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AUTNOMA DE MXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES
ZARAGOZA
Formulacin
del Medio
ALUMNOS:
Agua
Oxigeno
(si es
Energa
aerbic
o)
Los
m.o.
requier
Vitamin en
as Carbono
Element
os Nitrge
mineral no
es
Un medio de cultivo a grande escala, debe utilizar fuentes
de nutrientes baratos y presentar los siguientes criterios:
Crecimiento
Formacin de productos
Suministrar energa para la sntesis de
metabolitos
Mantenimiento celular.
Macronutrientes, (g/L)
C, N, S, P, K y Mg
Factores de crecimiento
vitaminas, algunos aminocidos, cidos grasos no saturados,
etc.
Formulacin del Medio
Fuente de
Fuente Otros
Carbono y
energa de requerimient
Nitrge os
no
Element
os traza:
Factores de Fe, Zn,
crecimiento Cu, Mn,
ELEMENTO Co, Mo,
S B
NECESARI
OS
Agua Oxigeno
Principles of Fermentation Technology. P.F. Stanbury and A. Whitaker. Pergamon Press, 1989
Componentes elementales en BACTERIAS,
LEVADURAS, HONGOS
Elemento Bacterias Levaduras Hongos
Principles of Fermentation Technology. P.F. Stanbury and A. Whitaker. Pergamon Press, 1989
Funcin de los componentes de algunos medios de
cultivo
Agua
Es el mayor componente en los medios de
fermentacin
Methanobacterium sp
Fuentes de carbono
Es comn en la prctica el uso de
carbohidratos como la fuente de carbono en
los procesos de fermentacin.
La influencia de la fuente de
carbono en los productos de
formacin
Sales de
amonio
Nitratos
Gas
amonio
Fuentes orgnicas
Aminocido
s
Protena
Urea
Factores que influyen en la eleccin
de las fuentes de Nitrgeno
Existen En mezclas de
mecanismos de fuentes de
control para la nitrgeno, los
nitrato reductasa, componentes
la cual se involucra individuales de
en la conversin de nitrgeno pueden
nitrato a ion influir en la
amonio regulacin del
metabolismo
Fermentaci
n
Mejores Fuentes de Nitrgeno para algunos Metabolitos Secundarios
Fosforo Cobalto
Potasio Cobre
Azufre Hierro
Calcio Manganeso
Cloro Molibdeno
Zinc
Intervalo tpico de concentracin
de componentes minerales
Componente Intervalo (g/dm 3
KH2PO4 1.0-4.0
MgSO47H2O 0.25-3.0
KCl 0.5-12.0
CaCO3 5.0-17.0
FeSO44H2O 0.01-0.1
ZnSO48H2O 0.1-1.0
MnSO4H2O 0.01-0.1
CuSO45H2O 0.003-0.01
Na2MoO42H2O 0.01-0.1
Vitaminas
Fuentes de carbono y nitrgeno
Vitamina pura
Reciclaje de nutrientes
Soluciones
Amortiguadoras
Compuesto especfico para
actuar como solucin
amortiguadora pH 7.0
Controlado por hidrxido de
sodio o amonio
Precursores
Ayuda a El precursor
Mejoramiento
regular la formara parte
en el
produccin de de la
rendimiento Licor de maz.
los estructura de
de la
microorganis producto
penicilina.
mos. obtenido.
Inhibidores
Es
eficaz
para
aument
ar el
rendimi
ento del Aument
product a la
o permea
desead bilidad
o. de la
pared
Producc celular.
in de
glicerol.
Producto Inhibidor Principal efecto Microorganismo
Normalmente es el sustrato
o un compuesto
estructuralmente
relacionado.
Los carbohidratos
disminuyen el proceso
catablico.
Requerimientos de oxigeno
El oxgeno es un requerimiento
esencial en la produccin de
metabolitos y su control influye
mucho en la tasa de crecimiento
de microorganismos.
El medio puede influir en la
disponibilidad de oxgeno de las
siguientes maneras:
Metabolismo rpido
Reologa
Antiespumantes
Metabolismo Rpido
Nmero de
Masa celular o
microorganis
biomasa
mos
Determinacin de la masa celular o biomasa
Peso seco
Directos
Peso hmedo
Determinacin de
nitrgeno total
Indirectos
Actividad metablica
Toledo R. Daniel. Determinacin del valor nutritivo y funcional de tres clones de Araz y seis de Boroj y
evaluacin para el proceso de obtencin de pulpas pasteurizadas y congeladas. [tesis Ingeniero Agroindustrial].
Ecuador, Escuela Politcnica Nacional, 2010.
Determinacin del nmero de
microorganismos
Cmara de
Neubauer
Cuenta total
microscpica
Cmara de Petrof
Directos
Vaciado en placa
Indirectos Turbidimetra
Nefelometra
Determinacin de azcares
reductores
Se basa en la reduccin de 3,5-
dinitrosaliclico a cido 3-amino-
5-nitrosaliclico por el grupo
carbonilo libre de los azcares
reductores.
