Estructura de la Cromatina

INTRODUCCION

El DNA es el principal reservorio de la informacin biolgica

El DNA es un polmero extremadamente largo. Las unidades
monomricas que constituyen el DNA son los desoxiribonucletidos.
Se necesita una gran cantidad de informacin para codificar para un
organismo, por ejemplo, 3 millones de bases para una simple bacteria
y 3,000 millones de bases para un ser humano.
Introduccin
EL DNA es la molcula de la herencia. Para que un organismo pueda sobrevivir es
esencial que la molcula de DNA pase a las clulas hijas con un mximo de
fidelidad, esto significa que , si se introducen mutaciones en el DNA, la viabilidad
de los descendientes no es segura.

De acuerdo al Dogma Central de la Biologa Molecular, la funcin del DNA es

almacenar la informacin y pasarla al RNA, mientras que la funcin del RNA es
leer, decodificar y usar la informacin recibida del DNA para hacer protenas.

ESTRUCTURA BSICA DEL DNA

Las purinas tienen 2 anillos. La pirimidinas tienen un anillo.

Las purinas : anillo de 6 miembros o mas anillo de 5 miembros
fusionados
La adenina tiene un grupo NH2 en el anillo de 6 miembros
La guanina tiene un grupo NH2 y carbonilo en el anillo de 6
miembros.
PIRIMIDINAS
Las pirimidinas: un anillo de 6 miembros con 2 nitrgenos en el .
La timina tiene 2 grupos carbonilos con un nitrgeno en el medio
La citosina tiene un doble enlace con nitrgenos flanqueando ambos
lados.
BASES
Nuclesido: la base nitrogenada + el azcar desoxiribosa
Nucletido: la bases nitrogenada + el azcar + el grupo fosfato
Nombres de los nucletidos: adenosina, timidina, citidina,
guanosina
NUCLESIDO
Modelo de la Estructura del ADN

En base a los datos bioqumicos de la frecuencia de ocurrencia de las

purinas y pirimidinas en el DNA y los datos obtenidos por difraccin
de rayos X, Watson y Crick propusieron en 1953 el modelo para la
estructura del DNA.
Caractersticas del ADN
Esqueleto azcar-fosfato: 3 y 5 son posiciones en el azcar ribosa.
Los grupos fosfatos se enlazan en el carbono 5, es decir, en el quinto carbono del
anillo de al ribosa, la cual se une a una base nitrogrenada en el primer carbono.
Los grupos fosfato se unen entre ellos enlazando el 5 fosfato de un azcar al
3OH del siguiente azcarenlace fosfodiester
Desoxiribosa indica la falta del grupo OH en la posicin 2.
Modelo de la Doble Hlice

Dos cadenas polinucleotdicas que corren en direcciones opuestas

(antiparalelas) y forman una hlice que gira hacia la derecha. La
cadena patrn va en la direccin 5--- 3 y la cadena que no es
patrn va en la direccin 3------ 5
Las bases de purina y pirimidina estn al interior mientras que el
esqueleto azcar-fosfato estn en la parte exterior.
Modelo de la doble hlice
El apareamiento de bases A-T tiene dos enlaces de hidrgeno
mientras que el apareamiento.
G-C tiene 3 enlaces de hidrgeno.
Tiene 10 pares de bases por vuelta.
20 nm de dimetro
Surco mayor y menor a lo largo de la superficie.
Fuerzas que estabilizan la doble hlice

Interacciones hidrofbicas, el esqueleto azcar-fosfato es hidroflico

en la parte externa de la cadena. Las bases son hidrofbicas en la
parte interior.
Interacciones de Apilamiento : fuerzas de Van der Waals ,
relativamente dbiles pero aditivas. Son causadas por la
sobreposicin de las bases planas.
Fuerzas
Enlaces de hidrgeno: no son las interacciones ms fuertes.
Contribuyen a las interacciones de apilamiento.
Interacciones electrostticas: Ocurren dentro de las cadenas y entre
las cadenas. Los grupos fosfatos tratan de alejarse uno del otro tanto
como sea posible.
DENATURACION DEL DNA

Es la separacin de las cadenas del DNA

Las regiones ricas en A-T se separan primero porque tienen dos
enlaces de hidrgeno
El pH y las temperaturas extremas tambin denaturan el DNA.
RENATURACIN
Es el reemsamblaje de las dos cadenas de DNA separadas. Para
renaturar el DNA , es indispensable bajar la temperatura.
Estructura de la Cromatina
Componente celular fcilmente observable en la preparaciones
comunes de microscopia ptica y electrnica.
Esto se debe a su gran concentracin espacial.
El ser humano tiene 46 cromosomas con alrededor de 6 x 109 pares
de bases.
Extendidos y alineados tendra aproximadamente 1,80 cm.
Cromatina
Esta cantidad de DNA esta acomodada en los ncleos.
Muchos de los ncleos miden alrededor de 0.01 mm (10 micras) de
dimetro.
Esto representa una compactacin de entre 5,000 y 10,000 veces.
Cromatina
Microfotografas electrnicas
Estructura de la Cromatina
El ciclo celular produce cambios sorprendentes en la estructura de los
cromosomas.
 CICLO CELULAR
La fase mittica (M) del ciclo celular se alterna con una
interfase muy larga.
La fase M incluye la mitosis y la citocinetisis. La interfase
constituye el 90% del ciclo celular.
Interfase
El material
cromosmico (ya
duplicado), la
cromatina, es amorfo y
aparece disperso en
ciertas partes del
ncleo
PROFASE
Los cromosomas estn
mucho ms
condensados
Prometafase
Metafase
Anafase
Telofase
Estructura de la Cromatina
La cromatina consiste de fibras que contienen protena y ADN en
cantidades aproximadamente iguales
La cromatina est asociada fuertemente con protenas llamadas
histonas.
Estas histonas empacan y ordenan el DNA en unidades estructurales
llamadas nucleosomas.
Estructura de la Cromatina
Tambin se encuentran en la cromatina protenas no histnicas, que
ayudan a mantener de la estructura del cromosoma y otras se regulan
la expresin de genes especficos.
A partir de los nucleosomas, el DNA de los cromosomas eucariticos
es empaquetado en una sucesin de estructuras de orden ms
elevado que al final dan el cromosoma compacto que se ve al
microscopio de luz.
HISTONAS
Se encuentran en la cromatina de todas las clulas eucariticas.
Tienen peso moleculares que estn entre 11,000 y 21,000 daltons.
Son muy ricas en los aminocidos arginina y lisina (aprox. 25%).
Todas las clulas eucariticas tienen cinco clases de histonas que
difieren en el peso molecular y la composicin de aminocidos.
HISTONAS

29 + 1
11 + 9
16 + 6
10 + 13
11 + 14
HISTONAS
Las histonas H3 y H4 son casi idnticas en la secuencia de
aminocidos en todos los eucariontes.
Sugiere una estricta conservacin de sus funciones.
Por ejemplo, solamente 2 de los 102 aminocidos difieren entre la
histona H4 de arveja y la vaca.
Slo 8 aminocidos difieren entre las histonas H4 de humanos de las
de levaduras.
HISTONAS
Las histonas H1, H2A y H2B tienen menos similitud de secuencia
entre las especies de eucariontes.
Cada tipo de histona tiene formas variantes, debido a que los
residuos laterales son modificados enzimticamente por:
Metilacin
HISTONAS
ADP-ribosilacin
Fosforilacin
Glicosilacin
Acetilacin
Esas modificaciones afectan;
La carga elctrica neta
La forma y otras propiedades las histonas; as como tambin las
propiedades estructurales de la cromatina ya que juegan un rol en la
regulacin de la transcripcin.
HISTONAS
Cromosomas
Componentes DNA asociado a proteinas
Cromatina
Dos tipos de protenas
Histonas
Pequeas, bsicas, bien caracterizadas
Protenas cromosmicas no-histnicas
Muy numerosas
Diversas
Estructurales, enzimticas, reguladoras
La mayora no est bien caracterizada.
Estructura de la Cromatina
Cada cromosoma contiene una hebra continua de DNA.
Del contenido total de ADN en el ncleo de humanos es
aproximadamente 2 metros.
Este ADN tiene que ser compactado en un ncleo de tpico de 5 a 10
um.
El Nucleosoma
A mediados de la dcada de los 70 las observaciones de la cromatina
con el microscopio electrnico revelaron que la fibras de cromatina
estn compuestas por partculas esfricas (cuerpos nu) dispuestas
linealmente.
Las partculas estn dispuestas en el eje de la cromatina de manera
regular parecen las cuentas de un collar
Forma una fibra de 10 nm de dimetro.
El Nucleosoma
La digestin de la cromatina con determinadas nucleasas, como la nucleasa de
micrococo, produce fragmentos de DNA de aproximadamente 200 pares de bases
o de mltiplos de esta longitud.
Esto demuestra que la digestin enzimtica no es aleatoria.
Por lo tanto la cromatina est formada por un tipo de unidad repetida, protegida
del corte enzimtico excepto en el sitio donde se unen dos de estas unidades.
Este sitio entre 2 unidades es donde corta la enzima.
Digestin de la fibra de 10 nm con Nucleasa
 Nucleosoma
Es el nivel ms bajo de organizacin del
cromosoma. 200 pb de ADN
Contiene una partcula ncleo del nucleosoma con
146 pares de bases de ADN superenrrollado
Un ncleo con 8 histonas
Ncleo de histonas
Dos copias de H2A, H2B, H3 y H4 (Octmero)
La histona H1 est fuera del ncleo
Se ubica en el DNA conector
Conecta un partcula nucleo del nucleosoma a la
siguiente.
COMPOSICIN DEL NUCLEOSOMA
Las histonas son protenas muy conservadas comparten un motivo
estructural llamado Pliegue de histonas que incluye 3 helices
conectadas por 2 asas y una cola N-terminal
Organizacin del Octmero
de Histonas

