Funo protica

(ou nanobiotecnologia sem criador)

Prof. Dr. Francisco Prosdcimi

 Aula baseada
no livro do Lehninger
(Nelson e Cox)
Captulo 5
The cell
Cap 11

Hormnios proticos
Hormnios que so protenas

Prolactina
Hormnio de crescimento (GH, HGH)
Hormnio adenocorticotrfico (ACTH)
Vasopressina
Oxitocina
Insulina
Somatostatina, etc.

Todos esses hormnios viajam no sangue e precisam ser

reconhecidos e incorporados em clulas especficas que so
identificadas e reconhecidas atravs de receptores proticos
ligados s membranas celular

Cascatas de regulao
Protenas viajam no
sangue at encontrar
receptor de membrana
Interaes protenaprotena e protenaligante regulam o
metabolismo celular
Acionadas por protenas
de membrana
Reconhecem
modificaes no meio
externo e modificam o
ambiente intracelular
em resposta

A estrutura dinmica das

protenas
Ligao reversvel a outras
molculas: ligantes
Permite resposta rpida a
modificaes ambientais e
condies metablicas

Stio de ligao: interage

com o ligante
Complementar em tamanho,
forma, carga e afinidade
gua

A estrutura definida da
protena como uma foto,
na realidade a protena
opera de forma dinmica

O Ligante e o encaixe
induzido
O stio de ligao discrimina entre
diferentes molculas, ou seja, a
interao especfica
Uma protena pode ter stio de ligao
para diversas molculas
Protenas so flexveis, vibram,
respiram
Mudanas conformacionais
(alostricas) so essenciais para a
funo protica
Encaixe induzido: adaptao
estrutural da protena que se liga
firmemente a ele

Teoria do caos e estrutura de

protenas
Novas teorias dizem que o
modelo chave-e-fechadura est
refutado
A protena fica em um estado de
movimentao dinmica
razoavelmente catico
o substrato induz a mudana
conformacional na protena

Complementaridade
interativa: como se a chave
moldasse a fechadura ao
encontrar com ela ou vice-versa

Modificaes
conformacionais
Em uma protena contendo vrias subunidades, uma
mudana conformacional em uma delas
normalmente afeta a
conformao das demais
As ligaes com os ligantes podem
ser reguladas por meio de
interaes especficas (fosforilao,
glicosilao, etc.) ou por ligao
a outros ligantes
Nas enzimas, os ligantes so
chamados substratos e o stio
de ligao chamado stio
cataltico ou stio ativo
Palavras-chave: ligao,
especificidade e mudana
conformacional

Protenas de ligao ao
O2
A mioglobina e a
hemoglobina so
provavelmente as protenas
mais estudadas do mundo
Primeiras a terem estrutura 3D
conhecida
Reao reversvel de ligao ao
O2

Por que uma protena?

O2 pouco solvel em soluo
aquosa (sangue)

Como ligar e
transportar O2
O problema: nenhuma cadeia
lateral de aminocido adaptada a
ligar uma molcula de oxignio
Sabe-se que metais de transio (Ferro
e cobre) ligam-se bem ao O2, mas...
Ferro livre gera espcies reativas de
oxignio

Grupo prosttico: composto

associado permanentemente a uma
protena e que contribui para sua
funo
O grupo heme: anel de
protoporfirina, seis ligaes

A mioglobina
154 aa; 16700 Kda
Encontrada no tecido
muscular de mamferos
Em focas e baleias guarda
O2 para mergulhos longos

Globina (prot. globular)

8 -hlices 78% dos resduos

Ligaes protena-ligantes
so descritas por expresses
de equilbrio
P+L

PL

>gi|44955888|ref|NP_976312.1|
myoglobin [Homo sapiens]
MGLSDGEWQLVLNVWGKVEADIPGHGQEVLIR
LFKGHPETLEKFDKFKHLKSEDEMKASEDLKK
HGATVLTALGGILKKKGHHEAEIKPLAQSHAT
KHKIPVKYLEFISECIIQVLQSKHPGDFGADA
QGAMNKALELFR KDMASNYKELGFQG

Hemoglobina
Protena tetramrica
quase esfrica com
4 grupos heme
2 cadeias alfa
2 cadeias beta

<50% de
similaridade na
cadeia primria!!
Estrutura 3D muito
similar

Eritrcitos
Eritrcitos so clulas
altamente especializadas
em transportar O2
Perderam ncleo, mito,
retculo
Vivem 120 dias
34% de seu peso total de
hemoglobina

Hemoglobina est 96%

saturada no sangue arterial
e 64% no sangue venoso
o CO tem mais afinidade
hemoglobina do que o O2

