Extracción:

sacar los componentes desde un compartimento

celular. Involucra:
Lisis de las células que contienen a los AN
Inactivación de nucleasas(fosfodiesterasa)
Clarificación: separación de los AN de los restos
celulares.

Purificación: Separación de AN:

De proteínas solubles
De otros AN no deseados
De Lípidos, carbohidratos
De sales y otros compuestos orgánicos
Pueden ser aislados de cualquier material biológico
tales como tejidos vivos o conservados, células,
partículas de virus u otras muestras

Actualmente existen muchos métodos especializados

que pueden ser utilizados para extraer biomoléculas
puras de menos costo y mayor rendimiento
• Los ácidos nucleicos
almacenan la información
genética de los organismos
vivos y son los responsables
de la transmisión hereditaria.
• Gran parte del desarrollo físico
de un organismo a lo largo de
su vida.
• Las proteínas que elaboraran
sus células y las funciones que
realizaran están todas
registradas en esta cinta
molecular (ADN).
• Existen dos tipos: el ADN y
el ARN.
Es una macromolécula muy larga , filamentosa y formada por
desoxirribonucleótidos, cada uno de ellos compuesto por una
base nitrogenada, un azúcar desoxirribosa y un grupo fosfato.

Dos puentes
de hidrogeno

Tres puentes
de hidrogeno
El ARN tiene una sola hebra.

La pentosa del ARN que lo

constituye es la ribosa.

Sus cuatro bases son: A, G, C,

U.

Es la molécula que dirige las

etapas intermedias de la
síntesis proteica.
ARNm :Actúa como molde y transporta la información
para la síntesis de proteínas

ARNr: Recibe la información genética. Traduce las

proteínas. Se ubica en el ribosoma, organela donde
se sintetiza las proteínas.

ARNt: transporta los aminoacidos hacia los

ribosomas para la sintesis proteica
• Dr Friedrich Miescher realizó la primera extracción de ADN.
• Esperaba solucionar los principios fundamentales de la vida,
para determinar la composición química de las células.
• Utilizó los leucocitos obtenidos de la pus recogidos en
vendajes quirúrgicos y obtuvo mediante sus pruebas
precipitado crudo de ADN.
 MÉTODOS EXTRACCIÓN EN
CONVENCIONALES FASE SÓLIDA

Tiocianato de
guanidinio- Matrices de
fenol- Sílica
cloroformo

Extracción Partículas de
alcalina vidrio

Método de
Extracción Tierra de
CTAB Diatomeas

Centrifugación en
gradiente de Perlas
bromuro de etidio-
cloruro de cesio. Magnéticas

Purificación de
ARN Poli (A) por Material de
cromatografía de
celulosa de oligo
intercambio
(dT). aniónico
 CROMATOGRAFIA DE
INTERCAMBIO IONICO

CROMATOGRAFIA DE
FILTRACION EN GEL

CROMATOGRAFIA DE
AFINIDAD

ELECTROFORESIS EN
GEL

WESTERN BLOT
  rápida y eficiente

 dependiendo del pH y contenido de sales del buffer.

La interacción puentes de hidrógeno con una

matriz hidrofílica bajo condiciones caotrópicas

Principios del
Intercambio iónico bajo condiciones acuosas por
proceso de
medio de un intercambio Aniónico
absorcion

Mecanismos de exclusión por afinidad y tamaño.

La purificación en Fase Solida es normalmente efectuada por el uso de una columna

giratoria operada bajo fuerzas centrifugas
 Matrices de PASOS DE FASE SÓLIDA
Sílica

Partículas de 1. LISIS CELULAR

vidrio 2. ADSORCION DE ACIDOS NUCLEICOS
3. LAVADO
4. ELUCION
EXTRACCIÓN EN
FASE SÓLIDA
Tierra de
Diatomeas

Perlas
Magnéticas
1 2 3 4
Material de
intercambio
aniónico
1 Acondicionamiento de la columna

2 Convierte la superficie o grupos funcionales en el solido

3 El ácido nucleico deseado se absorberá a la columna con la ayuda de un

alto pH y concentración de sal de la solución enlazadora.

4 La muestra que fue degradada mediante el uso de solución

amortiguadora se aplica a la columna

5 5. Luego los ácidos nucleicos se eluyen con un tampón de

máxima salinidad

6
Se precipita con isopropanol para lavar y eliminar todos los restos
de impurezas

Finalmente, se reconstituye el ADN de elevada pureza en un

7 tampón de baja salinidad para su posterior utilización o
almacenamiento
• ADN(-) = (PO4)-

• Forman p. hidrogeno

• Forman capa hidratante

• Necesidad de sales
coatrópicas

• Rompen la capa hidratante

El gel de agarosa facilita el aislamiento de Los Acidos Nucleicos
1 3

2
 Posee el 94%
de sílice

Roca resultado de la
descomposición del
esqueleto de las diatomeas
que son algas unicelulares

ADN ligado a esta tierraa se lava

con buffer OH ,luego el buffer es
desechado y el ADN que se eluye
con buffer de baja salinidad o H2O
destilada
TIERRA DIATOMEAS
(COMO FILTRANTE )

TIERRA DIATOMEAS
(SOPORTE DE COLUMNA
CROMATOGRAFICA)
 Solución caotrópica: Dilución de las muestras:
Tiocianato de guanidinio isopropanol

Uso de perlas magnéticas implica cuya superficie tiene una carga que se puede cambiar
basándose en el pH o tampón. A pH bajo, están cargados positivamente, atrayendo a las
moléculas de ADN con carga negativa y permitiendo que las proteínas y los contaminantes
que se elimina mediante lavado.
 El Metilaminoetanol (MAE)

El Dietilaminoetil (DEAE)

ÓXIDO DE HIERRO

Óxido de hierro (II, III)

En la interacción entre grupos cargados
Magnetita(IMAN) positivamente de la celulosa de
dietilaminoetilo ( superficie de la resina) y
fosfatos cargados negativamente del ADN .
Los momentos magnéticos de los
distintos cationes de hierro del
sistema se encuentran fuertemente
acoplados.
Una resina de intercambio iónico puede
considerarse como una estructura de
cadenas hidrocarbonadas.

Estas cadenas se encuentran unidas

transversalmente formando una matriz
tridimensional que proporciona rigidez a la
resina y entrecruzamiento que determina la
estructura porosa interna de la misma.
 LISIS CELULAR, con el fin de
purificar y analizar las proteínas.
• Destrucción mecánica
1 • Homogenización
• Moler con un mortero
• Sonicacion.

2 Paso precipitar con sulfato de

amonio

Paso uso de técnicas y métodos

3 para obtener una proteína pura o

con mínimas trazas de
contaminantes.
 CROMATOGRAFIA DE
INTERCAMBIO IONICO

CROMATOGRAFIA DE
FILTRACION EN GEL

CROMATOGRAFIA DE
AFINIDAD

ELECTROFORESIS EN
GEL

WESTERN BLOT
Componentes:
 Fuente de alimentación
 Dos electrodos
Anodo +
Catodo -
 Cubeta
 Tampon de electroforesis
 Soporte electroforético
(gel)