ANLISIS INSTRUMENTAL

TEMA 2
MTODOS
ESPECTROMTRICOS
Espectroscopia de MasasClase 4
Prof. Luis Pea

Contenido
Definicin, caractersticas y campo de aplicacin
Fundamentos del mtodo
Etapas del procedimiento
Componentes principales del equipo
Introduccin de la muestra e ionizacin
Analizadores de masas
Fragmentacin de molculas orgnicas

Definicin, caractersticas y campo de

aplicacin
La Espectrometra de Masas (MS) es un mtodo de anlisis
que se basa en la determinacin de masas de especies
atmicas o moleculares individuales de la muestra
analizada, lo que permite recabar informacin sobre:
su naturaleza
su composicin
su estructura

Definicin, caractersticas y campo de

aplicacin
Es la tcnica ms completa que existe por diversas razones:
amplia capacidad de identificacin (desde tomos a
molculas complejas)
puede identificar y cuantificar con slo pequeas
cantidades de muestras
posee una gran sensibilidad
universal y especfica, es capaz de analizar mezclas y de
detectar y separar una sustancia concreta en presencia de
una matriz compleja

Definicin, caractersticas y campo de

aplicacin
Tambin:
se puede acoplar con tcnicas como cromatografa
(CG/MS o HPLC/MS) para mejorar los resultados
proporciona informacin estructural
tcnica rpida (un espectro en dcimas de s). Se puede
utilizar para la monitorizacin de procesos, en tiempo real

Fundamentos del mtodo

CH3(CH2)3CH3 + e-

CH3(CH2)3CH3+ + 2e-

CH3(CH2)3CH3+

M/Z
Para un compuesto,
operando en idnticas condiciones, la fragmentacin
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es reproducible y por lo tanto caracterstica

Fundamentos del mtodo

En la identificacin de compuestos moleculares por MS se
trata de reconstruir la estructura de un compuesto como si
fuera un rompecabezas, siendo un ejercicio tanto ms
difcil cuanto ms elevada sea la carga.
Las fragmentaciones sucesivas de los iones siguen
mecanismos complejos. La tarea se simplifica si se
disponen de varios espectros registrados en condiciones
diferentes y de programas de ayuda para la interpretacin.

Fundamentos del mtodo

Se denomina Espectroteca (o biblioteca de espectros) a
una base de datos constituida por un gran nmero de
espectros de fragmentacin, entre los cuales, en caso
favorable, es posible encontrar el espectro del compuesto
estudiado.

Etapas del procedimiento

MUESTRA
(vaporizada)

Masa Molecular
Estructura
Grupo Funcional
NATURALEZA

Se somete a

IONIZACIN

Iones se
someten a

CAMPO ELCTRICO Y/O

MAGNTICO

DETERMINAR LA
ABUNDANCIA DE LA
RELACIN MASA-CARGA DE
LOS IONES

Se estudia sus
trayectorias

Etapas del procedimiento

En el espectrmetro de masas el compuesto pasa por las siguientes
etapas:
1.- Ionizacin: la muestra es vaporizada y a la vez ionizada en la
fuente del equipo. As, todo compuesto produce una mezcla
estadstica de iones de fragmentacin
2.- Aceleracin: los iones son focalizados y acelerados por
las lentes electrnicas. En funcin de su masa, los iones
formados tendrn distinta velocidad, pero igual energa
cintica inicial.
3.- Separacin: los iones son filtrados siguiendo
su relacin m/z por el analizador
4.- Deteccin: los iones chocan con el
detector
5.- Obtencin del espectro de masas

Principales componentes del

equipo

Introduccin de la muestra e ionizacin

Fuente iones: Sistema introduccin de muestra + Ionizacin
Sistema introduccin de muestra: se introduce la muestra al
interior equipo que opera en alto vaco (P< 10-6 mbar) por lo
que se vaporiza si no es gaseosa. Para muestras complejas
existen tcnicas acopladas de GC/MS, HPLC/MS, CE/MS
Tcnica ionizacin: en funcin del tipo de muestra (ms
habitual EI), se forman molculas ionizadas (iones
moleculares, M+) y fragmentos debidos a la descomposicin
de iones moleculares con exceso de energa

