Lic.TM. Mara del Carmen Quispe M.

Instituto Nacional de Salud del Nio

Servicio de Microbiologa
mcqm_es@yahoo.com

La ITU generalmente es monobacteriana. El

grmen ms frecuente es Escherichia coli (85%),
seguido por Klebsiella pneumoniae, Proteus
mirabilis, Candida sp., Enterobacter sp .Con menos
frecuencia es causada por otras enterobacterias,
Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus spp.
Staphyloccocus saprophyticus es un agente
relativamente frecuente de ITU baja
.Staphylococcus aureus puede observarse en
pacientes con sonda vesical o en ITU hematgena.
Staphylococcus epidermidis se considera como un
contaminante de la piel y raramente causa ITU.
Hasta en 15% de personas con sntomas de ITU no
se asla germen en el urocultivo

Las muestras deben venir

acompaadas de su
respectiva hoja de pedido
donde deben llenarse todos
los datos solicitados por el
laboratorio:
Nombre y Apellido completo
N de Historia Clnica
edad
sexo
servicio y cama
tipo de muestra: catter,
suprapbica, etc.
recibi antibiticos en los
ltimos 7 das, si es as
anotar nombre del ATB y
dosis
control o sospecha de algn
germen anterior

Los viales, tubos o frascos

donde se colocan las
muestras deben ser
estriles con tapn
hermtico.
Las muestras se deben
obtener antes de iniciar el
tratamiento antibitico, si
no es as registrar que
tratamiento
antimicrobiano sigue el
paciente, o 72 horas de
finalizado el tratamiento.

Si las solicitudes y/o las muestras no cumplen los requisitos

mnimos indispensables para su correcto procesamiento el
laboratorio deber aclarar las discrepancias con el servicio que el
envo, previo a su realizacin y en algunos casos ser imposible
su procesamiento hasta que se enve la muestra correcta.
Muestras que no evidencian ser refrigeradas + de 2 horas de
coleccin.
Rechazar orinas de ms de 24 horas colectadas.
Rechazar la orina obtenida con el mismo mtodo de coleccin
dentro de las 48 horas de recepcionar la primera muestra. Llamar
al servicio si es duplicada.
Rechazar muestras de Sonda foley es inaceptable para
urocultivos,
Rechazar la orina de la bolsa de un paciente con catter.
Si ha sido inadecuadamente colectada, transportada y
manipulada la muestra no debe ser recepcionada, documentar al
final de la orden la calidad de la muestra y notificar al servicio de
procedencia y/o al padre del paciente.

Preferentemente se debe obtener la primera orina de la maana

( ya que se trata de una muestra ms concentrada). De no ser
posible, el paciente debe abstenerse de orinar durante las 3 horas
previas al examen para disminuir los falsos negativos.
No forzar la ingestin de lquidos, ya que con ello se diluye la
orina, alterando el recuento.
Volumen recomendado a recolectar: 25 a 50 ml.
Volumen mnimo: Es suficiente un volumen de orina de 5-10 ml.

Lactantes y nios menores:

* Si un lactante menor de 2 aos tiene fiebre de causa inexplicada
y aparenta lo suficientemente enfermo como para necesitar una
terapia antimicrobiana inmediata, debe tomarse una muestra de
orina por cateterizacin vesical o puncin suprapbica.

* Si el estado clnico del paciente, determina que el mismo no

requiere medicacin antibitica inmediata, la muestra puede
tomarse por mtodos no invasivos (dos muestras tomadas al
acecho). No se recomienda utilizar bolsa colectora pues tiene un
85% de posibilidad de falsos positivos pero si es indispensable
cambiarla cada 30 minutos.

Se considera una etapa

crucial en el procesamiento
de los urocultivos ya que la
posibilidad de contaminacin
con bacterias de la flora
comensal de piel, perin y
uretra distal, es muy alta e
induce a la generacin de
resultados falsamente
positivos. La Sociedad
Americana de
Microbiologa considera
aceptable un porcentaje
de contaminacin en las
muestras de orina no
superior a 5%.
Se describen al menos 5
mtodos para la obtencin de
orina a cultivar, los que se
muestran en la Figura 1.

