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MDULO 5
EL SISTEMA DE AUTOCONTROL EN
LA INDUSTRIA AGROALIMENTARIA
(Parte I)
PARTE I:
1 INTRODUCCIN A LA MICROBIOLOGA.
2 CRECIMIENTO MICROBIOLGICO.
3 TCNICAS MICROBIOLGICAS.
5 DIVERSIDAD MICROBIOLGICA.
1 INTRODUCCIN A LA MICROBIOLOGA
Bacterias
Microorganismos Celulares: Hongos
Protozoos
Viroides
Microorganismos Acelulares: Priones
Virus
Organizacn Procariota (archaea/bacterias)
Organismos Celulares: Organizacin Eucariota (eucaria/algas,
hongos, protozoos)
PROCARIOTAS
Peptidoglicano:
N-acetilglucosamina
Polisacridos: cido acetil-murmico Unidos por aa
Pptidos cortos
Endosporas; resistencia a cosas (T conservacin de alimentos).
Peptidoglicano
Bacterias Gram +
cidos cido
protena teicoicos lipoproteico
peptidoglicano
Espacio periplasmtico
Relacionado con la sntesis de peptidoglicano
membrana
plasmtica
(8nm)
Polisacrido-O
polisacrido
Ncleo del
Lpido-A Portena
Membrana
Porina
Externa
Fosfolpido
8 nm
Periplsmico
lapoprotena
Espacio
peptidoglicano
membrana
plasmtica
(8nm)
Estructura del Lipopolisacrido (LPS)
Crecimiento Exponencial: N0
log
N = N0 * 2n logN = logN0 + n*log2 n= N0
log 2
dx n de clulas o de cosas que yo quiero ver
= *x
dt
constante de crecimiento especfico (h-1)
define el crecimiento ptimo
crecimiento
Ln x
x0
x = x0 * e (tt0) Ln x Ln x0 = * (t-t0) =
t-t0
Si (t-t0) = TG : x = 2 * x0 Ln 2
2* x = x0 * e (tt0) TG =
x = x0 * e (tt0)
Curva de Crecimiento tpica para una poblacin microbiana:
FASES DE CRECIMIENTO
LATENCIA EXPONENCIAL ESTACIONARIA MUERTE
9.0 1.0
turbidez ptica 0.75
Log organismos viables/ml
(densidad ptica)
8.0 viables
densidad ptica
0.50
7.0
0.25
6.0
5.0
tiempo
Medidas directas del Crecimiento Microbiolgico:
A) Recuento de clulas totales.
slidos
Mtodo del recuento directo en
lquidos
B) Recuento de clulas viables: clulas vivas
Mtodo de siembra por extensin en placa.
Mtodo de siembra por vertido en placa.
1 ml 1 ml 1 ml
1 ml
9 ml 9 ml 9 ml 9 ml
(1/10) (1/100) (1/1000) (1/10000) : diluciones
159 colonias
Factor de dilucin 102
X S y X constantes: controlando
S controlo X
CULTIVO
S
EFLUENTE DE CLULAS
MICROBIOLGICAS
Factores que afectan al crecimiento microbiolgico:
Temperatura:
A mayor T las reacciones qumicas y enzimticas son ms rpidas,
pero llega a un punto donde se inhibe el crecimiento.
Cada organismo tiene sus temperaturas cardinales:
T mnima: Por debajo de sta no existe crecimiento.
T ptima: Crecimiento rpido (+ cerca de Tmx que de Tmin).
T mxima: Por encima de la cul no existe crecimiento.
T
T min T opt T max
DESNATURALIZACIN PROTEICA
Organismos PSICRFILOS:
T ptima < 15 C
PSICRFILOS ESTRICTOS: por encima de 15-20 C mueren.
PSICRFILOS TOLERANTES: toleran bajadas bruscas de T.
crecen a 0C.
T ptima 20 40 C.
