ESPECTROMETRA

UV-VISIBLE

Borges Valeria,

1.- Proceso de absorcin molecular de molculas orgnicas.

La absorcin de radiacin ultravioleta y visible por parte de las molculas
ocurre en una o ms bandas de absorcin electrnicas, cada una de las cuales
se compone de muchas lneas muy juntas pero discretas.
Cada lnea surge de la transicin de un electrn del estado fundamental a uno
de los muchos estados de energa vibratoria y rotatoria relacionados con cada
estado de energa electrnica excitado.
Puesto que existen muchos de estos estados vibratorios y rotatorios, y adems
su energa difiere muy poco, el nmero de lneas contenidas en la banda
caracterstica es bastante grande y su desplazamiento entre si es muy
pequeo.
La absorcin y radiacin por molculas orgnicas en la regin de longitud de
onda entre 180 y 780nm resulta de la interaccin de los fotones y electrones
que participan de manera directa en la formacin de enlaces (as se asocian a
ms de un tomo) o que se localizan en torno a tomos como los de oxgeno,
azufre, nitrgeno y halgenos.

 La longitud de onda que absorbe una molcula orgnica depende de la

fortaleza de los enlaces de sus electrones. Los electrones compartidos en
los enlaces simples carbono-carbono o carbono-hidrogeno estn sujetos con
tal firmeza que si excitacin requiere energas que corresponden a la
longitud de onda de la regin ultravioleta al vaco inferior a 180nm

Proceso de
absorcin molecular
de molculas
orgnicas

Especies con electrones , y n

La absorcin de radiacin ultravioleta y visible en las molculas orgnicas
esta restringida a ciertos grupos funcionales (cromforos) que contienen
electrones de valencia de baja energa de excitacin
El espectro de una molcula que contiene estos cromforos es complejo.
Esto es debido a la superposicin de transiciones rotacionales y vibracionales
en las transiciones electrnicas que da una combinacin de lneas
sobrepuestas
Esto da como resultado una banda absorcin continua.

Espectro de
absorcin UV-Vis
de la cafena,
corresponde a las
transiciones *

Transiciones *
Un electrn en un orbital es excitado al
orbital de antienlace correspondiente.
La energa requerida es grande. Por
ejemplo, el metano (que solo tiene
enlaces sencillos C-H, y sus electrones
nicamente pueden efectuar transiciones
*) muestra una absorcin mxima a
125nm.

Transiciones electrnicas posibles

para los electrones , , y n.

La
absorcin
mxima
debida
a
transiciones * no se observa en un
espectro tpico UV-Vis (200nm a 700nm).
Transiciones *

Transiciones n*
Los compuestos saturados que contienen tomos con pares de electrones
solos (electrones no enlace) son capaces de efectuar transiciones n*.
Estas transiciones
transiciones *.

generalmente

necesitan

menor

energa

que

las

Pueden ser iniciadas por una radiacin de longitud de onda en el rango de

150nm a 250nm.
El numero de grupos funcionales orgnicos con seales n* es pequeo.

Algunos
ejemplos de
absorcin
debidos a
transiciones
n*
Transiciones n*

Transiciones n* y *
La mayora de los estudios de espectroscopia de absorcin, en la region UV, de
compuestos orgnicos estaba basada en las transiciones de los electrones n y al
estado excitado *.
Esto es debido a que las bandas de absorcin para estas transiciones caen en una
region del espectro (200nm a 700nm) experimentalmente til.
Estas transiciones necesitan un grupo insaturado en la molcula de proporcione los
electrones .
La absortividad molar de las transiciones n* son relativamente pequeas, con un
rango de 10L/mol cm a 100L/mol cm.
En cambio en transiciones * dan absortividades molares del orden de
1000L/mol cm a 10000L/mol cm.

Transiciones n* y *

 Adems de los electrones y , muchas molculas orgnicas contienen

electrones no enlazantes.
Estos electrones, que no participan en ningn enlace se designan con el smbolo
n y estn en gran parte localizados alrededor de tomos como oxgeno,
halgenos, azufre y nitrgeno.
La mayora de las aplicaciones de espectroscopia de absorcin en compuestos
orgnicos se basan en transiciones de los electrones n y p al estado excitado p*
porque la energa requerida para estos procesos lleva las bandas de absorcin
hacia dentro de la regin ultravioleta-visible (200 a 700 nm).
Ambas transiciones requieren la presencia de un grupo funcional no saturado que
aporte los orbitales p a las molculas que contienen dichos grupos funcionales y
son capaces de absorber la radiacin UV-visible se les denomina cromforos.