La orina es un buen medio de cultivo que permite

la multiplicacin de los microorganismos
incrementando el recuento bacteriano, por lo que
las muestras deben procesarse antes de 2 horas
de obtenidas. Si ello no es factible, las muestras
deben refrigerarse a 4C. Una muestra puede
mantenerse refrigerada, sin que se altere el
recuento bacteriano, durante 24 horas.
Los preservantes que inhiben la multiplicacin
bacteriana no han resultado mejores que la
refrigeracin, son de alto costo y tienen el
inconveniente de interferir con algunas
determinaciones de la tira reactiva de orina.

MEDIOS

Las bacterias para su desarrollo requieren de sustancias nutritivas

cuyos componentes bsicos deben satisfacer las mnimas
exigencias nutricionales y condiciones de atmsfera (aerobiosis,
anaerobiosis, microaeroflia), pH y temperatura ptima para su
crecimiento in vitro.
La eleccin de los medios de cultivo se realiza en funcin a la
localizacin de las infecciones y las bacterias a investigar. Los
errores cometidos durante este paso del ciclo de procedimientos
pueden invalidar la lectura e interpretacin de los cultivos.
Los medios usados son:
Placas con agar sangre de carnero (AS)
Placas con agar Mc Conkey (McC)
Otros medios: para hongos si es necesario Agar Sabouraud

Asa calibrada: asas de de platino o descartable , se pueden usar

las siguientes medidas:
0.001 ml ( 1ul) para detectar colonias mayores de 1000 UFC/ml
0.01 ml (10ul) para detectar colonias entre 100 1000 UFC/ml

I.- MICROSCOPIA Y OTROS METODOS DIRECTOS

Tincin de Gram y Examen directo de la muestra

Es un mtodo rpido, econmico, sensible y especfico para

detectar bacteriuria. Para determinar el tipo y conteo de bacterias
y clulas en la orina. Se recomienda realizarlo como respaldo
frente a discordancias o hallazgos especiales ms que como
screening. Para pacientes hospitalizados es muy til en ayuda al
diagnstico como causa de sepsis antes que un cultivo
hemocultivo positivo.
Debe aplicarse a la muestra recin agitada sin centrifugar, con el
mismo asa de 1l (o de 10 l) empleado en la siembra del
urocultivo, depositando este volumen en un portaobjetos; pueden
colocarse hasta 10 muestras por lmina. Estas se tien y pueden
ser observadas cuando existen discordancias entre el urocultivo y
el examen directo.
La presencia de una bacteria/campo de inmersin tiene
buena correlacin con > 100.000 UFC/ml en ~ 85% de los casos.
La presencia de muchas clulas epiteliales y morfotipos
microbianos diferentes sugieren contaminacin.

La metodologa de la inoculacin de la muestra en medios

de cultivo o siembra microbiolgica depende de la forma
de obtencin de la muestra:
Para orinas de segunda miccin, recolector y catter
a permanencia, las muestras deben sembrarse con asa
de 1 l en placas de un medio enriquecido como Agar
Sangre y algn medio selectivo-diferencial: Agar Mac
Conkey. El desarrollo de una colonia en el cultivo debe
multiplicarse por 1000.
Para orinas obtenidas por cateterizacin vesical, las
muestras pueden sembrarse con asa de 10 (1 colonia =
100 ufc/ml) y 1 l (1 colonia = 1000 ufc/ml).
Para orinas obtenidas por puncin vesical, se recomienda
la siembra en agar sangre ms un medio selectivodiferencial para bacilos Gram negativos o siembra directa
de 100 l (1 colonia = 10 ufc/ml).

Usar el asa calibrada,

flamear, dejar enfriar,
mantener en posicin
vertical introducir lsolo el
aro debajo del nivel de la
orina previa mezcla de la
orina sin centrifugar.
Estriar en la placas de
cultivo de la siguiente
manera:
Estriar de arriba hacia el
centro de la placa y estriar
la orina en una serie de
pasos de ngulo de 90 a
travs del inculo (solo para
el mtodo de 0.001 ml).
Otra forma es dejar la
muestra con el asa en el
primer cuadrante y estriar
en V, luego proceder con los
otros cuatro cuadrantes
siguientes.