Protenas
alostricas
Hemoglobina possui 2
tipos de estados
conformacionais: T(enso)
e R(elaxado)
A ligao do O2
subunidade da hmb no
estado T desencadeia
mudana para o estado R
Em protenas alostricas,
como a Hmb, a interao
com um ligante altera
as propriedades de
ligao a outros stios
da mesma protena

A hemoglobina tambm
carrega o CO2
Liga CO2 de forma
inversamente proporcional
quando relacionado ligao
com o oxignio
CO2 liga-se como grupo
carbamato ao grupo amino
do aminocido que est no Nterminal
Os carbamatos formam
pontes salinas adicionais
que auxiliam na estabilizao
do estado T e provem
liberao do O2

A ligao do O2 hmg
regulada por BPG
2,3 bisfosfoglicerato
Presente em alta concentrao nos
eritrcitos
Uma molcula ligada para cada
hemoglobina estabiliza o estado T
Dificulta a ligao do O 2 hmg

Quantidade de O2 liberada nos tecidos

~40% da quantidade mxima
transportada no sangue regulado
com altitude
Excesso de BPG => hipoxia
Funcionamento inadequado do pulmo
Feto tem hemoblogina que mais afim
de O2 do que a da me

Anemia falciforme
A mutao homozigota (aa)
de um nico nucleotdeo que
codifica para a cadeia B da
hemoglobina faz com que a
forma da hemcea seja
modificada
No h cura, transporte
ineficiente de O2

Por outro lado, o heterozigoto

(Aa) possui maior resistncia
malria j que o Plasmodium
no consegue infectar to bem
as hemceas falciformes
Qual o tipo de tratamento que se
d doenas genticas?

Interaes proticas
moduladas por energia
qumica (ATP)
Prof. Dr. Francisco Prosdocimi

Citoesqueleto
Rede de filamentos proticos
que se prolongam no
citoplasma
Rede estrutural da clula
Define formato e organizao
geral do citoplasma

Responsvel pelos movimentos

celulares
Transporte interno de organelas
Transporte de cromossomos na
mitose

Estrutura dinmica
Organizado e desorganizado
(diviso celular)

Composio do
citoesqueleto
Formados por trs tipos
principais de filamentos
arranjados em conjunto e
associados a organelas e
membrana por protenas
acessrias
Filamentos de Actina
Filamentos intermedirios
Microtbulos

Funes
Motilidade celular,
transporte de organelas,
diviso celular e outros tipos
de transporte celular

FA

FI

MT

Filamentos do
citoesqueleto
Cada tipo de filamento do
citoesqueleto um polmero
construdo a partir de
subunidades menores
(monmeros)
Podem difundir-se rapidamente
pelo citoplasma
Protenas acessrias
associam-se ao citoesqueleto
Os polmeros do citoesqueleto
so mantidos por ligaes
fracas (no covalentes)

Actina

Protena globular, principal protena

do citoesqueleto
20% das protenas totais de uma clula
Leveduras: um gene; Mamferos: 6 genes

Uma das protenas mais conservadas

sendo 90% idntica desde os fungos
at os mamferos

Usada frequentemente como controle

negativo

Quando polimerizada forma filamentos

do citoesqueleto

Participa da contrao muscular,

mobilidade celular, diviso celular,
citocinese, movimentao de
vesculas e organelas, sinalizao
celular, estabilizao e manuteno
das junes celulares, formato celular

Interage com as membranas celulares

Filamentos de Actina
Microfilamentos formam feixes ou
redes tridimensionais com
propriedades de gis semi-slidos
O arranjo e a organizao dos
filamentos, as ligaes entre feixes
e redes e estruturas celulares so
regulados pela ligao com uma
variedade de protenas de
associao com a actina
Os filamentos so particularmente
abundantes junto membrana
plasmtica
Suporte mecnico e forma celular
Movimento da superfcie celular

Microfilamentos de
actina
Cada monmero de actina faz
uma rotao no filamento,
que apresenta estrutura de
hlice de dupla cadeia
Possui uma polaridade que
ser importante para a
definio do movimento da
miosina
Polimeriza espontaneamente
em condies fisiolgicas
Polimerizao reversvel
(dinmica)

Extremidade positiva cresce

de 5 a 10 vezes mais rpido
do que a negativa

Organizao dos
filamentos
Feixes de actina
Filamentos ligados em agrupamentos
paralelos
Protenas empacotadoras de actina

Redes de actina
Arranjo ortogonal

Feixes paralelos
Responsveis pelas
microvilosidades das
membranas

Redes de actina
Filamentos de actina
ligados por protenas
filaminas
Ligaes ortogonais
Malha tridimensional
frouxa

Sustentao da
superfcie da clula

Adeso
celular
Responsveis pelo contato com clulas adjacentes
Fibras de estresse
Fibras de actina que promovem adeso celular