Organismos MESFILOS:
T ptima 30 - 37 C
E. coli.
E. coli Escherichia coli
Organismos TERMFILOS:
T ptima > 50C
TERMFILOS TOLERANTES: T ptima 50 C.
HIPERTERMFILOS: T ptima > 80 C.
No en Eucariotas.
Asociadas a procesos volcnicos.
Casi todas Arqueobacterias.
Thermus Aquaticus:
En centrales elctricas y calentadores.
T optima 150 C.
Thermus Aquaticus polimerasa:
Tcnica del PCR (medicina forense)
Thermophilus Aquaticus
pH:
Para que exista crecimiento: 2 < pH < 10.
Tambin hay pH ptimos.
Organismos ACIDFILOS:
pH 2 5.
Hongos.
Zumo de limn pH = 2
Organismos NEUTRFILOS:
pH 7.
Agua Pura.
pH citoplasmtico es neutro.
Organismos ALCALFILOS:
pH > 7 (7 10).
Bacillus (Gram +).
Alcalfilos Extremos: Archaea
Oxgeno:
Organismos AEROBIOS:
Crecen a tensiones de O2 normales: 21% de O2 en aire.
Organismos ANEROBIOS:
Los que no respiran O2.
Medio HIPOTNICO:
La [ ] exterior < [ ] citoplasma La clula explota
Medio HIPERTNICO:
La [ ] exterior > [ ] citoplasma La clula se arruga
Actividad de Agua: aw
0 < aw < 1
Ps
aw =
PH O
2
Organismos HALFILOS:
Requieren NaCl para crecer.
Microorganismos marinos.
H. DISCRETOS: Bajo requerimiento de NaCl (1- 6 %).
H. HIPERTNICOS: Moderado requerimiento de NaCl (6 - 15%).
H. EXTREMOS: Crecen en ambientes muy salinos
15 30 % para crecimiento ptimo
Organismos OSMFILOS:
Los microorganismos crecen en [ azcares ].
Crecen en frutas.
Organismos XERFILOS:
Los microorganismos crecen en ambientes muy secos.
Solutos Compatibles:
Para no arrugarse, el microorganismo sintetiza solutos para
aumentar la tensin osmtica en su interior.
Medicin del Crecimiento Microbiolgico:
3 TCNICAS MICROBIOLGICAS
TCNICAS de OBSERVACIN
M.O. M.E.T.
HAZ Luz Electrones
Muestra: al vaco.
Corte en la parafina con una cuchilla (microtomo).
Tincin con metales pesados.
Tcnica empleada:
Criofractura.
Criograbado.
Sombreado metlico (para los Virus).
Microscopio ptico:
De campo brillante.
De campo oscuro.
Por contraste de fases:
Basada en la diferencia de ndice de refraccin de los
componentes de la muestra (imagen tridimensional).
Fluorescente:
Tcnicas con fluorocromos o marcacin con sonda.
Con focal:
Microscopa antigua.
MICROSCOPA ELECTRNICA:
Con esto la .
Calentamos hilos de tulsteno a 3.000 C y creamos un chorro de e-
con una ddp altsima.
d=
2*AN
1,5 1,5 0,055
= V (voltaje) = 300 = 0,055 nm d=
2*300
Microscopio Electrnico de Transmisin:
virus m. electrnico.
bacterias m. ptico.
membrana externa de una Gram (-) m. e. de transmisin.
TCNICAS de CULTIVO
Cultivo axnico cultivo puro (1 sola especie de 1 sola clula).
Condiciones estriles no contaminacin cond. aspticas.
Medio de cultivo Para hacer crecer los microorganismos.
Condiciones ptimas de cultivo especie.
TCNICAS DE ESTERILIZACIN:
ESTERILIZACIN AL CALOR:
Calor Hmedo:
Autoclave (1 atm).
Vapor de agua 120 C sin hervir.
20 min en esterilizar.
Cualquier cosa miscible con el agua se autoclava.
Calor Seco:
En horno:
180 C / 2-3 horas.
Materiales que aguanten altas temperaturas.