 Por definicin, un auxcromo es un grupo funcional que no absorbe por si

mismo en la region ultravioleta, pero que produce el efecto de desplazar los
picos de los cromforos hacia longitudes de onda ms largas, as como de
incrementar sus intensidades.
Los grupos OH y tienen un efecto auxcromo sobe el cromforo benceno.
Los sustituyentes auxocrmicos tienen al menos, un par de electrones del
anillo. Esta interaccin tiene, aparentemente, el efecto de estabilizar el estado
*, disminuyendo, de ese modo, su energa (aumentando la y la absortividad
molar.
El resultado es un desplazamiento batocrmico.

Efecto de la conjugacin de los cromforos

En la teora de los orbitales moleculares,
se considera que los electrones estn
deslocalizados por conjugacin.
El efecto de esta deslocalizacin es el
descenso del nivel de energa del orbital
*, dotndole de menos carcter
antienlazante.
Como consecuencia, los mximos de
absorcin se desplazan hacia longitudes
de onda mas largas (menor energa y
mayor ).
Como se ve en la Tabla de absorcin de
los multicromforos en una molcula
sencilla, es aproximadamente aditiva.
La Olefina y Diolefina aumentan porque
la probabilidad es mayor (mas dobles
enlaces) pero no si no esta conjugada.

Tabla de absorcin de multicromforos en

molculas sencillas

A medida que
aumenta la
conjugacin,
el sistema
absorbe a
mayores, es
decir, hacia el
mas visible

Efecto de la conjugacin de sistemas aromticos

Los espectros UV de los hidrocarburos aromticos se caracterizan por tres
grupos de bandas cuyo origen son las transiciones *.
Por ejemplo, el benceno presenta un pico de absorcin intenso a 184nm (), una
banda dbil, llamada banda a 204nm () y un pico aun mas dbil, denominado
banda B, a 256nm ().
Las bandas de las longitudes de onda largas del espectro del vapor de benceno,
y de muchos otros compuestos aromticos contienen una seria de picos agudos
que se deben a la superposicin de las transiciones vibracionales sobre las
transiciones electrnicas bsicas.

A mayor conjugacin
de sistemas
aromticos, mayor es
el desplazamiento de
la absorcin al visible

Desplazamientos de longitud de onda

Efecto Batocrmico: Tambin llamado
desplazamiento al rojo, es el desplazamiento
mximo de absorcin hacia longitudes de
onda mayores. Los espectros de iones y
radicales libres suelen estar desplazados
hacia longitudes de onda mas largas.
Lo producen los grupos que poseen pares
de electrones de no enlaces (amino,
hidroxilo, halgeno, entre otros).
Efecto Hipsocrmico: Tambin llamado
desplazamiento al azul porque se traduce
como un desplazamiento del color a la zona
azul del espectro visible.
Lo producen los grupos
que atraen
electrones por resonancia (nitro, carboxilo,
ster, entre otros)

Desplazamientos de absorbancia
Efecto Hipercrmico: Es el desplazamiento que
provoca que aumente la absorbancia de la
sustancia.
El caso mas conocido es la hipercromicidad del
ADN, que ocurre cuando el dplex se
desnaturaliza, dando dos cadenas sencillas que
absorben mas en el ultravioleta.
El menor grado de absorcin se produce en
estado de doble hlice, la absorcin aumenta
cuando se produce la desnaturalizacin pasando
a estado de hlice sencilla (efecto hipercrmico,
aumento de la absorbancia).
Por ultimo, si degradamos este ADN de hlice
sencilla a nivel de nucletidos libres, de nuevo
aumenta la absorbancia.

 Efecto Hipocrmico: Es el desplazamiento

que provoca que disminuya la absorbancia
de la sustancia.

Una disolucin del polmero policido

adenlico (poli-A) y de una disolucin del
monmero, fosfato de adenosina (AMP) en
una concentracin equivalente a la del
numero de residuos de nucletidos del
polmero.

