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animales.
Mara Paula Canchila V
Ingeniera Gentica
Biologa
Universidad de Sucre
Contenido.
Introduccin.
Definicin.
Transferencia de ADN a clulas animales.
Vectores de transferencia gnica.
Caractersticas del vector.
Transfeccin de clulas somticas animales.
Transgnesis.
Transgnesis por microinyeccin de zigotos.
Transgnesis por manipulacin de clulas embrionarias.
Transferencia gnica por microinyeccin.
Transferencia gnica con transposones.
Transferencia gnica mediada por semen.
Articulo
Problemas
Metodologa
Resultados y discusin
Conclusin.
Introduccin.
La clonacin es un proceso normal en la naturaleza de
organismos unicelulares, plantas, insectos e incluso seres
humanos.
Bondades potenciales:
Clonar tejidos y
rganos.
Introduccin.
Expresin gnica en tiempo y espacio
Dependen
Avance a la revolucin
Biotecnolgica y logros
en la clonacin.
Definicin.
La palabra clon proviene del griego klon y significa: brote,
vstago o retoo.
Microinyeccin directa.
Electroporacin.
Liposomas.
Vectores basados en virus.
Mediada por clulas germinales.
Muchos
Mas eficiente individuos.
Propagacin Menor costo.
masiva celular. Mas complejo.
Transgnesis.
Introduccin de ADN extrao en un genoma
Estable.
Hereditaria.
Afecte a todas las clulas. Cigoto + transgen
Siguientes
O transgnico. generaciones,
lnea germinal
Autorreplicarse e integrarse
aleatoriamente en nuevos
sitios dentro del genoma
Transferencia gnica mediada por
semen.
Introduccin de ADN forneo en gametos masculinos antes
del proceso de fertilizacin.
Actan de vectores de
su propio genoma
durante la fertilizacin.
Coinjeccin de
Cataratas o
ARNm de Cas9
distrofia muscular
ARNs a alelos
de Duchenne
(Crygc) mutantes
Seleccin de
colonias SSC o CRISPR -Cas9 para
SSC individuales terapia gnica.
Metodologa.
Construccin del sistema CRISPR/cas9
ARNg: Dirige
Cas9 a secuencia
a editar.
Emmanuelle Charpentier y Jennifer A. Doudna. Nature 2013.
Metodologa.
Derivacin de SSC EGFP-SSC y Crygc -/- SSC lneas.
Diferenciar las
espermatogonias Clulas
madres
germinales.
T: 37 C
Atmsfera de CO2 al 5% en
aire
Metodologa.
Electroporacin de SSC
PBS 8%
de FBS
Clulas haploides se
clasificaron con citometra de
flujo.
Espermtidas redondas se
inyectaron en los oocitos en Embriones de 2 clulas se
medio HEPESCZB (5 g / ml de transfirieron a los oviductos
citocalasina B). de las hembras.
Los fetos vivos nacieron el
Pipeta rompedora de da 19.5 de la gestacin.
Piezo.
Metodologa.
Secuenciacin de bisulfito
Observar
Mapeo de
metilaciones
metilaciones alelo-
adems de la
especficas en las
secuencia
islas CpG.
nucleotdica.
Regiones promotoras
de genes
Observacin del fenotipo de la catarata
Delecin de 1pb en
ambos alelos del
Crygc gen (Crygc -
Los datos de secuenciacin de alto rendimiento 4W-SSCs y Crygc -
/ - 8W-SSC)
revelaron un cariotipo normal de los SSC y un
marco de lectura abierto bien rescatado del gen
Crygc mediada no introduce variaciones
significativas en el nmero de copias.
Discusin.
Estudios muestran un gran potencial en el sistema
CRISPR-Cas9 a la terapia gnica.