A la llama (mechero).
FILTRACIN:
Metales pesados:
Son muy txicos.
Mercurio de cromo.
Detergentes:
Agente surfactante.
Gases:
Matan a las esporas.
xido de etileno y Formaldehido.
Son muy txicos.
Esterilizamos con bajas dosis.
2 tcnicas de aislamiento de m.o.:
Mtodo de siembra en estra o placa. CULTIVOS AEROBIOS
Mtodo de diluciones sucesivas. CULTIVOS ANEROBIOS
Medio de Cultivo:
Nutrientes.
Macronutrientes: C, H, O, N, P, S, K, Mg, Na, Ca, Fe.
Micronutrientes: Fe (elementos traza).
NUTRIENTES:
Sntesis de la estructura
celular y crecimiento (Fuente ANABOLISMO
de C)
Obtencin de Energa CATABOLISMO
FUENTE DE C:
Luminosa (luz):
auttrofo FOTOAUTTROFO
hetertrofo FOTOHETERTROFO
Medio de cultivo:
Complejo: Ponemos un poco de todo con una fuente de
Carbono (azcar).
Definido: Sabemos la composicin exacta.
Selectivo: Para que crezca un determinado m.o.
Diferencial: Para poder distinguir dos microorganismos
distintos (Agar, caldo peptonado, LIA, )
Microscopa Electrnica
4 ACTIVIDAD DE LOS MICROORGANISMOS
NUTRIENTE
Reaccin CATABLICA
(productor de energa)
Metabolitos Precursores
Poder Reductor (NADH)
Energa (ATP)
PRINCIPALES RUTAS CATABLICAS:
Metabolitos precursores:
Son 12 compuestos esenciales.
Ninguna ruta por s sola da los 12 compuestos.
Poder Reductor:
Reacciones de Oxido-Reduccin (RedOx)
Transferencia
Oxidacin: ceder e- (Lo ceden los tomos de H) de protones
Reduccin: ganar e-
Sntesis de ATP:
Fosforilacin oxidativa
En las membranas: ATPasa ATPsitetasa
Introducen H+
Sintetiza ATP para el gradiente de protones
GLUCOLISIS: 1 glucosa 2 piruvato + 2ATP + 2NADH
ATP ATP
(C6) aldolasa
DHAP (C3)
ADP ADP NAD
Muy inestable
PIRUVATO PEP 1,3-BPG G3P (C3)
aldolasa
PIRUVATO
GLICERALDEHIDO
PIRUVATO
FOSFATO
PENTOSAS FOSFATO: 1 glucosa 2 piruvato + 1ATP + 3NADH
ATP NADH
CIDO 6 FOSFO
GLUCOSA G-6-P
GLUCNICO
ADP
CO2
NADH
RIBULOSA 6
PIRUVATO G-3-P
FOSFATO
RESPIRACIN:
Proceso en el cual un compuesto es oxidado con O2 (o un sustituto de O2), que
funciona como aceptor terminal de e- y que normalmente se acompaa de la
produccin de ATP por Fosforilacin Oxidativa.
CO2
Fosforilacin a
nivel de sustrato
OXALACETATO
GLUCOSA ACETIL-CoA
SUCCINATO
CO2
Aceptores de e- :
1.- FADH Deshidrogenasa.
2.- Flavoprotena.
3.- Ferredoxina (slo capta e- , los H+ los echa fuera).
NADH Deshidrogenasa
e-
H+
FLAVOPROTENA
e- Energa
+
H Protn-Motriz
FERREDOXINA H+
H+
e-
e-
QUINONA CITOCROMO
EJEMPLO 1: Fermentacin Homolctica 2 Hlac + 2 ATP
PIRUVICO
NADH
lactato deshidrogenasa
NAD+
CIDO PIRUVICO el pH y precipita la casena
PIRUVICO
NADH NAD+
CO2
ACETALDEHIDO ETANOL
alcohol deshidrogenasa
RESPIRACIN:
AEROBIA: El ltimo aceptor de e- es el O2.