Fibras de alfa-actinina ligam cateninas e caderinas

Contato clula-clula
Junes de adeso

Projees de membrana
Microvilosidades intestinais
Estruturas de resposta a estmulo
Formadas por formao e retrao de feixes de
actina

Pseudpodos
Microespculas

Resumo: filamentos de
actina

A: Microvilosidades
B: feixes contrteis citoplasmticos
C: Protruses em forma de lmina e em forma de dedo
D: Anel contrtil durante a diviso celular

Actina, miosina e o movimento

celular
Filamentos de actina esto
associados a protenas
miosinas, responsvel por
movimentos celulares
A miosina motor molecular
Converte ATP em energia mecnica
Gera fora e movimento

Responsvel pela contrao

muscular, diviso celular,
movimentaes celulares

Miosinas
Reconhecidas originalmente como
ATPases presentes em msculos
lisos e estriados
Conservadas na cabea (liga
actina e hidrolisa ATP), mas
variveis na cauda (interao com
molculas)
Genoma humano possui
aproximadamente 40 genes
diferentes para miosinas
Forma define a velocidade
com a qual se deslocam
nos feixes de actina

Contrao
muscular
Especializao das clulas
musculares
Msculo como modelo para o
estudo do movimento em nvel
celular e molecular
Msculos
Estriado esqueltico:
movimentos voluntrios
Estriado cardaco: bombeia
sangue do corao
Liso: movimentos involuntrios
do estmago, intestino, tero
e vasos sanguneos

Msculo esqueltico
So feixes de fibras musculares
Citoplasma composto de miofibrilas
Filamento espessos de miosina
Filamentos finos de actina

Sarcmeros
Cadeia de unidades contrteis

Sarcmeros
Protenas titinas
Ligam miosina da linha M
at o disco Z

Modelo do filamento
deslizante (1954)

Contrao do sarcmero
Aproximao dos discos Z
Banda A no sofre alterao
Bandas I e H desaparecem
Deslizamento dos filamentos de
actina

Linha M

O modelo do filamento
deslizante
As cabeas globulares da
miosina ligam-se actina
Ligao entre filamentos
finos e espessos

A miosina movimenta
seus domnios globulares
sobre os filamentos de
actina em direo ao
terminal positivo

Modelo da ponte
pnsil
Alm de ligar-se actina, as
regies globulares da
miosina ligam-se e
hidrolisam o ATP, que fornece
a energia para a realizao
do deslizamento
Deslizamento dos feixes de
miosina sob os feixes de
actina

Miosinas noconvencionais
No formam filamentos
Envolvidas em outros tipos de movimentos
celulares
Transporte de vesculas e organelas
Fagocitose, emisso de pseudpodos

Caudas se ligam a organelas

Movimentao sob o
esqueleto de actina

Microtbulos
Cilindros ocos de 25nm de
dimetro
Estruturas dinmicas em
constante processo de
organizao e
desorganizao
Definem a forma da clula
Promovem locomoo,
transporte intracelular de
organelas e separao dos
cromossomos durante a
mitose

Tubulina
Protena globular
Arranjos das formas
alfa e beta formam os
microtbulos

Estrutura dos
microtbulos
Formado por dmeros de tubulinas
alfa e beta
Formados por 13 filamentos
lineares organizados em volta do
centro do tbulo
Assim como os filamentos de actina so
estruturas polares
Extremidade positiva: crescimento rpido
Extremidade negativa: crescimento lento

A polaridade interfere na direo do movimento

ao longo do microtbulo

Instabilidade dinmica
Tubulina ligada a GTP incorporada ao
microtbulo
A adio de tubulina-GTP ocorre mais rpido do
que a hidrlise do GTP -> formao de cap GTP
Na falta de molculas de GTP ligadas a tubulina,
a hidrlise ocorre de forma
mais rpida e o
complexo despolimerizado
Remodelamento dos
microtbulos importante na mitose

Microtbulos, drogas e
cncer
Drogas que se ligam
tubulina, como a
colchicina e a colcemida
inibem a polimerizao de
microtbulos
Inibem assim a diviso
celular (mitose)
Outras drogas que se
ligam aos microtbulos
so tambm utilizadas no
tratamento de cncer,
como vincristina e
vimblastina

Centrolo, centrossomo e
organizao dos
microtbulos
Microtbulos se
estendem a partir de
um centro organizador
de microtbulos
O centrossomo se
localiza junto ao ncleo

Durante a mitose os
centrossomos formam
os fusos mitticos,
responsveis pela
separao dos
cromossomos nas
clulas filhas

