MEDIOS DE CULTIVO

PARA LEVADURAS

ALONSO ARENAS JESSICA A

FLORES AYALA JAEL
LÓPEZ LÓPEZ ADRIANA
SÁNCHEZ RIVERA MARISEL

BIOPROCESOS 2018
¿CÓMO SON LAS LEVADURAS?
 CARACTERÍSTICAS GENERALES

• Organismos eucarióticos
• Genomas pequeños, bien estudiados y algunos secuenciados
• Son relativamente fáciles de crecer

• Son utilizadas en estudios eucarióticos de genes y proteínas:

-Síntesis de sistemas de expresión en proteínas
-Estudios de funciones específicas de genes o proteínas
-Análisis de nuevas interacciones de
proteínas

• Tienen diversas aplicaciones industriales:

Fermentación
Biorremediación
Cocción
 MEDIOS DE CULTIVO

• Compuestos típicamente
por: peptona, extracto
de levadura y azúcar.
• El medio utilizado varía
según los propósitos de
uso (industrial o
experimental).
• Variaciones mínimas en la
composición pueden
ocasionar levaduras con
distintas características
de crecimiento.
¿A QUÉ TEMPERATURA LO PREPARO?

30° 25° 23° 18° 37°

Normal Tempera- Ideal Previene Previene
tura para crecimient crecimient
adecuada cepas o de cepas o de cepas
sensible sensibles al
s a la
sensibles al
temper frío calor
atura
 TIPOS DE MEDIO DE CULTIVO

Medios enriquecidos: Permiten un

crecimiento más rápido, pero los
resultados pueden ser más variables
debido a las variaciones en los
componentes. La mayoría de los
experimentos usan medios
enriquecidos.

Medios sintéticos: proporcionan un

crecimiento más lento, pero permiten un
control preciso de los componentes.
Debido a que los medios sintéticos
permiten la omisión de nutrientes, se
requieren medios sintéticos para la
selección mediante marcadores
auxotróficos y para mantener los
plásmidos.
 FUENTES DE CARBONO DE MEDIOS DE
CULTIVO PARA LEVADURAS
Glucosa: Es la favorita, causa la represión de los genes utilizados para metabolizar otros
azúcares (por ejemplo, galactosa). La levadura metaboliza glucosa por fermentación
anaeróbica.

Galactosa: se usa para cultivar cepas con un gen bajo el control del promotor sensible a la
galactosa (PGAL). La galactosa también se fermenta.

Rafinosa: una fuente de carbono semi-fermentable que admite tasas de crecimiento

razonables, no reprime los genes para utilizar otras fuentes de carbono.

Glicerol: una fuente de carbono no fermentable que obliga a la levadura a crecer

aeróbicamente. El crecimiento en medios ricos en glicerol no es demasiado lento, pero los
medios sintéticos de glicerol proporcionan un crecimiento muy lento.

Acetato: el acetato de potasio es otra fuente de carbono no fermentable. Esto admite un

crecimiento mucho mejor que el glicerol y, en general, es útil.

Otros azúcares: la sacarosa es fermentable pero rara vez se usa. Las cepas de laboratorio no
pueden fermentar la maltosa, pero pueden obtener un plásmido MAL63.
El etanol y el lactato son fuentes de carbono no fermentables.
 AUXOTROFÍA
•En fisiología microbiana, se dice que
un organismo es auxótrofo cuando
solo es capaz de proliferar en un
medio de cultivo si a este se le ha
añadido alguna sustancia
específica que el tipo silvestre
(protótrofo) no requiere porque es
capaz de sintetizarla.
• Existen cepas de levaduras
empleadas en laboratorio
debido a la carencia de una
enzima requerida para la
síntesis de uracilo, precisan
de este medio para poder
crecer
• Carencia de una ruta metabólica
funcional que genere la sustancia
de la que depende el auxótrofo,
esta carencia se debe a una
mutación que genera un alelo
nulo carente de capacidad
biológica.
Han comenzado a utilizarse
otras especies de levadura
como hospedadores para la
expresión heteróloga de
proteínas debido a la
aparición de problemas en la
expresión de ciertas proteínas
en S. cerevisiae.
LEVADURAS EMPLEADAS EN LA
INDUSTRIA