Introduccin de la muestra e ionizacin

El punto de arranque de un anlisis por espectrometra de
masas es la formacin de iones del analito en forma gaseosa
y la proyeccin y utilidad del mismo, est condicionada por el
proceso de ionizacin.
El aspecto de los espectros de masas para distintas
especies moleculares, depende en gran medida del mtodo
utilizado para la formacin de los iones.
En la tabla 1 se facilita un listado de numerosas fuentes de
iones empleadas en espectrometra de masas molecular

Introduccin de la muestra e ionizacin

Tabla 1. Fuentes de iones en espectrometra de masas
molecular
Tipo

Nombre y acrnimo

Agente ionizante

Fase gaseosa

Impacto de electrones (EI)

Electrones energticos

Ionizacin qumica (CI)

Iones gaseosos reactivos

Ionizacin por campo (FI)

Electrodo de elevado potencial

Desorcin por campo (FD)

Electrodo de elevado potencial

Ionizacin por electronebulizacin (ESI)

Campo elctrico elevado

Desorcin/ionizacin asistida por una

matriz (MALDI)

Haz de lser

Desorcin por plasma (PD)

Fragmentos de fisin del 252Cf

Bombardeo con tomos rpidos (FAB)

Haz de tomos energticos

Espectrometra de masas de iones

secundarios (SIMS)

Haz de iones energticos

Desorcin

Introduccin de la muestra e ionizacin

Tabla 2. Caractersticas de las fuentes de iones en MS
Tipo

Muestra

Aplicabilidad

Fase
gaseosa

Gaseosa, si est lquida

primero se volatiliza y
luego se ioniza

Estn restringidas a compuestos

trmicamente estables que
tengan puntos de ebullicin
menores de 500 C con PM <
1.000 aprox.

Desorcin

Lquida o slida, se
transforma directamente
en iones gaseosos

Se aplican a muestras no
voltiles y trmicamente
inestables, como no se requiere
volatilizacin stas pueden tener
PM > 100.000

Normalmente los espectrmetros de masas comerciales

estn equipados con accesorios que permiten el uso de
varias de estas fuentes de forma intercambiable

Introduccin de la muestra e ionizacin

Figura 3. Espectros de masa del 1-decanol: a) con una fuente dura, b) con una
fuente blanda

Introduccin de la muestra e ionizacin

Tambin se pueden clasificar los principales procedimientos
de ionizacin segn la presin a la que trabajen, as:
1) Al vaco:
a) Ionizacin por Impacto Electrnico (IE)
b) Ionizacin Qumica Positiva (IC)
c) Bombardeo por tomos rpidos (FAB)
d) Ionizacin por lser asistida por una matriz (MALDI)
2) A presin atmosfrica (API):
e) Por plasma de argn
f) Por spray

Introduccin de la muestra e ionizacin

Procedimiento de Ionizacin al Vaco:
Ionizacin por Impacto Electrnico (EI):
Es una fuente de iones dura, se introduce una muestra gaseosa
en la fuente de ionizacin, all las molculas no colisionan entre
s debido al vaco (10-6 mbar).
Las molculas neutras se encuentran (chocan) con una cortina
de electrones procedentes de un filamento incandescente
(tungsteno) obtenidos por efecto termoinico.
M + eAnalito

M+ + 2eIon Molecular

Introduccin de la muestra e ionizacin

Procedimiento de Ionizacin al Vaco:
Ionizacin por Impacto Electrnico (EI):
En el Impacto, si Eelectrn > Eionizacin, se arranca uno de sus
electrones, lo que implica la formacin de un ion molecular
portador de una carga elemental positiva.
Si el choque ha sido muy eficaz, la E comunicada por el electrn
ser mayor que la necesaria para la ionizacin, por lo tanto queda
el exceso de E en forma de Evibracional que provoca la fragmentacin
del in molecular por rotura de uno o varios enlaces.