Efecto del solvente:

Al elegir un solvente no solo se tiene que tener en
cuenta su transparencia sino tambin sus posibles
efectos sobre le sistema absorbente.
Con bastante frecuencia, los disolventes polares
como el agua, alcoholes, esteres y cetonas tienden
a borrar la estructura fina del espectro que resulta
de los cambios vibracionales.
Es mas probable obtener espectros parecidos a los
originados en fase gaseosa cuando se utilizan
disolventes no polares como los hidrocarburos.
Las posiciones de los mximos de absorcin se ven
afectadas por la naturaleza del disolvente. Es
imprescindible utilizar el mismo disolvente cuando
se comparan espectros de absorcin con fines de
identificacin.

 Al aumentar la polaridad del disolvente, la banda * se desplaza hacia

mas largas (efecto batocrmico/rojo). Mientras que la banda n* sufre le
efecto contrario, es decir, una desviacin a mas cortas (efecto
hipsocrmico/azul).
Este efecto es debido a que el estado * es mas polar que el estado y por
tanto las interacciones dipolo-dipolo con los disolventes polares disminuyen la E
del estado excitado mas que del fundamental, la transicin ocurrir por tanto a
mas largas al aumentar la polaridad del disolvente.

Efecto del pH:

Las variaciones originadas por cambios de pH son debidas al efecto de ste
sobre la ionizacin del compuesto.
Por ejemplo, un espectro de absorcin de HNTS, un reactivo utilizado para la
determinacin de especies oxidantes, y comprobndose que por
espectrometra se puede seguir el efecto que ejercen el pH y los oxidantes.

Efecto de la temperatura:
La eficacia cuntica de fluorescencia disminuye en la mayora de las
molculas al aumentar la temperatura, ya que al aumentar la frecuencia de las
colisiones, cuando la temperatura es elevada, aumenta la probabilidad de
desactivacin por conversin externa.

Efecto de la
temperatura en la
isoterma de adsorcin
del naranja de metilo
sobre HDL a pH.

2.- Proceso de absorcin molecular de complejos

metlicos
La mayora de los iones de los metales de
transicin absorben en la regin ultravioleta o
visible del espectro.
Para la serie de lantnidos y actnidos, los
procesos de absorcin son el resultado de
transiciones electrnicas de los electrones 4f y 5f.
Para los elementos de la 1 y 2 serie de los
metales
de
transicin,
los
electrones
responsables son los 3d y 4d.
Los iones de la mayora de los elementos
lantnidos y actnidos absorben en las regiones
ultravioleta
y visible. A diferencia
del
comportamiento de la mayora de los
absorbentes inorgnicos y orgnicos, sus
espectros estn formados por picos de absorcin
caractersticos, bien definidos y estrechos. Se
ven muy poco afectados por el tipo de ligando
asociado con el ion metlico.

Picos de absorcin de metales de

transicin estrechos, poco
afectados por el entorno.

 Los iones y complejos de los 18 elementos de

la 1 de las dos series de transicin tienden a
absorber radiacin visible en todos sus
estados de oxidacin.
Las bandas de absorcin son, con frecuencia,
anchas y estn enormemente influenciadas
por los factores qumicos del entorno.
La serie de los metales de transicin se
caracteriza por tener cinco orbitales d
parcialmente ocupados (3d en la primera serie
y 4d en la segunda), cada uno de ellos
capaces de alojar a un par de electrones.
Las caractersticas espectrales de los metales
de transicin suponen transiciones entre los
distintos niveles de energa de estos orbitales
d.

Bandas de absorcin anchas e

influidas por factores qumicos del
entorno

 Se han propuesto dos teoras (campo

cristalino y campo ligando) para explicar los
colores de los iones de los metales de
transicin y la profunda influencia del
entorno qumico sobre estos colores.
La teora del campo cristalino, es la ms
sencilla de las dos teoras y es adecuada
para una comprensin cualitativa. Sin
embargo, el tratamiento ms complejo de
los orbitales moleculares, proporciona un
entendimiento cuantitativo del fenmeno
ms adecuado.
Esta teora propone que las energas de los
orbitales d de los iones de los metales de
transicin en disolucin no son iguales.