P. pastoris es una especie de

• Pichia pastoris levadura ampliamente utilizada
en fermentaciones industriales
• Kluyveromyces lactis con un ciclo biológico y unas
• Yarrowia lypolitica características parecidas a S.
• Hansenula polymorpha cerevisiae. Esta similitud se pone
de manifiesto por la
funcionalidad cruzada de
genes entre ambas especies,
ha permitido utilizar marcadores
auxotróficos de S. cerevisiae
para la selección de
transformantes de P. pastoris.
Antibióticos
• Cloranfenicol: Amplio espectro de actividad
antibacteriana contra organismos Gram+ y Gram-
(tanto aerobios como anaerobios).
• Tetraciclina: Bacteriostático. Inhibe síntesis proteica
bacteriana. Activo frente a Gram+ y otros
microorganismos.
• Gentamicina: Antibiótico de amplio espectro. Actúa
sobre bacterias gramnegativas aerobias, incluyendo
enterobacteriáceas, Pseudomonas y Haemophilus.
Actúa también sobre estafilococos.
• Kanamicina: Antibiótico de amplio espectro,
bactericida, activo sobre Gram+, Gram y
Mycobacterium
 Agar papa
dextrosa
(PDA).
Sabouraud BiGGY
Agar. Agar.

MEDIOS
SD PARA YEPD o YPD

LEVADURAS

YPAD YPG

YPDG
 AGAR PAPA DEXTROSA (PDA).
• Tiene la infusión de papa como fuente de almidones y la
dextrosa, son la base para el crecimiento de hongos y
levaduras.

• El bajo pH (3.5) evita el crecimiento de las bacterias.

• Cuando se va a usar para el recuento de hongos y levaduras,

agregar al medio de cultivo una vez esterilizado y enfriado
aproximadamente a 45ºC, 14 ml de una solución estéril de
ácido tartárico al 10% para obtener un pH aproximado de 3.5.

• Sembrar el medio de cultivo por estría en la superficie o

adicionar la muestra para la técnica de vaciado en placa.

• Incubar hasta 7 días a temperatura ambiente.

• Las levaduras crecerán como colonias desde un
color crema a un color blanco.

• Los mohos crecerán como colonias filamentosas de

variados colores
 SABOURAUD AGAR.
• Se utiliza para el aislamiento y el cultivo de hongos (levaduras,
mohos y dermatofitos) a partir de muestras clínicas.

• Es un medio de uso general para el cultivo de dermatofitos. Hoy

en día se utiliza para el aislamiento y cultivo de todos los hongos.
• Las peptonas en Sabouraud Agar son fuentes de factores de
crecimiento nitrogenoso.

• La glucosa aporta una fuente de energía para el crecimiento de

microorganismos.

• La alta concentración de glucosa presenta una ventaja para el

crecimiento de hongos, mientras que la mayoría de las bacterias
no tolera la alta concentración de azúcar.

• El bajo pH es óptimo para los hongos pero no para muchas

bacterias.
Hay de 4 tipos:

• Sabouraud Glucosa Agar.

• Sabouraud Agar con penicilina y estreptomicina.
• Sabouraud Agar con gentamicina y cloranfenicol.
• Sabouraud Glucosa Agar con cloranfenicol.

Se añaden estos agentes selectivos para inhibir las bacterias.

El cloranfenicol es un antibiótico de amplio espectro que inhibe
una amplia variedad de bacterias gram negativas y gram
positivas, pero puede tener un efecto inhibidor en numerosos
hongos patógenos.
Los antimicrobianos como la penicilina, la gentamicina y la
estreptomicina, o una combinación de las mismas, son eficaces
en la inhibición de bacterias sin afectar el crecimiento fúngico.
Estos medios se utilizan para el aislamiento de hongos a partir
de muestras clínicas o materiales en los que se sospeche la
presencia de contaminantes bacterianos.
 BIGGY AGAR.

• Es un medio de diferenciación parcialmente

selectivo para el aislamiento y la diferenciación de
las especies de Candida a partir de muestras
clínicas.

• BiGGY Agar es una modificación del medio

Nickerson. Durante el estudio de la reducción de
sulfito de las especies de Candida, Nickerson
detectó niveles diferentes de esta capacidad entre
las especies de Candida. Describió este medio
para el aislamiento de Candida albicans, que
puede diferenciarse de otras especies de Candida
por el color y la morfología de las colonias.
• En BD BiGGY Agar, el extracto de levadura y la glucosa
proporcionan los nutrientes necesarios para el
crecimiento de levaduras.

• La glicina es un nutriente adicional, pero también inhibe

muchas especies bacterianas en la alta concentración
utilizada en este medio.

• Las especies de Candida reducen la sal de bismuto a

bismuto y el sulfito a sulfuro, mediante un proceso de
reducción de sustrato.

• El bismuto y el sulfuro se combinan en un precipitado de

color amarronado a negro que tiñe las colonias y puede
difundirse en el medio. Asimismo, los compuestos de
bismuto y azufre inhiben numerosas bacterias.
 YEPD O YPD

• YEPD o extracto de peptona dextrosa de extracto de levadura,

es un medio completo para el crecimiento de levaduras.

