Cintica Enzimtica

Prof. Dr. Henning Ulrich

Influncia do Substrato
Concentrao de substrato [S]: afeta a
velocidade da reao;

Efeito de [S]: varia durante o curso de uma

reao S P;

Velocidade inicial (V0): [S] >> [E] tempo

muito curto [S] = constante.
Influncia do Substrato

[E] = cte

[S] = V0 linear

[S] = V0

V0 = Vmx
Influncia do Substrato
Alguns casos a V0 no pode ser medida
No existe tcnica experimental;
Equao qumica no representa a
transformao;

Velocidade da reao:
Velocidade mdia de consumo ou produo;
Variao de uma propriedade no sistema.
 Influncia do Substrato
Vitor Henri (1903): E liga-se ao S para formar
ES passo obrigatrio;

Leonor Michaelis e Maud Menten (1913)

E combina-se reversivelmente com S ES
k1
E+S ES
k-1
ES se rompe E e P
k2
ES E+P
Influncia do Substrato
Qualquer instante da reao: E e ES;

[S] = velocidade da reao [S];

Vmx = todas as molculas de E estiverem na

forma ES enzima saturada;

[S]: estado pr-estacionrio ES;

Estado estacionrio [ES] = cte;
V0 estado estacionrio.
 Equao Michaelis-Menten

Curva: possui a
mesma forma para a
maioria das enzimas;

Expressa pela
Equao de
Michaelis e Menten;

Hiptese: limitante quebra de ES E + P.

Equao Michaelis-Menten
Equao da velocidade para uma reao
catalisada enzimaticamente e com um nico
substrato;

Relao quantitativa entre a V0, a Vmx e a

[S] inicial relacionadas atravs de Km.

Vmx S
V0
Km S
 Equao Michaelis-Menten

Relao numrica:
V0 metade de Vmx;

1
V0 Vmx
2
km = afinidade pelo
substrato;
Km afinidade
Vmx proporcional [E].
Significado de Km e Vmx
Equao Michaelis e Menten = dependncia
hiperblica;

Mecanismos de reao diferentes

catalisam reaes com 6 ou 8 passos;

Significado e magnitude de Vmx e Km varia;

Km: depende de aspectos especficos do

mecanismo de reao.
Significado de Km e Vmx
k 2 k 1
Km
k1

K2 << K-1 afinidade da enzima;

K2 >> K-1;
K2 e K-1 so comparveis a Km funo
complexa;
Vmx: nmero de passos da reao e
identidade dos passos limitantes.
Significado de Km e Vmx
K1 K2 K3
E+S K-1
ES K-2
EP E+P

Enzima na saturao: EP e Vmx = k3.[Et];

Kcat = velocidade limitante de qualquer

reao enzimas saturadas;

Kcat e Km = ambiente celular, concentrao do

substrato e qumica da reao.
Complexo enzima-substrato: ES
v (formao) = k1 [S] [E] { v (degradao) = k-1[ES] + k2 [ES] = (k-1 + k2) [ES]

Estado estacionrio (steady state): [ES] = constante

v de formao = v de degradao ou: k1 [S] [E] = (k-1 + k2) [ES]

[S] [E] / [ES] = (k-1 + k2) / k1 { (k-1 + k2) / k1 = Km

Constante de Michaelis
[ES] = [S] [E] / Km { [E] = [ET] [ES] { [ES] = ([ET] [ES]) [S] / Km
[ES] = [ET] [S] / Km [ES] [S] / Km {[ES] + [ES] [S] / Km = [ET] [S] / Km

([ES] Km + [ES] [S]) / Km = [ET] [S] / Km { [ES] (Km + [S]) / Km = [ET] [S] / Km

[ES] = [ET] [S] / Km + [S]

 [ES] = [ET] ( [S] / Km + [S] )

[ES] = v / k2 [ET] = Vmax / k2

v / k2 = Vmax / k2 ( [S] / Km + [S] )

 Varivel independente:
Constante*: concentrao do substrato.
velocidade
Varivel dependente: mxima
velocidade de reao,
funo de [S].

Constante de Michaelis:
KD aparente de ES.