Desdoblamiento de los
orbitales d y variacin
del o.

 La absorcin supone la transicin de los electrones de un orbital d de menor

energa a otro de mayor energa.
En ausencia de un campo elctrico o magntico externo (como en el estado
gaseoso diluido), las energas de los cinco orbitales d son idnticas y, un
electrn, para pasar de un orbital a otro, no necesita absorber radiacin.
Cuando tiene lugar la formacin de un complejo en disolucin entre el ion
metlico y el agua o algn otro ligando, surge el desdoblamiento de las energas
de los orbitales d. Este efecto se debe a las diferentes fuerzas de repulsin
electrostticas entre el par de electrones del donador y los electrones en los
distintos orbitales d del ion metlico central.
Ocupan los espacios entre
los tres ejes. Densidad
electrnica mnima a lo
largo de los ejes y mxima
en la diagonal entre los
ejes

Densidades electrnicas
dirigidas a lo largo de los
ejes

 Se considera ahora un ion de un metal de transicin unido por enlaces de

coordinacin a seis molculas de agua, los ligandos estn distribuidos de
forma simtrica alrededor del tomo central, cada ligando localizado al final
de los tres ejes.
La estructura octadrica resultante es la orientacin ms comn para los
complejos de los metales de transicin.
Los extremos negativos de los dipolos del agua estn orientados hacia el
ion metlico y los campos elctricos de estos dipolos tienden a ejercer un
efecto repulsivo sobre todos los orbitales d, de este modo aumentan su
energa y los orbitales han sido desestabilizados.

Contribucin de
los orbitales de
los ligandos a
los orbitales d
del metal

 La densidad de carga mxima de los orbitales dz2 est situada a lo largo de los
ejes de unin. El campo negativo de un ligando unido tiene adems un efecto
mayor sobre este orbital que sobre los orbitales dxy, dxz y dyz, cuyas densidades
de carga no coinciden con los ejes de unin.
Estos ltimos orbitales se desestabilizarn de la misma forma, puesto que difieren
uno de otro slo en lo que respecta a la orientacin. El efecto del campo elctrico
sobre los orbitales dx2-y2, es menos obvio, pero clculos cunticos han
demostrado que est igualmente desestabilizado que el orbital dz2.
As, el diagrama de niveles de energa para la configuracin octadrica muestra
que las energas de todos los orbitales d aumentan en presencia de un campo
ligando, pero, adems, que los orbitales d se desdoblan en niveles que difieren en
un de energa

Desdoblamiento
de los orbitales d
segn la simetra
del complejo.

 En los diagramas de energa para complejos

con cuatro enlaces existen dos tipos de
configuraciones:
Configuracin tetradrica, en la que los
cuatro grupos se distribuyen simtricamente
en el espacio alrededor del ion Metlico
Configuracin plano cuadrada, en la que
los cuatro ligandos se encuentran en el
mismo plano que el ion metlico y
equidistantes al mismo.
Los modelos de desdoblamiento de los
orbitales d correspondientes a cada
configuracin se pueden deducir a partir de
argumentos similares a los utilizados en la
estructura octadrica.

Geometra
tetradrica

Geometra
plano-cuadrada

 La magnitud del depende de varios factores, que incluyen la carga del ion
metlico y la posicin del elemento en el sistema peridico.
Una variable importante atribuible al ligando es la fuerza del campo ligando,
que es una medida de la intensidad con que un grupo complejante desdoblar
la energa de los electrones d;
Es posible ordenar los ligandos ms comunes en orden creciente de fuerzas
del campo ligando (menor radio-volumen):

< < < < < ~ H2O < < NH3 < etilendiamina < ofenantrolina < << CO

 Un nmero de factores pueden afectar el espectro de

absorcin del analito. Estos incluyen polaridad del
disolvente, pH, temperatura, fuerza inica y las
interferencias de otras especies absorbentes. Es por lo
tanto esencial para una fiable determinacin
cuantitativa, que las condiciones de la medicin se elijan
de manera que haya un efecto mnimo de estos
factores.
Los cambios en los espectros debido a cambios de pH
en la solucin o el disolvente pueden proporcionar
informacin til acerca de la naturaleza del analito. El
cambio en la polaridad del disolvente altera las energas
de los orbitales. Esto conduce a cambios en los
mximos de absorcin. Al aumentar la polaridad del
disolvente, las transiciones n-* se desplaza a
longitudes de onda inferiores, mientras que las
transiciones -* se desplazan a longitudes de onda
mayores.
Cuando un analito se disocia, se asocia o reacciona con
un disolvente para dar lugar a un producto con un
espectro de absorcin diferente al del analito, se
producen desviaciones de la ley de Beer.