O2/H2O poder reductor muy alto
AUTTROFOS
18 ATP
Fijacin de CO2 Ciclo de KALVIN 12 NADPH
FUENTE DE ENERGA
- Luz ATP
NADPH FOTOSNTESIS
BACTERIAS
Origen de la vida ARCHEOBACTERIAS
PROCARIOTAS
Clasificacin que nadie acepta: Reino Animal / Plantas / Fungi / Monera / Protista
hongo protozoo procariota
Cronmetro Molecular: ARNr 16S eucariota
18S procariota
BACTERIAS clasificacin: dominio +
reino
ARCHAEA seccin
EUCAREA (eucariotas) clase
rden
familia
BACTERIAS: gnero
especie -
Microorganismos Fotosintticos:
Bacterias Verdes.
Tienen clorosomas para acumular la energa.
Bacterias Rojas Purpreas.
Acumula en la membrana citoplasmtica pigmentos para
acumular energa.
Las BV y BR: No producen CO2 Fotosntesis anoxignica
Solo 1 fotosistema
Tienen bacterioclorofilas:
BV: b, A, C, D, F.
BR: b, A, B.
El tipo de luz que necesitan determina el hbitat.
Carotenos (efecto protector contra ciertas .
fotosntesis cclica (no donador ext. de e-)
Slo se forma ATP (luz ATP)
FOTOFOSFORILACIN CICLICA
El NADPH surge de:
H2: dona los e- de NADP a NADPH
HS-: no lo dona directamente. La cadena de
e- va al revs.
-
TRANSPORTE INVERSO DE e
Viven en lagos, estanques y fuentes termales.
Cianobacterias.
Ficobiliproteina en cianobacterias (Ficociana da color azul).
Tienen tilacoides, Fotosistema I (fotosntesis oxignica) y II.
Tienen la Clorofila A.
Crecen en suelos (fertilizantes en suelos).
Azolla, Anabaena (bacteria): hace la fotosntesis y fija
nitrgeno atmosfrico (plantacin de arroz).
Hacen la misma fotosntesis que las plantas.
La luz: forma el grad de protones y dona e- (NADP NADPH)
Microorganismos Quimiolitotrofos:
Bacterias del Azufre.
HS- dona los e- a la Quinolona y se crea el grad en la
membrana forma ATP.
Para sintetizar NADPH Transporte inverso de e-
No es necesaria reaccin metablica.
Microorganismos Quimiohetertrofos:
Bacterias Aerobias.
Pseudomonas: Siempre respiran.
Hacen la ruta de E. Doudoroff.
Metabolizan gran cantidad de compuestos.
Proceso descontaminante: BIORREMEDIACIN
Proceso de lucha biolgica (siderforos:
acompleja todo el Fe para que el patgeno
no lo pueda utilizar).
Pseudomona syringae: patgenos
vegetales. Presentes en hojas y no actan si
no hay condiciones ambientales adversas
(fro, heladas, ). Produce clorosis.
F. Rizobiaceas: Rizobium:
Fija N atmosfrico (leguminosas).
La bacteria est en los ndulos radicales de
la raz: N2 NH3 vegetal
La planta es fuente de C y de E.
Se protege el O2 y se produce la
leghemoglobina, que lo sintetiza la planta
y se lo da a la bacteria para que atrape el
O2.
Relacin planta bacteria es especfica.
Ingeniera Gentica:
Agrobacterium: Tumefaciens:
Nos quedamos con las oparinas Produce tumores en el tallo.
(productor del tumor) que crea los
genes oncognicos y nos quedamos con
Rhizogenes:
su DNAt y en sta regin inyectamos lo Produce tumores en la raz.
que queremos cultivar.
Bacteria del Acumula cidos orgnicos.
cido Actico: gluconobacter: no es superoxidante.
acetobacter: es superoxidante (oxida el
HAc hasta CO2).
