Derivados libres de capa

alimentadora.
Las primeras lneas celulares reportadas se
describieron por Klimanskaya.
Usaron matriz derivada de raton.
A pesar de que la matriz puede ser esterilizada, no tendra
buen erndimiento en clnica

Ludwig, derivaron dos lneas celulares utilizando

Matrigel y laminina humana.
Linea 1: cariotipo 47, XXY; lnea 2 tambin tubo cromosopatia
numrica, pasaje 40.
Cultivos libres de capa alimentadora sobrecargan las clulas
colocndolas mas propensas.

Derivados libres de capa

alimentadora.

Usar las GMP, en cultivos celulares libres de xenobioticos, es el mtodo

mas eficaz y seguro para hESCs para uso clnico.

Pasajes y congelamiento
El pasaje de clulas tiene que ser GMP compatible
El pasaje mecanico usado por diversos equipos.
No involucra sustancias adicionales
EXELENTE METODO aplicable al modelo GMP

El pasaje enzimtico es necesario en mucha

situaciones
En biorreactores el uso enzimtico es sencillo.
El uso de la colagenasa (serva Germany) es GMP compatible
VS tripsina recombinante no tiene calidad GMP

Pasajes y congelamiento
El congelamiento debe cumplir con las normas para
GMP:
Especial atencin en el medio crio protector
Recurso proteico
Calidad del nitrgeno liquido

Debe ser evitado el contacto directo con nitrgeno

liquido
Debe ser almacenado en un contenedor estril
Vitrificacin y crio preservacin mediante congelacin
lenta y calentamiento rpido ha sido validado para
hESCs

Pasajes y congelamiento

Los mtodos anteriores no pueden ser usados en la

clnica si no se contemplan modificaciones
Crio preservacin libre de xenobioticos
Uso de albumina srica humana VS suero fetal bovino
Uso de cmara sellada de manera ermetica

Lneas de hESC con grado clnico.

La opcin segura para obtener clulas de grado clnico
Cumpla las recomendaciones de GMP, que son extensivas a los
embriones.
UE, todos los laboratorios de fertilizacin in vitro deben tener
condiciones que faciliten obtener embriones para derivacin a
lneas clulas madre.
Deben tenerse al menos 10 pasajes para garantizar que estn
libres de patgenos o alteraciones cromosmicas.

Para alcanzar el grado clnico, Crook planteo:

Procedimientos estndar
Protocolos validados
Aprobacin tica y consentimiento, tomar ICM o el blastocisto
completo.

Lneas de hESC con grado clnico.

ICM, fue sembrada en una capa alimentadora celular
comercialmente avalada con GMP
No libre de xenobioticos, uso de FBS de calidad GMP

Calidad GMP, medio solo con sustancias de origen

humano
Las capas alimentadoras deben ser cultivadas en
iguales condiciones.
En caso de uso enzimtico esas deben ser calidad
GMP.

Futuras direcciones.

La generacin de hESC con grado clnico es uno de los primeros pasos

dentro de un futuro lleno de opciones

Por el momento no se sabe si considerar estas clulas como agente

farmacolgico activo

Establecer el protocolo, expandir el proceso, crear producto final para

dar a serie de pacientes.

El mayor de los retos es lograr diferenciacin en distintos tipos de

tejidos con validacin GMP.

Para calidad clnica optima, deben solucionarse los problemas

inmunogenicos por xenobioticos.

Para evitar rechazo inmunogenico debe etnerse un banco de hESC

TNS puede ser una opcin para el futuro

Apoyo con tcnicas de reprogramacin.