Espectros UV-VIS de
colorante azoico (azul)
y permanganato (rojo).

 Las disoluciones acuosas de los indicadores acido/base son un ejemplo

caracterstico de este comportamiento
El cambio de color asociado con un indicador tpico HIn se produce como
consecuencia de los cambios en el equilibrio:
HIn

La ley de Beer no se cumple, al menos que el pH sea constante, o se opere a la longitud de

onda del punto isosbstico, esto es, la a la cual las dos especies absorbentes en equilibrio
presenten la misma

3.- Absorcin por transferencia de carga

Desde el punto de vista analtico, las especies que
presentan absorcin por transferencia de carga tienen
particular importancia, ya que sus absortividades molares
son muy altas (mx > 10.000).
As, estos complejos proporcionan una sensibilidad muy
elevada para la deteccin y determinacin de especies
absorbentes.
Muchos complejos inorgnicos presentan absorcin por
transferencia de carga y por ello se llaman complejos de
transferencia de carga.
Ejemplos:
Complejos fenlicos y complejos de tiocianato con el
hierro(III); complejo de o-fenantrolina de hierro(II); complejo
yodo-yoduro
coloreado
con
almidn
();
complejo
ferro/ferricianuro responsable del color azul de Prusia.

Espectro de
absorcin por
transferencia de
carga de algunas
especies.

 Para que un complejo presente un espectro de transferencia de carga, es necesario que

uno de sus componentes tenga caractersticas de dador de electrones y el otro
componente tenga propiedades de aceptor de electrones
La absorcin de la radiacin implica, entonces, la transferencia de un electrn desde el
dador hasta un orbital que est en gran parte asociado con el aceptor
Como consecuencia, el estado excitado es el resultado de un proceso tipo
oxidacin/reduccin interno. Este comportamiento difiere del de un cromforo orgnico,
donde el electrn, en el estado excitado, est en un orbital molecular formado por dos o
ms tomos.
En el complejo hierro(III)/tiocianato, la absorcin de un fotn da lugar a la transferencia de
un electrn del ion tiocianato a un orbital asociado con el hierro(III). El producto es, por
tanto, una especie excitada formada predominantemente por el ion hierro(II) y el radical
neutro tiocianato SCN.

Ejemplo de
transferencia de
carga

 Como en otros tipos de excitacin electrnica, el electrn, bajo condiciones

normales y tras un breve perodo, vuelve a su estado original.
Sin embargo, ocasionalmente, puede tener lugar la disociacin del complejo
excitado, originando productos de oxidacin/reduccin fotoqumica.
En la mayora de los complejos de transferencia de carga que incluyen un ion
metlico, el metal acta como aceptor de electrones.
Una excepcin es el complejo de ortofenantrolina con el hierro(II) o el cobre(I),
donde el ligando es el aceptor y el ion metlico es el dador.

Ejemplo de
oxidacin y
reduccin.

4.- Procesos de emisin de la

radiacin

La fluorescencia es el proceso de emisin de luz por molculas que son

excitadas con radiacin electromagntica. Las especies excitadas se relajan
al estado fundamental, liberando su exceso de energa en forma de fotones.
Normalmente, el tiempo de vida media de una especie excitada es breve
porque hay diversas formas en las cuales un tomo o una molcula excitada
liberan su exceso de energa y se relajan a su estado fundamental.
Dos de los mecanismos de relajacin ms importantes son la relajacin o
desactivacin no radiante (que incluye relajacin vibracional y conversin
interna) y la relajacin fluorescente (fluorescencia).
Ejemplo de minerales
iluminados con luz
ultravioleta, emitiendo
luz visible de diversos
colores mediante el
proceso de
fluorescencia.