Sin flamear el asa estriar atravesndola lnea del inoculo en el

sentido de las flechas.
Incubacin
Una vez sembradas las placas deben incubarse durante 24 horas a
35 - 37 C. Incube 48 horas aquellos urocultivos negativos con
sedimento urinario alterado.
Si es conveniente incubar en atmsfera de CO2 5% las placas de
Agar Sangre si se requiere para el crecimiento de gram positivos.

Al momento de informar los urocultivos, se

recomienda revisar el resultado del sedimento
para que ambos informes sean concordantes.
Es necesario definir qu se entiende por
sedimento sugerente de ITU para poder evaluar
las discordancias entre el sedimento y el
urocultivo:
Piocitos: > 10 /ul > de 5-6 por campo de 40x
Leucocitos: > 10 /ul > de 5-6 por campo de 40x
Bacterias: Regular o abundante cantidad
La presencia de clulas descamativas y/o mucus
en una paciente mujer, sugiere que la muestra
est contaminada con secrecin vaginal.

Examinar los cultivos que han sido incubados toda la noche

para una lectura final de mnimo 18 horas al menos que la
muestra requiera otras recomendaciones.
Reincubar el cultivo por 48 horas ,de ser posible, solicitar
nueva muestra si sigue alguno de estos criterios:
La muestra ha sido obtenida por una tcnica invasiva, como
PSP o por Cateterizacin.
Pequeas o pocas colonias que hacen una lectura
discernible.
Los resultados no correlacionan con la tincin gram o la
sintomatologa clnica ( Ej.: piuria o con sintomatologa y
cultivo negativo)
Paciente inmunosuprimido incluye pacientes que han sido
transplantados.
Se requiere cultivo para hongos o levaduras ( ejm: cultivos
de UCI neonatal)
Comunicarse con el mdico tratante ya que existen otras
causas de sedimento urinario alterado que no corresponden
a ITU o para saber si el paciente est recibiendo antibiticos.

Recuento de colonias de acuerdo al asa calibrada

usada, multiplicar segn la dilucin.
0.001 mL
1 colonia = 1000 UFC/ml
0.01 mL1 colonia = 100 UFC/ml
Cuando las colonias son tan numerosas para el
recuento, tener en cuenta que el mximo de una asa
de 0.001 es
> 10 UFC/ml y el mximo para el asa de 0.01 es
>10 UFC/ml.
Mantener la cepa de Streptococcus grupo B por 7
das a temperatura ambiente por si la susceptibilidad
sea requerida ms adelante.
Mantener los cultivos de levaduras por 7 das a
temperatura ambiente por si sea requerida ms
adelante.
Trabajar los criterios de acuerdo a las tablas 1 , solo
sirven de gua.

REPORTE DE RESULTADOS
a) Reporte de la Tincin Gram: resultados de bacterias y clulas.
b) Cultivos Negativos,
Reportar: de acuerdo al asa calibrada utilizada.
Negativo dil 1/100UFC/ml o
Negativo dil 1/1000 UFC/ml. por 24 o 48 horas.
c) Cultivos positivos, reportar:
Si solo se observa flora microbiota de piel o urogenital: 10000 UFC/ml
microbiota urogenital normal.

Segn TABLA 1 sobre cultivos mixtos reportar: Rcto. UFC/ml seguido

Multiples morfotipos presentes, posible contaminacin y nueva muestra en
condiciones adecuadas.
Reportar el recuento de colonias de cada patgeno separadamente seguido por
la identificacin presuntiva o definitiva con la susceptibilidad

Cuando se observa inhibicin por antimicrobianos, reportar: Se detect inhibidor

antimicrobiano con su recuento respectivo.

Si no hay crecimiento en la zona primaria pero si en inculo diludo , no reportar

recuento pero si Rcto. disminudo debido a inhibicin antimicrobiana.
Notificar al clnico posibles hallazgos inusuales (Ejm: Salmonella tiphy o
Burkholderia pseudomallei).

