Trabajo Prctico de Laboratorio N9:

MEDIOS DE CULTIVO
SIEMBRA
Y
AISLAMIENTO

Asignatura: Microbiologa y Parasitologa

(Enfermera)
Facultad de Ciencias de la Salud

MEDIOS DE CULTIVO
Definicin: soluciones acuosas que
contienen concentraciones adecuadas de
nutrientes
que
proporcionan
al
microorganismo los elementos requeridos
para su crecimiento y multiplicacin.
Permiten:
-aislar
las
microbianas

diferentes

-proceder a su identificacin

especies

MEDIOS DE CULTIVO
La composicin precisa de un medio adecuado
depender de la especie que se quiere cultivar
Necesidades nutricionales variables
Requerimientos mnimos:
macroelementos (C, O, H, N, S, P, K, Ca, Mg, Fe)
Muchos seres vivos dependen adems de:
micro u oligoelementos
(Mn, Mo, Zn, Cu, Co, Ni, V, B, Cl, Na, Si)

factores de crecimiento especficos

(suero, sangre, extracto de levadura, etc.)

Adems existen requerimientos en cuanto a:

temperatura, humedad y presin de oxgeno, pH.

MEDIOS DE CULTIVO
CLASIFICACIN

Consistencia

Composicin

Lquidos
Comunes
Slidos
Enriqueci
Origen
Semisli
dos
do
Complejos o

naturales

Sintticos

Semi-sintticos

Funci
n
Enriquecimiento

Selectivos
Diferenciales
Selectivodiferenciales
Identificacin

MEDIOS DE CULTIVO
Consistencia
Lquid
os

Caldo
nutritiv
o

Caldos: nutrientes en
solucin acuosa

Uso: Obtencin de suspensiones con elevado N

de m.o.

Semislido

Slidos

Agar citratoSimmons

Agar
Mac
Conkey

Medio SIM

Adicin de agente
solidificante (agar 1,5%
p/v) al medio lquido

Adicin de agente
solidificante en meno
proporcin (0,75%
p/v)

Uso: aislamiento y mantenimiento de m.o. en el laboratorio

Uso: determinar movilidad de las especies en

estudio

MEDIOS DE CULTIVO
Origen

Complejo
s o
naturales
Componentes:
sustancias
complejas de origen
animal o vegetal
(lisados de casena,
carne, soja,
levadura), minerales
y otras sustancias.

La composicin qumica no se conoce

exactamente, y por consiguiente no es
rigurosamente constante.

Ej.: Caldo nutritivo, extracto de carne, extracto de

levaduras.

Sintticos
Componentes:
ingredientes
qumicamente puros

Composicin cuali y cuantitativa conocida

Por su costo slo se emplean en procedimientos

especiales

Ej.: medios basal de sales y agregado de una fuente de

carbono determinada.

Semi-sintticos
Componentes:
algunas sustancias
qumicas cuya
naturaleza y
cantidad se conoce
+ sustancias de
naturaleza y
composicin
indefinida; como
por ejemplo,
peptona como
fuente de
nitrgeno, etc.

MEDIOS DE CULTIVO
Composicin
Comun
es
Finalidad: crecimiento de la
mayor parte de los
microorganismos poco
exigentes.
Medios frecuentemente
utilizados para mantener
colonias microbianas.

Ej.: agar nutritivo

Enriquecidos
Adems de las sustancias nutritivas
normales, incorporan una serie de
factores (sangre, suero, leche,
huevo, bilis, etc.) indispensables
para el crecimiento de
microorganismos con grandes
exigencias nutricionales.

MEDIOS DE CULTIVO
Funcin
Enriquecimie
nto

Medios lquidos

Favorecen crecimiento de un tipo de m.o. e

inhiben el crecimiento de otros no deseados
presentes

Efecto inhibitorio: compuestos qumicos

especficos o aplicacin de condiciones fsicas
particulares (T, pH, etc)

Ej.: agua peptonada alcalina, favorece desarrollo

Vibrio cholerae (tolera pH elevado) e inhibe otros
m.o. presentes

Selectivo
Medios slidos.
Similar medios
enriquecimiento,
permiten desarrollo de
ciertos m.o. e inhiben a
otros.
Uso: seleccin y
aislamiento de m.o. a
partir de poblaciones
mixtas.

Ej.: Agar salmonella-

Diferencial
Contienen
sustancias
indicadores de la
actividad
metablica de
ciertos m.o. que
permite
diferenciarlos

Ej.: Agar EMB,

indicador de pH

MEDIOS DE CULTIVO
Funcin
Selectivodiferencial

combinan en un mismo
medio caractersticas
de un medio selectivo y
diferencial

Ej., agar Mac Conkey,

sales biliares y cristal
violeta inhiben Gram (+),
lactosa y rojo neutro
permiten distinguir entre

Identificacin
Medios destinados a
comprobar alguna
cualidad especfica que
permita identificar un
m.o.