 La relajacin vibracional o la relajacin radiante en los niveles de energa

vibracionales, tiene lugar durante las colisiones entre molculas excitadas y las
molculas del disolvente.
Durante estas colisiones el exceso de energa vibracional se transfiere a las
molculas del disolvente en una serie de etapas. La ganancia de energa
vibracional del disolvente se refleja en un ligero incremento de la temperatura
del medio.
La relajacin vibracional es un proceso tan eficiente que el tiempo de vida
promedio de un estado vibracional excitado es de 10-15 segundos
aproximadamente.
La fluorescencia, es un proceso radiativo de relajacin. Se puede observar
que las bandas de emisin son producidas cuando las molculas excitadas
electrnicamente se relajan a cualquiera de los estados vibracionales del
estado electrnico fundamental.
Excitacin de fluorescencia
y espectros de emision de
una solucion de quinina.

De igual forma que las bandas de absorcin

molecular, las bandas de fluorescencia molecular
estn formadas por una multitud de lneas
espaciadas tan estrechamente que son muy
difciles de resolver.

Las bandas de fluorescencia molecular por lo

regular se observan a longitudes de onda ms
largas, y por tanto a energas menores, que la
banda de radiacin responsable de su excitacin.

Este desplazamiento hacia longitudes de onda

mayores se llama desplazamiento de Stokes.

En aquellos casos en los que la radiacin

absorbida sea emitida sin cambio en la longitud de
onda (misma energa) se conoce como radiacin
de resonancia o resonancia fluorescente.

La conversin interna, es un proceso no

radiativo de relajacin que ocurre, a travs del
disolvente, entre niveles excitado y basal. Este
tipo de relajamiento tambin puede ocurrir entre el
nivel vibracional inferior de un estado electrnico
excitado y el nivel vibracional superior de otro
estado electrnico excitado.

Espectros de luminiscencia total. En a), el

Espectro 3D de fluorescencia total de antraceno
y ovaleno; b) el espectro de fluorescencia total de
8-hidroxibenzo[a]pireno.

Diagramas parciales de niveles de energa para un sistema fotoluminiscente.

 La fluorescencia ms intensa y la ms til es la que presentan los compuestos

que contienen grupos funcionales aromticos.
Los compuestos que contienen estructuras alifticas, alicclicas o estructuras
con dobles enlaces muy conjugados pueden presentar tambin fluorescencia.
La mayora de los hidrocarburos aromticos no sustituidos son fluorescentes en
disolucin, la eficacia cuntica aumenta con el nmero de anillos y con su
grado de conjugacin.
La sustitucin en un anillo aromtico causa desplazamientos en la longitud de
onda de absorcin mxima y los cambios correspondientes en los picos de
fluorescencia.
La condensacion de anillos bencenicos para dar nucleos heterociclicos, da
como resultado un aumento en la absortividad molar de la banda de absorcion.
En estas estructuras el tiempo de vida del estado excitado es mas corto, y la
fluorescencia se observa en compuestos como quinolina, isoquinolina e indol.

 La eficacia cuntica de la fluorescencia disminuye en muchas molculas

con el aumento de la temperatura, ya que el aumento de la frecuencia de
las colisiones a temperatura elevada hace aumentar la probabilidad de
desactivacin no radiante (conversin externa). Una disminucin en la
viscosidad del disolvente tambin aumenta la probabilidad de conversin
externa y produce el mismo resultado.
La fluorescencia de un compuesto aromtico con sustituyentes cidos o
bsicos en el anillo depende normalmente del pH. Tanto la longitud de onda
como la intensidad de emisin son probablemente diferentes para la forma
ionizada y no ionizada del compuesto. Por lo tanto es muy frecuente en los
mtodos fluorimtricos el control estricto del pH.
La potencia de la radiacin fluorescente F es proporcional a la potencia
radiante del haz de excitacin que es absorbido por el sistema
La fluorescencia es un caso particular de luminiscencia en el que la
excitacin ptica de un cromforo y la emisin desde el mismo, tienen lugar
a travs de estados electrnicos singletes.
La determinacin de la intensidad de fluorescencia se puede realizar en
estado estacionario, es decir, con excitacin y observacin constantes.