SERO-EPIDEMIOLOGY OF

DENGUE VIRUS INFECTION

IN 4 CITIES OF INDONESIA
By Zidna Sabela Naja
30000147420020
APA ITU DHF?
Demam Berdarah /DHF
• Adalah penyakit demam akut yang disebabkan oleh virus
dengue, menyerang pada anak anak dan saat ini cenderung
polanya berubah ke orang dewasa. Gejala yang ditimbulkan
dengan manifestasi perdarahan dan bertendensi
menimbulkan shock.
Virus demam berdarah adalah mosquito
borneflaviviruses dengan single-stranded,
nonsegmented, genom RNA positif ≈11 kb di
panjangnya. Empat serotipe antigenik
berbeda, tipe DENV 1 ke 4, ada.3 Infeksi
serotipe apapun bisa menyebabkan penyakit,
Mulai dari infeksi ringan, demam berdarah
(umumnya ringan penyakit dengan pemulihan
lengkap), hingga bentuk parah (demam
berdarah demam berdarah dan sindrom syok
dengue).

Molekuler studi epidemiologi telah

menyelidiki kemungkinan hubungan antara
genotipe atau cluster DENV tertentu atau
bentuk penyakit klinis tertentu.
Population Study
392 spesimen serum dari pasien yang memiliki manifestasi klinis demam
berdarah infeksi

Sample
Sera responden diperoleh dari 392 pasien yang hadir manifestasi klinis
demam berdarah dan diuji antidengue Antibodi IgM (Becton-Dickinson).
Diagnosis virus dengue yang terinfeksi itu berbasis pada Kriteria WHO 2009.
Sampel terinfeksi Dengue adalah diperoleh selama lima hari pertama
.
terjadinya demam dan diolah untuk deteksi anti demam berdarah dengue
menggunakan IgM menangkap ELISA (MAC-ELISA)
 Dengue Virus
Ekstarksi RNA
• Virus demam berdarah terisolasi dengan
menggunakan Aedesalbopictus Sel C6 / 36 ditanam • Total RNA diekstraksi dari serum 100ųl atau dari sel
pada 48 sumur kultur jaringan dijelaskan oleh kultur dengan menggunakan Trizol LS (GIBCO BRL,
Irgarashi.9 Secara singkat, sel 2x105 disepuh 1 ml
medium penting minimum (Gibco BRL, Grand Pulau, Gaithersburg, MD.) Menurut produsen rekomendasi.
N.Y.) dilengkapi dengan 7% serum bovine janin RNA yang diendapkan etanol adalah pulih dengan
• (Sigma Chemical Co., St Louis, Mo) dan glutamin 1%
vitamin dan asam amino yang tidak penting. Setelah sentrifugasi dan udara kering. RNA diganti kembali
24 jam kultur, 100 ųl setiap sera yang diencerkan dalam 50 ųl dietil-pirokarbonat (Sigma) -treated
1:10 ditambahkan ke dalam sesuai dengan baik.
Campuran tadi kemudian diguncang dengan lembut water (air DEPC) dan digunakan sebagai template
dan diinkubasi selama 60 menit pada suhu kamar. untuk RT-PCR
Sel Kemudian dicuci dengan medium bebas serum
dan berbudaya pada suhu 28 ° C dengan medium
sempurna paling sedikit 10 hari. Sel dipanen untuk
diagnosis RT-PCR.
 RT-PCR

• Pasangan primer oligonukleotida sintetis dirancang berdasarkan data urutan yang

dipublikasikan untuk masing-masing dari keempatnya serotipe dengue.10,11 Empat fragmen
dari ukuran yang diharapkan dari 392 bp (DEN-1), 392 bp (DEN-4), 290 bp (DEN-3) dan 119 bp
(DEN-2) diperoleh dengan menggunakan SuperScripTM
• Satu langkah RT-PCR kit inconjunction dengan PlatinumRTaq polimerase (Invitrogen, Life
Technologies). Campuran dari 5 ųl RNA, 25 ųM sencse dan PCR anti-sense primer, dan air
DEPC sampai total volume 0f 50 ųl diinkubasi pada suhu 85 ° C selama 5 menit dan kemudian
dingin di atas es. Tabung reaksi Campuran yang mengandung buffer PCR 2x yang mengandung
0,4 mM MgSO4 dan SuperScripTMRT / platinumRTaq Mix, seperti yang direkomendasikan oleh
produsen (Invitrogen TM
• Life Technologies), ditambahkan ke thr RNA dan primerscontaining tabung. Reaksi transkripsi
terbalik adalah dilakukan pada suhu 50 ° C selama 30 menit. Termostat dimulai dengan awal
yang panas pada suhu 9 ° C selama 2 menit diikuti oleh 40 siklus dari anil pada 55 ° C selama
30 detik, dan perpanjangan pada suhu 72 ° C selama satu menit dan denaturasi pada suhu 94
° C selama 15 menit.
• Kondisi PCR untuk penilaian serotipe adalah sebagai berikut: 40 siklus denaturasi pada suhu
94 ° C selama 30 detik, anil pada suhu 55 ° C selama 1 menit, dan perpanjangan pada suhu
72 ° C untuk 7 menit. Campuran reaksi bersifat elektroforesis dan divisualisasikan dibawah
sinar UV setelah pewarnaan etidium bromida.
 Seroepidemiologi Infeksi Virus Dengue adalah ilmu infeksi Virus
Dengue ke host lain manusia dengan gigitan nyamuk Aedesaegypti
yang telah didukung oleh faktor biotik dan abiotik

meningkatnya populasi Aedes aegypti di perkotaan dan sub lingkungan

perkotaan karena perubahan musim hujan untuk matahari terbit Infeksi
virus dengue pada manusia dapat ditemukan jika interaksi antar etiologi,
host dan lingkungan hidup terjadi

(1) Etiologi adalah virus dengue yang biasanya hidup pada nyamuk
Aedesaegypti yang seperti kehidupan di air bersih.
(2) Host adalah manusia yang telah mengalami penurunan imunitas untuk
sangat lelah dan mendapatkan virus yang lebih ganas dari gigitan Nyamuk
Aedesaegyptie yang didukung oleh
(3) berubahnya humaditas lingkungan
 Kesimpulan
• Telah ditemukan infeksi virus dengue berat yang ditunjukkan manifestasi klinis perdarahan dan
ensefalopati, Dengan jenis strain virus dengue: Strain dominan sebagai penyebab keparahan.
• Seperti yang kita ketahui di dekade pertama Serotipe Dengue 2 dan 3 adalah regangan utama
Den 2 cenderung dinetralkan lebih kuat dari virus lainnya. Terjadi perubahan Serotipe dan
ditemukan Den 1 genotipe 1V menunjukkan manifestasi klinis keparahan dengan infeksi
primer, Namun Serotipe Den 1 dan IV adalah ditemukan, dan menunjukkan Den IV lebih
banyak ditemukan.
.
• Analisis filogenetik pada Den V 1 menunjukkan bahwa genotipe 1 dan IV terjadi pada waktu
bersamaan meski hanya genotipe IV yang diisolasi.
• Ada perbedaan antara genotipe D 1 I dan IV. Menganalisis perbedaan genotip sangat penting
pengembangan vaksin Berdasarkan hasil penelitian ini, memonitor kemunculannya strain
Dengue Virus yang diimpor atau bermutasi pada manusia, Sedang dan nyamuk harus terus
dicegah perkembangan nya.