Ej.: agar TSI

Transporte
Se usan cuando
transcurre un
tiempo entre toma y
procesamiento de
muestra
Sus componentes
aseguran
superviviencia de
las clulas hasta su
siembra sembradas
en medios
adecuados

SIEMBRA Y AISLAMIENTO
Siembra: Introducir artificialmente una
porcin de muestra (inculo) en un medio
apropiado con el fin de iniciar un cultivo,
que luego se incuba a una temperatura
adecuada para el crecimiento.

SIEMBRA Y AISLAMIENTO
Cultivo

puro:

Es
aquel que contiene un
slo
tipo
de
microorganismo y que
procede
generalmente
de una sola clula
Aislamiento: Procedimientos que se
realizan para obtener un cultivo puro a
partir de una muestra, con el objeto de
efectuar estudios qumicos, bioqumicos o
metablicos del microorganismo aislado.

SIEMBRA Y AISLAMIENTO
Tcnicas aspticas
Trabajar con instrumentos y medios de cultivo
previamente esterilizados.
Procurar que el inculo no se contamine,
modifique o destruya.
Mantener los tubos, placas y todo el material
estril cerrados cuando no se usen.
Recordar que el aire siempre contiene polvo
en suspensin que generalmente lleva consigo
una comunidad de microorganismos.

Trabajar cerca del mechero

ECNICAS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO

Hisopos

Pipetas

Ansas

Siembra en
Medio Lquido tubo
o
erlenmeyer
Siembra en
placa
Medio Slido
Siembra en
tubo

Estriado
Extensin en
superficie
Difusin en
profundidad
Pico de flauta o agar
inclinado
Por puncin o picadura

ECNICAS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO

Siembra en medio lquido
Uso: Obtencin de suspensiones con elevado N de m.o.
El crecimiento provoca enturbiamiento, formacin de
pelcula,
(1 o sedimento
(2
)

(3
)

(4
)

(5
)

Esquema de siembra asptica en medio lquido con asa

ECNICAS DE SIEMBRA Y AISLAMIENT

Siembra en medio slido
La
siembra
en
medio
slido
permite
AISLAMIENTO y RECUENTO de COLONIAS.

el

Colonia: agrupacin macroscpicamente visible

de microorganismos que resulta de la multiplicacin
de una clula aislada en la superficie del agar.

ECNICAS DE SIEMBRA Y AISLAMIENT

Siembra en medio slido: Siembra en
placa
Estriado
Permite obtener colonias aisladas a partir de una
muestra con elevado n de bacterias.

ECNICAS DE SIEMBRA Y AISLAMIENT

Siembra en medio slido: Siembra en
placa
Siembra por extensin en superficie
Siembra por difusin
(vertido en placa)

en

profundidad

Permite aislamiento y recuento de clulas.

ECNICAS DE SIEMBRA Y AISLAMIENT

Siembra en medio slido: Siembra en
tubos
Se emplean para inocular cultivos puros de
microorganismos
con
fines
de
(propiedades bioqumicas)
Agar
Puncin o
inclinado o
picadura
pico de
flauta

identificacin
Medio
semislido

Medio SIM

Ej.: agar TSI

Uso: determinar
movilidad de las
especies en estudio

RECUENTO DE COLONIAS
Recuento en placa
1) Preparar diluciones decimales seriadas de
la muestra para obtener colonias contables

Muestra
(homogenato)
10-1
10 ml de muestra
+
90 ml agua peptona

10-2

10-3

10-4

10-5

10-6

RECUENTO DE COLONIAS
2)
Siembra

Vertido en placa
(siembra por
profundidad)

Extensin en placa
(siembra en
superficie)

RECUENTO DE COLONIAS
3) Determinar N de unidades formadoras de
colonias (ufc)

- Luego de incubar las placas, se consideran para el recuento aquellas

que contengan entre 30-300 colonias
- Realizado el recuento se calcula el N de ufc/ml ( ufc/g)
- ufc= representa el nmero total de clulas viables en la

Ejemplo: clculo del N de ufc/ml

Volumen siembra: 0,5 ml

182 colonias
16 colonias

Dilucin A: 182 x 1/10-3 x 1/0,5 ml = 3,6 x 105ufc/ml

3,2 x 105ufc/ml

Dilucin B: 16 x 1/10-4 x 1/0,5 ml = 3,2 x 105ufc/ml

UROCULTIVO
(Protocolo de Rutina)

Actividades en clase
1 mL

10-1

0,5 mL

0,5 mL

Medio
1

0,5 mL
10-4

10-3

10-2

Medio
2