Sorbitol: la sorbosa produce el cido
ascrbico (proceso de BIOCONVERSIN)
G. Zimomonas: Produce la fermentacin alcohlica por
la ruta de E. Doudoroff.
En algunos sitios se una para fermentar en
lugar de usar levadura (pulque para
hacer tequila, sidra, cerveza, miel,).
Tambin produce la fermentacin de etanol.
G. Vibrio: Algunas especies estn asociadas a
enfermedades.
Vibrio cholerae en agua contaminada.
Vibrio parahemoliticus organismo
marino (en marisco).
Bacterias Anerobias.
Bacterias Bacilos no esporulados.
Entricas: Anaerobios y facultativos.
Grupo homogneo de bacterias.
Fermenta muchos azcares y forma gases.
Hay mezcla de muchos compuestos a la vez.
FERMENTACIN CIDO-MIXTA.
FERMENTACIN BUTANO-DILICA.
FERMENTACIN CIDO-MIXTA.
Se forma: cido actico, cido lctico, cido succinico, etanol, CO2 , H2.
Grupo Escherichia: Anaerobio facultativo.
Vive en el intestino grueso (si est en el i. delgado
produce enfermedades endricas (diarreas).
Nos proporciona Vitamina-K.
Se usa como grupo indicador de contaminacin.
Gnero Shigella: Fuertes alteraciones (toxinas muy fuertes).
Parecidas a E. coli.
Gnero Salmonella: Produce cepas patgenas.
Existen muchas variedades.
Clasificacin: S.K, S.O, S.H
Gnero Yersinia: Gram -, aerobios y anaerobios facultativos.
FERMENTACIN BUTANO-DILICA:
Se acumula y se produce butano-diol.
Enterobacter: Gram -, anaerobia facultativa.
Ifecciosas o descomponedoras.
Klebsiella:Gram -, anaerobia facultativa.
O2 H2O
NADH-oxidasa
GLUCOSA GLUCONATO-6-FOSFATO
CO2
RIBOSA-5-FOSFATO
PENTOSAS FOSFATO
LACTOBACILUS:
Bacilos.
Especies homofermentativas / heteroferment.
Asociadas a productos lcteos:
Delbrukii supbulgaris / acidofilus.
LEUCONOSTOC:
Son fermentativos.
Forman coco-bacilar..
leuconostoc mesenteroides:
Vegetales: pepinillos, .
Tolera alta [azcares].
STREPTOCOCUS:
Lactococos: en productos lcteos.
Enterococos: en flora intestinal.
Streptococos: producen enfermedades.
S. mutans (producen caries)
S. Neumoniae (causa neumonia)
S. thermophilus (en el yogur).
Gnero clostridium:
Anaerobios estrictos.
Metabolismo fermentativo.
Algunas sintentizan catalasa, pero poco.
Funciones industriales (fermentar alcohol)
Algunas fermentan la celulosa (mezcla con
combustible y etanol para biocombustible)
Algunas fermentan grasa, protenas
crnicas (c. cadaveris),
c. perfringens: intoxicacin alimentaria
c. botulinum: produce neurotoxina, vive
en el suelo y es mortal.
c. tetanii: vive en el suelo.
Alto contenido en G+C:
Bacterias del cido propinico:
Crece a partir del azcar y la leche.
Se aisl por primera vez del queso (emental suizo)
A PROPINICO
b. lacticus Propioni
CO2
bacterium
Bacterias Streptomyces:
Se clasifican segn las ramificaciones de las esporas.
Son filamentosas y del suelo.
Son productores de antibiticos.
Bifidobacterias:
Gnero bifidobacterium:
Produce cido lctico.
Viven en el tracto intestinal de los lactantes (bebs)
No se implanta en el intestino pero beneficia la flora.
Anaerobio.
Ruta fermentacin lctica al de bacterias lcticas.
Glucolisis.
El Ciclo de Kalvin.
REA DE CONTROL DE CALIDAD Y DE SEGURIDAD ALIMENTARIA