• Contiene extracto de levadura, peptona y glucosa o dextrosa y

se puede usar como medio sólido.

• El extracto de levadura generalmente contiene todos

los aminoácidos necesarios para el crecimiento.

• Al ser un medio completo , YEPD no se puede utilizar como

medio de selección para detectar auxótrofos. En cambio, YEPD
se usa como medio de crecimiento para cultivar levaduras.

• La versión de caldo de YEPD típicamente contiene: 1% de

extracto de levadura, 2% de peptona, 2% de glucosa / dextrosa,
y el resto es agua destilada. Mientras que la versión de agar
incluye la adición de 1,5 a 2% de agar antes de permitir que la
mezcla se enfríe y se solidifique.
 MEDIO YPAD

• YPAD es un medio complejo para la preparación de

inclinados.
• Este es un medio rico y no selectivo. Todas las levaduras
crecerán
• Extracto de levadura
• Peptona
• Glucosa
• Sulfato de adenina
• Bacto-agar
• Agua destilada
 MEDIO YPG
• YPG Agar se recomienda para el crecimiento de
Saccharomyces cerevisiae con fines de biología
molecular.
Composición
• Extracto de levadura
• Peptona
• Glicerol
• Agar Bacto

Saccharomyces cerevisiae

• Un medio complejo que contiene una fuente de

carbono no fermentable (glicerol)
• Los métodos generales en
genética de levaduras
especifican el uso de extracto de
levadura, medio de peptona
para cultivar Saccharomyces
cerevisiae y otras levaduras

• El extracto de levadura permite

un crecimiento más rápido
durante el crecimiento
exponencial las células dividen
cada 90 minutos.

La peptona es una fuente de

carbono, nitrógeno, vitaminas y
minerales.
 MEDIOS SINTETICOS
MEDIO SINTÉTICO COMPLETO (SC)
• Se utiliza como un suplemento de aminoácidos para todas las
cepas de Saccharomyces cerevisiae
• Selectivo
• Se puede mezclar con base de nitrógeno de levadura
suplementada (YNB), sulfato de amonio y una fuente de
carbono apropiada (glucosa / galactosa / rafinosa) para
producir un medio adecuado para el crecimiento de la
levadura en gemación.
 Estudio en biología molecular y
celular.
• Proporciona los elementos
nutricionales esenciales para las
células de levadura.

• Está compuesto de todos los

aminoácidos requeridos para el
crecimiento vigoroso de
Saccharomyces cerevisiae.
• El aminoácido, la mezcla de
vitaminas contiene todos los
suplementos posibles, es
decir, no se abandona
nada en contraste con las
mezclas

• Cada una de las

auxotropías comúnmente
encontradas se
complementa con una
mezcla completa de
aminoácidos y vitaminas.

• Crecimiento:bueno-
exuberante
MEDIO MÍNIMO DEXTROSA SINTETICA
(SD)
• Es un medio sintético mínimo que contiene sales,
oligoelementos, vitaminas, nitrógeno.

• Fuente (base de nitrógeno de Bacto-levadura sin

aminoácidos) y glucosa.
• Bacto-levadura base nitrogenada sin aminoácidos
• Glucosa
• Bacto-agar
• Destilado H2O
AGAR CROMOGÉNICO PARA CÁNDIDA

Es un medio microbiológico adecuado para

la incubación, diferenciación o selección
usando sustrato cromogénico que da
resultado un color.

BBL CHROMagar Candida Medium 

Candida albicans, C. tropicalis y C. krusei a
partir de muestras clínicas

Inhibe el crecimiento de bacterias y puede

utilizarse como medio de aislamiento
selectivo para otras especies de levadura y
para hongos filamentosos
AGAR CROMOGÉNICO PARA CÁNDIDA
 TINCIÓN DE LEVADURAS

Tinción simple Tinción diferencial

• La tinta china o Nigrosina • Se utilizan varios colorantes
permite observar células combinados. Las estructuras
levaduriformes capsuladas celulares se diferencian en
(Cryptococcus) función de los diferentes
colorantes que fijan de
acuerdo con su propia
constitución química.

BGN y
levaduras
en una
tinción de
GRAM
INDUSTRIA Y USOS DE LAS
LEVADURAS
Alimentos Ambiental Biocontrol

Protección de
Producción de Producción de Bioetanol cultivos, alimentos
enzimas,saborizantes, H. polymorpha y probióticos
pigmentos,aminoácidos
y ácidos orgánicos
Aplicación en
biorremediación y
degradación de
contaminantes
FIN