TABLA 1. INTERPRETACIN MICROBIOLGICA DEL

UROCULTIVO Y CONDUCTA RECOMENDADA
Recuento de
colonias
(UFC/ml)

Condicin
clnica
o mtodo de
recoleccin

Sedimento
urinario

Microorganismo
aislado

Interpretacin/
Conducta
recomendable

Independiente
del resultado

Urocultivo negativo

Cualquier
recuento

Puncin
suprapbica

Independiente
del resultado

Cualquier
microorganismo

Identificacin y
estudio de
susceptibilidad

1.000

Cateterizacin
transitoria

Independiente
del resultado

< 2 especies
uropatgenas

Idem

> 10.000

Segunda
miccin en
paciente
especial*

Independiente
del resultado

< 2 especies
uropatgenas

Idem

> 10.000

Orina por
catter
permanente

Patolgico

< 2 especies
uropatgenas

Idem

> 10.000

Segunda
miccin

Patolgico

< 2 especies
uropatgenas

Idem

Recuento de
colonias
(UFC/ml)

Condicin
clnica
o mtodo de
recoleccin

Sedimento
urinario

Microorganismo
aislado

Interpretacin/
Conducta
recomendable

> 100.000

Segunda miccin

Patolgico

2 uropatgenos +
otra bacteria con
recuento 10 veces
menos

Identificacin y
susceptibilidad
slo de los
uropatgenos

> 100.000

Segunda miccin

Sin antecedente
del sedimento

< 2 especies
uropatgenas

Identificacin y
estudio de
susceptibilidad

> 100.000

---

---

>3
microorganismos,
sin predominio de
alguno

Polimicrobismo.
Solicite nueva
muestra

a) En pacientes sin sonda vesical, la cuenta significativa de bacterias en orina es la

presencia de mas de 10 UFC / ml de un solo germen, se confirma en 92% de
casos si el germen aislado es gram negativo y en 70%, si es gram positivo.
Recuentos entre 10 y 10 UFC/ml, si el paciente es sintomtico o si el germen es
S. saprophyticus o Enterococcus spp. hacen diagnstico de ITU.

b) Los recuentos intermedio de 10- 10 UFC / ml indican infeccin si el

procedimiento de recoleccin de orina fue realizado correctamente. Grmenes
normalmente encontrados en la piel o genitales externos e internos. Pero en
ciertas circunstancias recuentos de 10 UCF/ml o ms especialmente por
Salmonella o Shigella pueden ser considerados significativos

c) Generalmente, el aislamiento de tres o ms especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccin inadecuada o demora en la siembra.

d) En pacientes con sonda vesical, cuentas bacterianas menores de 10 UFC / ml

pueden tener significado, as tambin se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15% de enfermos.

e) En pacientes sin catter se puede comprobar si el procedimiento de obtencin

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 - 104 UFC / ml. En pacientes
sin infecciones del tracto urinario, el recuento es nulo o se reduce a pocas colonias.

f) En muestras obtenidas por puncin suprapbica, el desarrollo de

una sola colonia en el medio de cultivo indica infeccin del tracto
urinario.

g) Si en el urocultivo desarrolla flora polimicrobiana, sospechar

contaminacin y repetir el estudio. Sin embargo hay situaciones en
que la flora puede ser polimicrobiana: portador de sonda vesical,
vejiga neurgena , fstula vsico-intestinal o vsico-vaginal

h) Cuando el urocultivo es positivo y el paciente est asintomtico,

es necesario repetir el estudio.

i) Proceso del antibiograma de la orina directa no se recomienda.

NOTA 1: Se usar asas de siembra 0.001 mL para todas las muestras

de orina a excepcin de aquellas procedentes de aspirados

suprapbicos, de infantes, de nios y de pacientes con tratamiento
antimicrobiano, las cuales se inocularn con asas de 0.01 mL debido
a que en dichos pacientes pueden haber infecciones del tracto
urinario asociados a recuentos menores de 10 UFC/ mL.

Para ITU no complicadas, los cultivos generalmente no

estn indicados, el curso de 3 das de terapia es suficiente
para la cura. Los cultivos y susceptibilidad son tiles en
infecciones recurrentes.
En casos de piuria steril , La tincin Gram es importante.
Si el organismos es visto y no creci en cultivo, cultivo
anaerbico debe ser indicado.
Falsos negativos se deben a interferencia de sustancias,
orina diluda.orina con pH bajo y la interpretacin subjetiva
de los criterios.
La presentacin de ITU puede ser similares a las
infecciones vaginales. El cultivo vaginal N. gonorrhoea e,
Chlamydia y otros agentes de transmisin sexual deben ser
considerados. