PRACTICA N 04

METODOS PTICOS PARA EL

DIAGNSTICO DE LAS ENFERMEDADES
INFECCIOSAS

I. EXAMEN DE MICROORGANISMOS
VIVOS
II. EXAMENES DEFINITIVOS,
COLOREADOS O POST MORTEN
 EXAMENES DE
MICROORGANISMOS VIVOS.

A. EXAMENES EN FRESCO
- Preparado hmedo
- Gota pendiente
- Tinta china
B. COLORACIONES VITALES
 PREPARADO HMEDO

PROCEDIMIENTO :
a) Colocar una gota de la muestra en la
lmina portaobjetos, inmediatamente
cubrir con laminilla.
b) Observar al microscopio a 1000 X,
colocando una gota de aceite de
inmersin sobre la laminilla.

Resultado: MOVILIDAD Y MORFOLOGA

PREPARADO HMEDO
PREPARADO HUMEDO
 Gota pendiente
PROCEDIMIENTO:
Colocar una gota de material en la
laminilla y hacer coincidir la gota con la
excavacin de la lmina.
Observar al microscopio a 1000x,
colocando una gota de aceite de
inmersin sobre la laminilla
Resultados : MOVILIDAD Y MORFOLOGIA.
MICROSCOPIA DE CAMPO OSCURO Y
FLUORESCENCIA: ESPIROQUETAS BK
 Tinta China o tincin
Negativa
PROCEDIMIENTO:
Colocar una gota de la muestra y otra de tinta
china en la lmina, homogenizar y cubrir con
laminilla.
Agregar una gota de aceite de inmersin sobre la
laminilla y observar a 1000 X aumento.
Resultado: Observar CAPSULA
REFRINGENTE.

B. COLORACIONES VITALES
 Tinta china: cpsula de
Criptococcus neoformans
 EXAMENES DEFINITIVOS
COLEREADOS A POST
MORTEN
A. COLORACIONES SIMPLES:
- Coloracin con azul de metileno.
B. COLORACIONES DIFERENCIALES:
- Gram
- Ziehl neelsen o cido alcohol resistente (AAR).
C. COLORACIONES ESTRUCTURALES
ESPECIALES:
- Vago
- Esporas
- Flagelo
- Cpsula
- Corpsculos metacromticos
COLORACIONES ESPECIALES:
Esporas M. electrnica
 PASOS DE UNA
COLORACIN

1. Extensin o frotis
2. Secado al medio ambiente
3. Fijacin
4. Coloracin
5. Lavado con agua corriente
6. Secado
7. Observacin microscpica
 A. COLORACIN SIMPLE

Utilizan un solo colorante.

Delinean la morfologa bacteriana.

PROCEDIMIENTO
1. Preparar el frotis.
2. Dejar secar al medio ambiente.
3. Fijar al calor.
4. Colorear con azul de metileno o safranina 2-5.
5. Lavar con agua corriente.
6. Secar.
7. Agregar una gota de aceite de inmersin y observar al
microscopio.
TINCION: AZUL DE
METILENO
 B. COLORACIONES
DIFERENCIALES
Utiliza ms de un colorante, mordiente y diferenciador.

COLORACIN GRAM
- Permite dividir a las bacterias en 2 grupos : Gram
positivos y negativos
- Morfologa
- Cultivos jvenes o muestras recientes.

PROCEDIMIENTO
1. Extendido o frotis
2. Secado al medio ambiente
3. Fijado al calor
 Procedimiento:
4.Coloreado :
- Cristal violeta 1
- Lavar con agua
- Agregar lugol 1
- Lavar con agua
- Cubrir con alcohol acetona 1
- Lavar con agua
- Recolorear con Sarfranina 1
5. Lavar
6. Secar
7. Observar al microscopio a 1000X, previamente se agrega
1 gota de aceite de inmersin.
 Coloracin GRAM
below:

-
GRAM NEGATIVOS Y
GRAM POSITIVOS
COCOS GRAM
NEGATIVOS
 COCOS GRAM
POSITIVOS EN CADENA
 BACILOS GRAM
POSITIVOS
.
 COLORACION ZIEHL
NEELSEN.
Diferencia a 2 grupos de bacterias. cido alcohol
resistentes y los no AAR.
Morfologa
Lminas nuevas, colorantes filtrados. Esputo u otros.

PROCEDIMIENTO :
1. Extendido del esputo u otra muestra.
2. Secado al medio ambiente.
3. Fijado al calor
4. Coloracin
- Cubrir con fucsina fenicada, calentar hasta emisin de
3 vapores, por 5 minutos.
 Procedimiento:
- Lavar con agua
- Cubrir con decolorante alcohol cido por 1 minuto.
- Lavar con agua
- Recolorear con azul de metileno por 1-2 minutos.

5. Lavar con agua.

6. Secar.
7. Observar al microscopio 1000 X, aceite de inmersin.
Coloracin Ziehl
Neelsen
BAAR
 Resultado:
Negativo (-): No se observa BAAR en 100 campos
Positivo (+): Se observa menos de 1 BAAR promedio
por/C en 100C.
Positivo (++): Se observa de 1 a 10 BAAR promedio
en 50C.
Positivo (+++): Se observa ms de 10 BAAR
promedio en 20C.
MUESTRA PAUCIBACILAR: Se observa de 1 a 9
BAAR en 100C.
 C. COLORACIONES
ESPECIALES
Utiliza mas de un colorante, no diferenciador.

COLORACION VAGO
- Permite observar m.o fusiformes difciles de observar
con otra tcnica.
- Morfologa.

PROCEDIMIENTO
1. Extendido del sarro dentario.
2. Secado al medio ambiente.
3. Fijar levemente al calor
 Procedimiento.

4. Coloracin :
- Mercurio cromo 2-3 minutos
- Lavar
- Cubrir con violeta de genciana por 2 3 minutos.

5. Lavar.

6. Secar

7. Observacin microscopio 1000 X, con aceite de

inmersin.