* Constante: Vmax funo de [E]total

 Parmetros Cinticos
Exemplo:

[S] (g/L) Vo (g/L.h)

0,25 0,78
0,51 1,25
1,03 1,66
2,52 2,19
4,33 2,35
7,25 2,57
 Parmetros Cinticos
Exemplo: Lineweaver-Burk

1 K 1 1
m
V0 Vmx S Vmx
1 1
0,228 0,3668
V0 S
Portanto,
1 g
0,3668 Vmx 2,73
Vmx Lh
Km g
0,228 K m 0,622
Vmx L
Inibidores Competitivos
Forma estrutural = substrato
competio;

Porcentual de inibio concentraes

e afinidade pela enzima.
 Inibidores Competitivos
[S] Vmx =
Km

Experimento
1 [E], [S] = cte
2 [E], [I] = cte

1/V0 x 1/[S]
 Inibidores Competitivos
Equao de
Michaelis e Menten
V Vmx
S
Km 1 I S
K I

Lineweaver-Burk
K m 1 I
1 1 KI 1

V Vmx Vmx S
 Inibidores Competitivos
Relao entre as velocidades com e
sem inibidor

V0 Km
1 I
VI K I K m S

[S] = influncia
do [I] desprezvel.
Inibidores No-Competitivos

Ocupa outro stio

ES, EI e EIS;

[S] = no leva
todas as E
produtiva;

Vmx e Km normal.
Inibidores No-Competitivos
Equao da
velocidade:
V Vmx
S

K m 1
I S 1 I
K
KI I

Lineweaver-Burk
1 Km


1
I 1 1
1
I

V Vmx K I S Vmx KI
 Inibidores Incompetitivos
Bloqueio de ES;

2 stios ativos I
se fixa no complexo
ES;

ESI = no forma P;

Vmx e Km
Inibidores Incompetitivos
Equao da velocidade:
Vmx
S
1 I
KI
V
Km
S
1 I
KI

1 Km 1

1
1
I

Lineweaver-Burke:
V Vmx S Vmx KI
Inibidores Incompetitivos
Inibidores Irreversveis

Combinam-se com um grupo funcional

destruio;

Unio covalente inibidor e enzima.

Vmx e Km =
 Inibidores Irreversveis

Equao de
Michaelis e Menten:

VI Vmx k 3 [ EI ]
S
Km S
Inibidores Irreversveis
1 1 Km 1
Lineweaver-Burk:
VI Vmx K 3 EI Vmx K 3 EI S
Influncia do pH
Valor de pH timo = atividade mxima;

Velocidade da reao: pH afasta do timo;

Influncia do pH: anlise dos grupos

dissociveis;

cidos (Brnsted): compostos capazes de

dissociar-se, liberando H+.
 Influncia do pH
HA A + H+
pH HA A

Aminocidos:
CH 2 COOH CH 2 COO H a
CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 NH 3 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 NH 2 H b
pH -COO- captam prtons = -COOH;
pH -NH3+ so dissociados = NH2;
Ligao eletrosttica = -COO- -- NH3+.
Influncia do pH

pH timo depende do nmero e tipo de grupos

ionizveis estrutura primria;

Variaes do pH afeta substrato com grupos

ionizveis;

Estabilidade da enzima: temperatura, fora

inica, concentrao de substratos ou cofatores
da enzima e concentrao da enzima, entre
outros.
Influncia do pH

pH 5 e 8 = no afeta a
atividade;

Declnio entre pH 6,8-8

e 6,8-5 = forma inica no
adequada;

5 > pH > 8 = inativao

irreversvel.
Influncia da Temperatura
T velocidade de reao = energia
cintica;

T muito elevadas = desnaturao da

enzima
Rompidas as pontes de hidrognio
alteraes estruturas = nova conformao;
T desnaturao pouco acima da T tima.
 Influncia da Temperatura
Enzimas PM 1 cadeia polipeptdica e
pontes dissulfeto = estveis ao calor;

Efeito da T = pH, fora inica e a presena

ou ausncia de ligantes;

Substratos protegem a enzima da

desnaturao.
 Influncia da Temperatura
K funo da T Lei de Arrhenius

k k0 e RT
 Influncia da Temperatura
Enzimas so termolbeis reao
enzimtica = inativao trmina

k k e
' '
0
RT

Efeito da T na velocidade das reaes

coeficiente de temperatura
Velocidade quando a T 10C.
2,3 R T2 T1 log Q10
Ea
10
 Regulao da Atividade
Sistema enzimtico: produto da reao da 1
enzima substrato da enzima subseqente;

Enzimas reguladoras determina a

velocidade da seqncia;
Atividade cataltica ou sinais;

Molculas sinalizadoras pequenos

metablitos ou cofatores.
 Enzimas Alostricas
Ligao no-covalente e reversvel
modulador;

Inibio por retroalimentao

Enzima reguladora inibida pelo P final da
via reequilibra as necessidades celulares;

Moduladores: inibidores ou estimuladores.

 Enzimas Alostricas
Modulador = substrato homotrpicas;
Modulador substrato heterotrpicas;

Stio alostrico especfico para o

modulador;

Curva de saturao sigmide

subunidades mltiplas.
 Enzimas Alostricas
curvas de variao de atividade
moduladores inibidores, ativadores ou os dois
tipos.
Modificao Covalente
Ligao covalente de um grupo qumico
sua estrutura;

Metabolismo alterado aciona vias

inativas e inibem vias ativas.