Introduccin de la muestra e ionizacin

Procedimiento de Ionizacin al Vaco:
Ionizacin por Impacto Electrnico (EI):
Puede suceder:
Ionizacin sin exceso de Energa: iones moleculares
Ionizacin con exceso de Energa: fragmentos
Para un compuesto determinado, si se reproducen las
condiciones de ionizacin (energa e-), las proporciones relativas
del in molecular y los fragmentos sern fijas, constituyendo el
patrn de fragmentacin: ESPECTRO DE MASAS
(huella digital de la molcula analizada)

Introduccin de la muestra e ionizacin

Figura 5. Fuente de impacto de electrones

Introduccin de la muestra e ionizacin

Procedimiento de Ionizacin al Vaco:
Ionizacin por Impacto Electrnico (EI):
Se caracteriza por ser muy agresiva, comunica un exceso de E
a las molculas que se pretenden ionizar
Abundante fragmentacin con lo cual se obtiene informacin
estructural aunque disminuye la intensidad del in molecular
Si se requiere estudiar el in molecular existen tcnicas menos
agresivas, que producen un in molecular intenso y poca o nula
fragmentacin.

Introduccin de la muestra e ionizacin

Procedimiento de Ionizacin al Vaco:
Ionizacin Qumica (CI):
Es una fuente de iones blanda, se realiza mediante la reaccin
de las molculas neutras del analito (MH) con iones
procedentes de la ionizacin previa (EI) de un gas reactivo (CH4,
CH3CH2CH3, NH3, (CH3)3CH). Ella puede ser:
Positiva (CI+): Siendo metano el gas reactivo, al chocar ste
con electrones de alta energa reacciona para dar varios iones
como CH4+, CH3+ y CH2+, los dos primeros constituyen el 90 %
de los iones.

Introduccin de la muestra e ionizacin

Procedimiento de Ionizacin al Vaco:
Ionizacin Qumica (CI):
Estos iones reaccionan rpidamente con molculas de metano
adicionales como sigue:
CH4+

CH4

CH5+

CH3+

CH4

C2H5+

+
+

CH3
H2

Generalmente, las colisiones entre la molcula de la muestra MH

y CH5+ o C2H5+ son muy reactivas e implican la transferencia de
protones o de hidruros. Por ejemplo,

Introduccin de la muestra e ionizacin

Procedimiento de Ionizacin al Vaco:
Ionizacin Qumica (CI):
CH5+

MH

MH 2+

CH4

ion (M+1)+
C2H5+

MH

MH 2+

C2H4

Transferencia
de protones

Transferencia
de protones

ion (M+1)+
C2H5+

MH

M+

C2H6

ion (M-1)+

Transferencia
de hidruros

En algunos compuestos, tambin se encuentra un pico (M+29) +, que

resulta de la transferencia de un ion C2H5+ al analito.

Introduccin de la muestra e ionizacin

Procedimiento de Ionizacin al Vaco:
Ionizacin Qumica (CI):
Positiva (CI+) CH4
NH3

CH5+ + MH

CH5+, C2H5+
NH4+

CH4 + MH2+ (M+1)+

Proporcin: 103 molculas gas reactivo por cada molcula

problema, de esta forma la reaccin normal ser la producida
por un in reactivo del gas y una molcula neutra problema

Introduccin de la muestra e ionizacin

Procedimiento de Ionizacin al Vaco:
Ionizacin Qumica (CI):
Negativa (CI-):Se utiliza ocasionalmente en aquellos analitos
que contienen tomos muy electronegativos.
MH

R-

RH

Mion (M-1)-

MH: analito
M- : ion muy estable, ausencia fragmentacin
R-: Gases como Cl- (procedente diclorometano), OH-

Analizador de masas
Su funcin es limitar los iones que llegan al detector
permitiendo que lo hagan aquellos que posean un estrecho
intervalo de masas.
Existen dos tipos
importantes:
De sector magntico
De sector elctrico

Analizador de masas
Analizador de Sector Magntico
El campo magntico B ejerce una fuerza lateral que desva los iones de su
trayectoria en funcin de su masa y su velocidad. Variando B los iones de
diferentes masas se van enfocando sucesivamente en la rendija del colector
y son detectados secuencialmente segn sus masas, en orden creciente o
decreciente.
Para un valor dado de campo magntico (B) y de potencial de aceleracin
(V), slo los iones de m/z determinada seguirn trayectorias curvas de radio
R y se enfocarn en un punto al final del campo magntico. Los iones de
masa superior (mayor R) y los de masa inferior (menor R) no llegan al
colector.

Analizador de masas
Analizador de Sector Elctrico

Cuadrupolo:

Formado por 4 barras o polos de seccin cilndrica alineadas paralelamente entre s y

equidistantes de un eje central imaginario situado sobre el eje z
Mediante la aplicacin a cada pareja de barras opuestas de voltajes variables de
corriente continua (DC) y de corriente alterna (AC) superpuestos se consigue que iones
de masas determinadas pasen por el tnel formado por las 4 barras, siguiendo
trayectorias oscilantes estables que conducen al detector mientras que las dems
masas se desvan. Variando los voltajes se podrn ir enfocando de modo sucesivo las
diferentes masas presentes y as obtener el espectro.

33

Fragmentacin de Molculas Orgnicas

m/z
CH4

CH4+

16 Pico Base

CH3+

15

iones con exceso de E

CH2+

14 que se descomponen

CH+

13 formando distintos

C+

12 iones fragmento

Las intensidades relativas de los picos son una medida de la

abundancia relativa de cada uno (patrn de fragmentacin)

Fragmentacin de Molculas Orgnicas

Se pueden tener:
Espectro de alta resolucin: en ellos la medida de la masa
exacta del in molecular puede ser suficiente para
identificar el compuesto analizado, distinta masa

Espectro de baja resolucin: N2, CO, CH2=CH2 misma masa

(PM=28)

Patrn de Fragmentacin
Como vemos, el patrn de fragmentacin tambin nos
ayuda a interpretar el espectro de baja resolucin, por
ejemplo para el caso de N2, CO y CH2CH2 todos con igual
masa molecular 28 g/g-mol.

100
90
80
70

60
Para el
N 2:
50

Abundancia relativa

40
30
20
10
0

14

15

28

Relacin m/z

29

30

En el espectro del
nitrgeno, adems del
ion molecular y del
(M+1)+, podemos ver
el fragmento de masa
14 correspondiente al
tomo de nitrgeno

Patrn de Fragmentacin

100
90
80
70
60
Para
el CO:
Abundancia relativa 50
40
30
20
10
0

12

13

16

Relacin m/z

28

29

30

En el espectro del
monxido de carbono,
aparecen los
fragmentos de masa
16 y 12
correspondientes al
oxgeno y al carbono

Patrn de Fragmentacin

100
90
80
70
60

Para el5040 CH2=CH2:

Abundancia relativa

30
20
10
0

12 13 25 26 27 28 29 30
Relacin m/z

En el espectro del
etileno hay varios
fragmentos
procedentes de la
prdida de uno o
varios protones,
adems del ion
fragmento de masa
12 correspondiente al
carbono.

Fragmentacin de Molculas Orgnicas

Si analizamos mezclas de varios compuestos, el espectro
resultante puede interpretarse a partir de los patrones de
fragmentacin de cada uno de ellos (deconvolucin)

Aunque siempre que se pueda es mejor separar antes los

compuestos empleando tcnicas cromatogrficas

Ejercicios
Ejercicio 1:
A continuacin se presentan los espectros IR y MS para
dos compuestos en particular, trate de identificarlos
explicando de forma razonada sus argumentos.
Seale en los espectros las lneas/bandas que le permiten
hacer la identificacin.

Ejercicios
Compuesto A

Ejercicios
Compuesto B