína o acetil-metil-carbinol por
descarboxilación de dos moléculas de ácido
pirúvico (producto final de la glucólisis)
Fundamento
• El acido pirúvico, formado en la fermentación
de la glucosa, es metabolizado a través varias
vías metabólicas. Una de ellas da como
resultado la producción de acetoína un
producto final de reacción neutra.
• En presencia de oxigeno e KOH al 40%, la
acetoína es convertida en diacetilo y el α
naftol sirve como catalizador para producir un
complejo de color rojo.
• Formula
Interpretación

Agregar el alfa naftol e KOH-creatina y agitar

suavemente

• VP+ se observa desarrollo de un color rojo en

el medio

• VP- no se observa el color rojo

Procedimiento:
Inocular los tubos Incubar los tubos
con las sepas A 37°C durante 24 horas

Esperar la formación
de un color rojo en el Añadir al tubo alfa naftol e
tubo KOH-creatina y agitar suavemente
• Resultados
Análisis de resultados
• Las muestras que resultaron ser VP+
presentaron una coloración roja en el tubo
después de haber agregado los reactivos y
agitarlos
• Las cepas VP- después del procedimiento
indicado no presentaron esa coloración roja
• Algunas cepas presentaron un color naranja
que puede ser un falso positivo por lo que se
puede tomar el tubo y calentarlo para
promover la formacion del cojor rojo
• Conclusión
Esta prueba sirve para identificar a los
microorganismos que llevan acabo la
fermentación butonodiolica. Siendo los
productos finales compuestos neutros como el
butanodiol y el etanol, produciéndose
acetoína que fue detectado añadiendo al
medio KOH y alfa-naftol que reaccionan con
este compuesto produciendo un color rojo
característico
 Conclusiones generales
• Las pruebas bioquímicas son de gran utilidad
para la determinación de los microorganismos
ya que no es suficiente con una observación
en microscopio, aplicando estas pruebas
bioquímicas se puede saber con exactitud de
que microorganismo se trata ya que se pone
de manifiesto su metabolismo. (Fermentación
de glucosa, sacarosa, lactosa, producción de
gas, producción de sulfuros, y produccion de
acidos)