Polaridad y

cromatografía
Instituto Politécnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Ingeniería en Sistemas Ambientales
Laboratorio de Química Orgánica
Práctica 4. Grupo: 3AM2

● Salinas Reyes Carolina

● Trejo Licona Luis Eduardo
Objetivos:
General:

Separar una mezcla de colorantes sintéticos por cromatografía en las modalidades de fase
reversa y fase normal, aplicando los principios de polaridad de los compuestos orgánicos.

Particulares:

● Conocer la técnica de cromatografía en capa fina, ccf, sus características y los factores
que en ella intervienen.

● Calcular valores de Rf de varias sustancias y correlacionarlo a la selección adecuada del

eluyente y deducir la relación que existe entre la polaridad de las sustancias que se
analizan por comparación con patrones de las sustancias puras.

● Aplicar la técnica de ccf como criterio de pureza e identificación de sustancias por

comparación con patrones de las sustancias puras.
Polaridad
● Propiedad molecular que representa la separación de las cargas eléctricas dentro de la
molécula, según el número y tipo de enlaces que posea.

● Enlaces covalentes (polar y no polar.)

● Momento dipolar.
Disoluciones polares y no polares.
"lo similar disuelve lo similar"
Generalmente las fuerzas de atracción en las moléculas no polares son débiles.Los
solutos no polares no son solubles en disolventes de alta polaridad como el agua. Esto se
debe a que la atracción entre las partículas del soluto no polar y el disolvente polar no
son suficientes para ocasionar el proceso de disolución.

Coeficiente de reparto.
Ley de distribución de Nerst.
Cuando una mezcla de moléculas disueltas en un solvente determinado se pone en contacto
con otro solvente que sea inmiscible con el primero, las moléculas disueltas se difundirán
hacia la nueva fase hasta alcanzar una concentración en cada fase (solvente) que depende de
la solubilidad relativa de dicha molécula en las fases.
La cromatografía comprende un conjunto de técnicas que tienen
como finalidad la separación de mezclas basándose en la
diferente capacidad de interacción de cada componente en otra
sustancia.

La cromatografía se logra por medio de la utilización de dos fases:

una fase móvil, el cual es una solución que está compuesta por distintos
elementos; y una fase estacionaria, esta se caracteriza por ser un material sólido
que permanecerá sin cambios antes o después de la implementación de la técnica,
la mezcla a estudiar permanecerá con el compuesto que posea más afinidad bien
sea el que se encuentra en fase sólida o en fase móvil, de esta forma se apreciara
las características generales de cada compuesto estudiado.
Métodos cromatográficos
 En cromatografía líquida podemos distinguir dos
modalidades básicas:

Cromatografía en fase invertida:

Cromatografía en fase normal:
Fase normal, (fase estacionaria polar y fase
móvil no polar), los disolventes más polares
eluyen¹ rápidamente a los solutos que tengan
mayor tendencia a quedar retenidos.
Fase móvil de naturaleza polar y la fase
estacionaria no polar (cadena
hidrocarbonada) que puede ser :
„
● Cadena larga: C-18
● Cadena intermedia: C-8
● Cadena corta: C-2
En fase invertida, cuanto más polar sea el
disolvente, menor es su poder de elusión,
porque disuelve menos a los solutos no
polares.

¹Extraer , mediante un líquido apropiado , una sustancia del medio sólido que la ha absorbido .
 Fase Normal
Sólidos muy porosos con capacidad adsorbente: Gel de sílice (SiO2); Alúmina (Al2O3)„

La superficie del gel de sílice interacciona con los compuestos orgánicos mediante interacciones
de carácter polar. La sílice cumple dos misiones en cromatografía de líquidos:

Como fase estacionaria activa en cromatografía de adsorción. En este caso, se establece una
competencia entre las moléculas del soluto y las moléculas de la fase móvil por ocupar los sitios
activos de la superficie de la sílice (grupos silanol).

Puede actuar como sólido soporte de la fase estacionaria líquida en la cromatografía de partición
En este caso, la porosidad en la superficie de la sílice retiene la fase estacionaria líquida.
 Fase Móvil

La fase móvil es una mezcla de disolventes: ELUYENTE

La fase móvil fluye arrastrando los compuestos que están retenidos en la fase
estacionaria.

„ luyentes polares: Arrastran más eficazmente los compuestos más retenidos en la

E
fase estacionaria. Arrastran más rápidamente a los compuestos.

„Eluyentes menos polares: Arrastran muy lentamente a los compuestos

 Propiedad Rojo de Metilo Fluoresceína Metanol Agua

Estado físico Sólido Sólido Líquido Líquido

Color Rojo violeta Rojo Incoloro Incoloro

Peso molecular 269.31 g/mol 332.306 g/Mol 32.04 g/mol 33 g/mol

Constante dieléctrica 32.7 80,4 a 20°

Solubilidad Hidrosoluble a 500 g/l (20 °C) Hidrosoluble Es polar se

20ºC disuelve en
solventes polares

Densidad 0.989 g/cm3 600 kg/m3. 0.791 g/cm3 1 g/cmз

Estructura

Rombo NFPA
 Metodología
Procedimiento Experimental para la cromatografía en fase sólida (SPE) se utilizan cartuchos de
fase reversa comerciales (C-PAK Alltech) preparados con sílica compactada recubierta de un
hidrocarburo (C18 o C20), los compuestos que vamos a separar son polares y se requiere
preparar el cartucho antes de usarlo está cromatografía se hace de la siguiente forma:

Acondicionamiento Elusión
Sujetar el cartucho Aplicación Los colorantes retenidos son
Lavado
con unas pinzas y de la eluidos con un gradiente de
Los
colocarlo en un muestra metanol/agua; usando primero
compuestos
soporte universal. Una vez 10 ml de metanol al 10%,
retenidos se
Pasar a través de él: que han seguidos de 15 ml de metanol
lavan con
5 ml de metanol pasado los al 50% y finalmente usar 10 ml
suficiente
reactivo analítico, al 5 ml de de metanol R.A, recolectando
agua, metanol
término de éste y sin agua, se fracciones de 5 ml (o en este
y/o acetona
dejar secar, agregar agrega 5 caso por intensidad de color)
hasta que el
5 ml de agua gotas de la una vez terminada la
eluato este
destilada sin dejar mezcla de separación, correr una
claro
secar. Desechar colorantes. cromatografía en placa fina de
estos eluatos. (TLC)cada eluato.
Procedimiento experimental
para la TCL. Dejar secar, eluir en la
cámara
cromatográfica
En los números 3,4 y 5 saturada previamente
En placa de sílica
aplicar tres de los eluatos con hexano/cloruro de
gel de 3x5 cm,
obtenidos en la metileno/acetona en
marcar con lápiz dos
cromatografía en columna. relación 1:1:0.5 hasta
líneas a una
0.5 cm del borde
distancia de 0.5 cm
superior y retirar.
del borde inferior y
superior de la placa.

Señalar cinco puntos

equidistantes y
enumerarlos, en 1 y Dejar secar y
2 colocar muestra de calcular el Rf.
colorantes estándar.