Centrossomos
Formados por um par de centrolos
organizados perpendicularmente,
circundados pelo material peri-centriolar
Centrolo: estrutura cilndrica formada
por 9 tripletes de microtbulos
Funes de organizao
dos microtbulos pelo
centrossomo

Organizao dos
microtbulos na
mitose
Organizao do fuso mittico:
responsvel pela separao dos
cromossomos homlogos
Centrolo e componentes do
centrossomo so inicialmente duplicados
Os dois centrossomos so ento
localizados em cada um dos lados do
ncleo
Na mitose ocorre despolimerizao e
retrao geral dos microtbulos

Microtbulos motores e
movimentos
Responsveis por movimentos celulares,
transporte intracelular, posicionamento de
vesculas e organelas, separao dos
cromossomos, batimento de clios e flagelos
Assim como no caso da actina a movimentao
realizada por protenas motoras que usam a
energia do ATP
Cinesinas e dinenas fazem aqui o papel da
miosina

Cinesinas e dinenas
Movem-se em direes opostas ao longo
dos microtbulos
Cinesina: move-se para a extremidade positiva
Dinena: extremidade negativa

Cerca de 100 diferentes cinesinas em

humanos

Transporte de organelas
Neurnios com metros de comprimento
precisam ter molculas transportadas para
o axnio
Vesculas secretoras vindas do Golgi so
transportadas ao longo dos microtbulos
aos axnios

Separao dos cromossomos

mitticos
Ocorre durante a anfase
Anfase A
Movimento dos cromossomos
em direo ao polo do fuso
Anfase B
Separao
dos polos do
fuso

Clios e Flagelos
Projees de membrana
formadas por microtbulos
e responsveis pelo
movimento de clulas
eucariticas
Flagelos de bactrias so
proticos (no tubulina)
Estrutura em
axonema
(9+2)

Sistema imunolgico
Prof. Dr. Francisco Prosdocimi

Protenas e imunologia
A maioria das interaes protena-ligante
no envolve grupo prosttico
Discriminao efetiva do ligante na forma de
stio de ligao protena-protena

Resposta imunolgica
A distino molecular entre prprio e noprprio
Teoria de rede
O sistema homeosttico bioqumica altamente
sensvel e desenvolvido atravs das reaes
entre ligantes e protenas

Sistemas imunolgicos
Imunidade celular
Clulas hospedeiras infectadas por
vrus, parasitas e tecidos
estranhos
Linfcitos T
Parasitas possuem receptores de
clulas Tc
Clulas T auxiliares produzem
protenas sinalizadoras (citocinas)

Imunidade humoral
Infeces bacterianas e virais,
protenas estranhas
Anticorpos ou imunoglobulinas (Ig)
20% das protenas do sangue so
Igs produzidas pelos linfcitos B

Protenas imunolgicas
Protenas de reconhecimento
altamente especficas
(humanos teem 108 anticorpos
com especificidades diferentes)
Receptor de clula T
Anticorpo produzido por clula B

Antgeno: molcula que induz

resposta imunolgica
Epitopo: determinante antignico,
regio da molcula reconhecida

Imunoglobulinas (igs):
formadas por 4 cadeias
polipeptdicas, sendo 2 pesadas
e 2 leves

Imunoglobulinas
Ligao especfica entre
antgeno e anticorpo
Imunoglobulinas podem
ser encontradas em
monmeros, dmeros,
trmeros, multmeros
Marcao do patgeno
para engolfamento por
macrfagos

Ligao antgenoanticorpo

Firme e especfica
a base para procedimen-tos
analticos importantes
Anticorpo

policlonal: reconhecido por

vrias clulas B diferentes
Monoclonal: reconhecidos pela
mesma populao de clulas B

Anticorpo pode ser ligado a

uma resina cromatogrfica
para separao de uma
protena especfica
Exames sorolgicos: detecta
presena e quantidade do
antgeno
Immunoblot

Concluses

As protenas teem inmeras funes celulares

A estrutura da protena altamente relevante para que ela tenha uma funo
celular
O contato protena-protena regula muitas funes intra e intercelulares
(receptores de membrana)
As protenas mudam de conformao quando encaixadas a um ligante
A ligao reversvel da protena ao ligante importante na regulao do metabolismo
Stios de ligao podem ligar diferentes molculas, algumas com mais afinidade do
que o ligante desejado

Protenas interagem para a formao do citoesqueleto e contrao muscular,

gastando energia qumica
Polimerao e despolimerizao de complexos polimricos acontecem em todo
o instante nas clulas
Protenas podem ligar molculas indiretamente -- atravs de grupos prostticos
H um controle dos ligantes mais comuns dentro de um organismo e a
presena de novas molculas desconhecidas aciona o sistema imune

 Aula baseada
no livro do Lehninger
(Nelson e Cox)
Captulo 5
The cell
Cap 11