Lectura 540 nm
Toledo R. Daniel. Determinacin del valor nutritivo y funcional de tres clones de Araz y seis de
Boroj y evaluacin para el proceso de obtencin de pulpas pasteurizadas y congeladas. [tesis
Ingeniero Agroindustrial]. Ecuador, Escuela Politcnica Nacional, 2010.
Densidad ptica (dispersin
de la luz)
Utilizadas para monitorear el
crecimiento de los cultivos bacterianos
Pueden llevar a resultados errneos.
Dan informacin sobre el peso seco
(contenido macromolecular).
La dispersin de la luz se puedemedir
por turbidimetra o por nefelometra.
Mancorda A, Cuadros D, lvarez A. Manual prctico de microbiologa ambiental 1. 2 ed. Buenos Aires:
Universidad Nacional del Comahue: 2007.
Turbidimetra
Mide la reduccin de la transmisin de luz
debido a partculas de una suspensin y
cuantifica la luz residual transmitida.
Se mide en un espectofotmetro UV/Vis.
El cambio de luz se mide en %T
Tambin se determina como Absorbancia
(densidad ptica), utilizada para graficar el
crecimiento bacteriano.
Tortora GJ, Funke GR, Case Cl. Introduccin a la Microbiologa. 9 ed. Buenos Aires: Mdica
Panamericana; 2007.
Peso seco
Ventajas:
Se puede conocer el
nmero de MO
dividiendo el peso del
cultivo/ peso seco de la
clula individual.
Desventajas:
Se necesita un mnimo
de 25 mL de cultivo
relativamente denso.
Los componentes
voltiles de la muestra
pueden perderse.
La muestra puede
Procedimiento
105
Peso hmedo
METODOLOGA
MEDIOS DE CULTIVO
MEDIO SEMILLA MEDIO DE PRODUCCIN
Glucosa Glucosa
40g 40 g
Fosfato dibsico de potasio Fosfato dibsico de potasio 10
10 g g
Fosfato monobsico de Fosfato monobsico de
potasio
potasio
10 g
10 g
Fuente de nitrgeno* 10 g
Peptona de casena Agua de la llave
10 g 1L
Sulfato de amonio Ajuste el pH a 5.5
15g *Fuente de Nitrgeno
Agua de la llave 1. Sulfato de amonio
2. Extracto de malta
1L
3. Extracto de levadura
Ajuste el pH a 5.5 4. Peptona de casena
5. Urea
6. Nitrato de sodio
PROPAGACIN
Incubar en
Inocular matraz
Tomar asadas de agitacin de 200
con medio
Candida utilis r.p.m a 28C por
semilla
24 hs.
Preparar 100 mL
Incubar con Inocular con 1
de medio de
agitacin de 200 mL de cultivo
produccin para
r.p.m. y 28C con medio
cada fuente de
durante 96 hs. semilla
nitrgeno
Tomar muestra
de 10 mL con Colocar en tubos
pipetas estriles con tapa de
Agitar el matraz a las 0, 24, 48, rosca y
72, 96 hs de guardarlas en
incubacin congelacin
DETERMINACIN DE DENSIDAD
PTICA Y PESO SECO
Separar
Tomar 5 mL de sobrenadante y
Colocar en tubo Centrifugar 5
cultivo de cada guardar para
de ensayo min a 3000 r.p.m.
muestra DNS
Transferir la Determinar
Centrifugar suspensin a densidad ptica a Agregar 5 mL de
mismas tubo de ensaye 540 nm con solucin salina
condiciones llevado a peso blanco de agua para resuspender
cte destilada
Retirar sobrenadante
Llevar mezcla a
Agregar 8 mL de Inmediatamente bao de agua a
agua destilada poner en agua fra ebullicin durante
5 min.
Determinar
Realizar lo mismo
densidad ptica a
para cada
575 nm con agua
solucin de la
destilada como
curva de glucosa
blanco
Curva estndar de DNS
Solucin estndar de glucosa 1 g/L
1 0.0 1.0 0
2 0.2 0.8 200
3 0.4 0.6 400
4 0.6 0.4 600
5 0.8 0.2 800
6 1,.0 0.0 1000
Referencias
Principles of Fermentation Technology. P.F. Stanbury and A.
Whitaker. Pergamon Press, 1989
Toledo R. Daniel. Determinacin del valor nutritivo y
funcional de tres clones de Araz y seis de Boroj y
evaluacin para el proceso de obtencin de pulpas
pasteurizadas y congeladas. [tesis Ingeniero Agroindustrial].
Ecuador, Escuela Politcnica Nacional, 2010.
Mancorda A, Cuadros D, lvarez A. Manual prctico de
microbiologa ambiental 1. 2 ed. Buenos Aires: Universidad
Nacional del Comahue: 2007.
Tortora GJ, Funke GR, Case Cl. Introduccin a la
Microbiologa. 9 ed. Buenos Aires: Mdica Panamericana;
2007.