Development and

validation of a simple high

performance liquid
chromatography
evaporative light scattering
detector method for direct
quantification of native
cyclodextrins in a
cyclization medium
Mayerlenis J. Rojasa, Thas C. Castralb, Raquel L.C.
Giordanoa,b, Paulo W. Tardiolia,b,
INTRODUCCIN
Oligosacaridos ciclicos y no reductores
Hidroflico como tambin ligeramente hidrofbico
Poseen propiedades de encapsulacin
Almidn licuado en una reaccin de ciclacin catalizada por la enzima
ciclodextrina glicosiltransferasa (CGTasa)
 Objetiv
o
Este estudio describe el desarrollo y la validacin
de un mtodo rpido, simple y cuantitativo HPLC-
ELSD para la determinacin directa de CD en una
mezcla de reaccin que no fue pretratada y por lo
tanto, contena todos los subproductos derivados
del almidn licuefaccin
Materiales y mtodos
Reactivos:

Dextrina DE 10

Almidn soluble
, , - CD
cido actico
Glucosa
Acetonitrilo
Agua
desionizada
Instrumentacin
HPLC ELSD
Tcnica de separacin Registra en continuo la
de mezclas de productos luz dispersada por las
partculas slidas
poco o nada voltiles.
residuales despus de la
evaporacin de la fase
mvil del eluyente de la
columna cromatogrfica.
Validacin del mtodo

Precisin y Robustez
Selectividad exactitud
Lmites de
deteccin y
Linealidad cuantificaci
n
Aplicacin del
mtodo
Se utiliz el mtodo validado para sintetizar CDs a partir
de almidn licuado proveniente de bagazo de yuca.

Para ello el bagazo de yuca fue gelatinizado a 85C.

Luego se hidroliz con amilasa alfa a 60C por 5 min.

El jarabe obtenido fu llevado a una reaccin de

ciclizacin por 6 horas a pH 6 y a temperatura controlada.
Aplicacin del
mtodo
Se extrajeron muestras en 0.25, 0.5, 1.0, 3.0 y 6.0h.

Se diluyeron las muestras 5 veces con fase mvil y se filtraron

mediante un filtro de jeringa PVDF.

Se analiz su concentracin con el mtodo HPLC-ELSD

Desarrollo de
mtodo
Luego de diversos ensayos con diferentes columnas
cromatogrficas se identificaron las propiedades necesarias que
deba tener la columna a utilizar en el experimento.

la columna NUCLEODUR C18 fu recomendada por el

proveedor por las siguientes cualidades:

esta columna se puede utilizar con eluyentes

Desarrollo de
mtodo
- (ELSD) fue seleccionado para lograr gran sensibilidad en
la deteccin de los CDs.

- Puede aplicarse para ensayos de analitos que carecen

de cromforos.

- La intensidad de la luz dispersada es una funcin del

dimetro de las partculas del analito, as como la
Desarrollo de
mtodo
Las condiciones del ELSD fueron previamente optimizadas.

la presin del gas nebulizador deba ser suficiente para

evitar la formacin de gotas del solvente que podran
provocar ruido o interferencia.

La temperatura deba ser suficiente para evaporar el

solvente, pero lo suficientemente baja para no evaporar la
RESULTADOS
cONCLUSIONES
Este trabajo reporta el desarrollo, validacin y aplicacin de un
nuevo mtodo de HPLC ELSD para la cuantificacin
simultnea directa de nativa alfa-CD, beta-CD y gamma-CD
presente en un medio de reaccin que contiene almidn,
dextrinas y glucosa, sin necesidad de tratamiento previo de las
muestras.
El mtodo fue demostrado para ser selectivos, precisos y
exactos para la determinacin de los tres CDs ms comunes,
que le permiti ser utilizada para seguir la formacin de CD en
un sistema real.
Se puede concluir que el nuevo mtodo de HPLC ELSD
graci
as