El octmero de histonas tiene un ncleo

estructural de un tetrmero H32 H42
asociado con dos dmeros H2A H2B
Cada histona est interdigitada con su pareja.
Todas las histonas centrales tienen el motivo
estructural de pliegue de histona.
Las colas N-terminal de las histonas se
extienden fuera del nucleosoma.
Las variantes de histonas producen nucleosomas
alternativos
Todas las histonas excepto H4, son miembros de familias de
variantes relacionadas
.Pueden ser muy parecidas o muy divergentes
Las distintas variantes tienen diferente funcin en la clula
Las colas N-terminal sobresalen del ncleo
Niveles ms elevados de la organizacin
Cromosmica
En su estado ms extendido visto con microscopio electrnico, la cromatina tiene
unos 10 nm de dimetro.
Se cree que la fibra de cromatina consiste de una larga sucesin de nucleosomas.
La fibra de cromatina de 10 nm se dobla, en una fibra ms gruesa, llamada
solenoide, que tiene 30 nm de dimetro y 6 nucleosomas/vuelta.
Est formada por nucleosomas enrollados.
La histona H1 promueve la formacin de la fibra de 30 nm.
La fibra solenoide de 30 nm
Plagamiento de la fibra solenoide
La fibra de 30 nm se organiza formando grandes asas (loops)
superenrrolladas o dominios.
Las asas comienzan y terminan con secuencias ricas en AT.
Variedad de protenas no histnicas
Matriz proteica
Andamiaje (SAR) regiones de unin al andamio (Scaffold attachment
regions).
 Los octmeros de histonas se desplazan y vuelven a
ensamblarse durante la transcripcin

. Casi todos los genes

transcritos retienen una
estructura nucleosomal.
. Las RNA polimerasas
desplazan octmeros de
histonas durante la
transcripcin.
. Los octmeros se asocian
al ADN tan pronto como ha
pasado la polimerasa.
. Los nucleosomas son
reorganizados cuando la
transcripcin pasa por el
gen.
Se necesitan factores
auxiliares.
Posicionamiento de Nucleosomas

Zonas libres de nucleosomas

La hipersensibilidad a la DNasa es otra seal de una regin de ADN
libre de nucleosomas
Los genes activos tienden a tener regiones de control hipersensibles a
la DNasa
- La cromatina hipersensible a la DNasa cambian la estructura de la cromatina y permite el acceso de
protenas especficas que se unen al ADN (factores de transcripcin y polimerasas).
- Los factores de transcripcin desplazan a los octmeros de histonas
Remodelado de la Cromatina

El genoma celular esta organizado como nucleosomas. La transcripcin se evita si la regin tienen
nucleosomas
Las histonas funcionan como represores de la transcripcin
L activacin de un gen requiere cambios en el estado de la cromatina para que el aparato de
transcripcin tenga acceso al ADN promotor.
El proceso de induccin de cambios en la estructura de la cromatina se llama Remodelado de la
Cromatina.
Consiste de mecanismos que dependen de energa para mover o desplazar histonas
El remodelado de la cromatina
es realizado por:
Complejos remodeladores de
cromatina dependientes de ATP.

Usan la hidrlisis del ATP para

proporcionar energa para el
remodelado.

La subunidad mas importante

del complejo es la ATPasa
 Cambios que pueden realizar los complejos
remodeladores de la cromatina dependientes de ATP

Deslizan los octmeros de histona

a lo largo del ADN. Altera la
posicin de una secuencia
particular en la superficie
nucleosomal
Cambian el espaciamiento entre
octmeros
Desplazan uno o varios octmeros
para generar una brecha libre de
nucleosoma.
Los complejos remodeladores se clasifican de acuerdo
con la subfamilia de ATPasa que contienen como su
subunidad cataltica
Los complejos remodeladores
son reclutados por protenas
activadoras o a veces por
represoras
Los complejos SW1/SWF
activan la transcripcin
Algunos complejos ISWI actan
como represores
Usan su actividad remodeladora
para deslizar nucleosomas sobre
regiones promotoras para
prevenir la transcripcin
 Las histonas son modificadas por acetilacin,
metilacin, fosforilacin, y otras
modificaciones.
Las combinaciones de modificaciones de las
histonas especficas definen la funcin de las
regiones locales de la cromatina;
Se conoce como el cdigo de histonas.
 La acetilacin de histonas se produce
transitoriamente en replicacin.
La acetilacin de histonas est asociada con
la activacin de la expresin gnica.
La cromatina desacetilada puede tener una
estructura ms condensada.
 Los activadores de la transcripcin estn asociados con actividades de
histona acetiltransferasa (HAT) en complejos grandes.
HAT varan en su especificidad de blanco.
La desacetilacin se asocia con la represin de la actividad del gen
Como se activa un
promotor?

Unin de un activador especfico

para secuencia

Reclutamiento y accin de un
complejo remodelador

Reclutamiento y accin de un
complejo acetilador.
Eucromatina

Una forma ms suelta de la cromatina

Rica en genes
En los brazos de los cromosomas
Asociada con la transcripcin activa.
Heterocromatina

Una forma muy condensada de la cromatina

En los centrmeros y telmeros
Tiene secuencias repetitivas
Pobre en genes
Asociada con transcripcin reprimida