AGLUTINACIJA

Definicija aglutinacije
Aglutinacija je seroloka reakcija u kojoj je
antigen korpuskularan
Aglutinat nastaje izukrtenim
povezivanjem antigena mostovima antitela
Antigeni mogu biti prirodni antigeni elija ili
su naneti na inertne estice

Vidljivost kompleksa ag - at

KOLIINSKI ODNOSI AG i AT
U viku antigena kompleks NIJE VIDLJIV
U viku antitela NIJE VIDLJIV
U optimalnim proporcijama kompleks AG AT JE
VIDLJIV sve antigenske determinante i sva
aktivna mesta na antitelima su meusobno
povezani

FENOMEN PROZONE

Vidljivost kompleksa ag - at
Nespecifini faktori koji utiu na vidljivodt
kompleksa AG AT
Koncentracija elektrolita
pH
Temperatura
Valentnost antitela
Veliina estice antigena i njegov
elektrostatski naboj

VRSTE AGLUTINACIJE
1.DIREKTNA
BRZA AGLUTINACIJA (kvalitativna
metoda) na ploici
SPORA (polukvantitativna metoda) u
epruvetama
KVANTITATIVNA
2.INDIREKTNA ILI PASIVNA

Direktna aglutinacija
Antigeni su prirodni povrinski antigeni
elija
Primeri direktne aglutinacije
tipizacija krvnih grupa
tipizacija histokompatibilnih antigena
leukocita
identifikacija bakterija
odreivanje antibakterijskih antitela u
bakteriologiji

REAKCIJE AGLUTINACIJE
BRZA AGLUTINACIJA na ploici za
seroloku identifikaciju bakterija,tipizaciju
krvnih grupa, za tipizaciju
histokompatibilnih antigena leukocita

DIREKTNA AGLUTINACIJA

Na ploicu se nanosi
kap antigena
I kap seruma
PRISUSTVO
AGLUTINATA MOE
SE ODREDITI GOLIM
OKOM

Spora aglutinacija
Izvodi se u seriji epruveta,kapilarima ili
udubljenjima na ploama za mikrotitraciju
SERUM prave se dvostruka stepenasta
razreenja seruma
Dodaje se standardna koliina poznatog
antigena
Inkubacija u termostatu na 37C
Oitavanje TITRA AGLUTINACIJE

Primeri aglutinacije u
epruvetama
POLUKVANTITATIVNA AGLUTINACIJA u
epruveti
WIDALOVA reakcija za dijagnostiku
tifusa i paratifusa
PAUL BUNNELL reakcija za
dokazivanje infektivne mononukleoze

AGLUTINACIJA U EPRUVETAMA
REZULTAT SE
IZRAAVA KAO
TITAR NAJVEE
RAZREENJE KOJE
DAJE POZITIVNU
SEROLOKU
REAKCIJU

INDIREKTNA AGLUTINACIJA
Inertne estice (lateks,bentonit) ili eritrociti
su nosai solubilnih antigena
Nosa moe biti obloen antigenima
dijagnostika u parazitologiji
dokazivanje reumatoidnog faktora
testovi za trudnou
Nosa moe biti obloen antigenima
(HBsAg)

OBLAGANJE ESTICA
ANTIGENOM SE VRI
PASIVNOM ADSORPCIJOM neki ag se
spontano vezuju za antigen
Hemijskim vezivanjem (pomu taninske
kiseline ili glutar aldehida)

COOMBSOV TEST
Antieritrocitna antitela klase IgG
NEKOMPLETNA (oblau eritrocite ali ne
dovode do aglutinacije)
ANTIGLOBULINSKI ANTISERUM
AGLUTINACIJA

PRECIPITACIJA
Definicija: seroloka reakcija u kojoj je
antigen rastvorljiv solubilan
FAKTORI OD KOJIH ZAVISI VIDLJIVOST
PRECIPITATA
Koliinski odnosi antigena i antitela
Nespecifini faktori kao:koncentracija jona,
pH, temperatura

PRIMENA PRECIPITACIJE
1) ZA UTVRIVANJE ETIOLOKE
DIJAGNOZE BOLESTI
2) U KLINIKOJ IMUNOLOGIJI ZA
ISPITIVANJE PROTEINA PLAZME I
TKIVNIH TENOSTI

PODELA PRECIPITACIJA
1.PRECIPITACIJA U TENOM
MEDIJUMU
2.PRECIPITACIJA U GELU (AGAR,
POLIAKRILAMID)

1.PRECIPITACIJA U TENOM
MEDIJUMU
1.1 KVALITATIVNA PRECIPITACIJA U
PRSTENU
1.2 KVANTITATIVNA PRECIPITACIJA
pri optimalnim koncentracijama Ag i At
svo At se nalazi u precipitatu. Precipitat se
izdvaja centrifugovanjem i koliina antitela
se meri hemijskim ili spektrofotometrijskim
metodama

2.PRECIPITACIJA U GELU
2.1.Ag i At se dovode u vezu PROSTOM
DIFUZIJOM
Dvostruka imunodifuzija u gelu
Radijalna imunodifuzija

2.PRECIPITACIJA U GELU
2.2 Ag i At se dovode u vezu pod
dejstvom struje
2.2.1.OBINA IMUNOELEKTROFOREZA
Ag se elektroforezom izdvajaju iz
smee u gelu se naini kanal
paralelan sa prethodnim dejstvom struje
u kanal se stavljaju At
Precipitat se formira u
vidu luka sa konkavitetom prema mestu
Ag

2.PRECIPITACIJA U GELU
2.2 Ag i At se dovode u vezu pod
dejstvom struje
2.2.2 UKRTENA
IMUNOELEKTROFOREZA
Ag i At se stavljaju u rupice kao u
dvostrukoj imunodifuziji i kreu se pod
dejstvom elektrine struje

2.PRECIPITACIJA U GELU
2.2 Ag i At se dovode u vezu pod
dejstvom struje
2.2.3 RAKETNA
IMUNOELEKTROFOREZA slina
radijalnoj imunodifuziji
u
gel je inkorporisan monospecifini
serum
Ag se stavlja u rupice u gelu
precipitat je u obliku rakete

2.PRECIPITACIJA U GELU
2.2 Ag i At se dovode u vezu pod dejstvom struje
2.2.4 VIEDIMENZIONALNA
IMUNOELEKTROFOREZA
varijanta raketne
prvo se vri elektroforetsko razdvajanje ag iz
smee, razdvojeni ag ubrzavaju se u svojoj
migraciji u gelu pod dejstvom elektrine struje
gel sadri
inkorporisana at
Za svaki
antigen formira se precipitat u vidu rakete