Presentacin de resultados

Separacin de protenas por cromatografa de exclusin molecular

Determinacin de concentracin de protenas por Mtodo de Bradford
Separacin electrofortica de protenas en geles de poliacrilamida

Integrantes: Vernica Ulloa

Romina Moris

Fecha: 10-Abril-2017
Introduccin
La cromatografa de exclusin molecular es un mtodo de separacin
molculas segn tamao de la partcula. La fase estacionaria es un gel
poroso en el que las molculas ms pequeas son retenidas, mientras las
ms grandes eluyen con facilidad.

La cuantificacin de protenas mediante mtodo de Bradford consiste en la

medicin de la absorbancia a 595 nm de una muestra de protenas con
colorante coomassie brilliant blue G-250, que se torna azul al interactuar con
los aminocidos bsicos de la protena.

La electroforesis en gel de poliacrilamida en condiciones denaturantes se basa

en la migracin de las protenas a travs del gel debido a un potencial
elctrico. Cuanto migren depende de su peso molecular
Mtodos
Resultados y discusin

Los picos de absorbancia a 280 nm indican presencia de protena, mientras

el pico de absorbancia a 550 nm indica presencia de citocromo c
La elucin temprana del citocromo c sugiere que la cromatografa no se
desarroll de la forma esperada.
Concentraciones de las
fracciones con picos de
absorbancia a 280 nm segn
el mtodo de Bradford:

Fraccin 9: 1,98 ug/uL

Fraccin 14: 0,63 ug/uL

No se detect protena en las

fracciones 16 y 18 segn este
mtodo
La fraccin 9 presenta las tres protenas analizadas en el prctico, albmina de
suero bovino, fosfatasa cida de germen de trigo y citocromo c; mientras la
fraccin 14 solo presenta albmina de suero bovino.
Los pesos moleculares calculados segn la curva de calibracin con marcador de
peso molecular PageRuler Prestained protein ladder son:
BSA: 68,3 KDa; Fosfatasa: 56 KDa; Citocromo c: 12,9 KDa
 Interferencias en mtodos de cromatografa de exclusin molecular y mtodo
de Bradford. Baja sensibilidad a contaminantes de bajo peso molecular.

Interaccin de BSA con gel Sephadex G-100.

Estimacin de determinacin de concentracin de BSA a travs de densidad

de bandas de gel de poliacrilamida 12% 7,52 ug.
18
16
f(x) = 0.78x + 11.77
14
R = 0.98
12
10
ppp 8
6
4
2
0
0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 5.5

ug

Curva de calibracin para concentracin de BSA Teijn, J. Bioqumica estructural. (2004)

Conclusin
Se concluye que las protenas no fueron separadas en la cromatografa de
exclusin molecular.

Se propone que esto ocurri por una asociacin entre las protenas presentes
en la mezcla (BSA, fosfatasa y citocromo C).

Para verificarlo se podra desarrollar nuevamente el prctico agregando sales al

eluyente que aumenten su fuerza inica
Referencias
Fernndez, R. Hidrlisis enzimtica de seroalbmina bovina. Produccin de
pptidos bioactivos. 2015. Mbta. Universidad de Oviedo. pp: 23-26.

Teijn, J. Bioqumica estructural. 2004. Editorial Tebar. pp: 84,85.

Antonov, Y; Wolf, B. Calorimetric and structural investigation of the interaction

between Bovine Serum Albumin and High molecular weight Dextran in water.
2005. Biomacromolecules. pp: 2980-2989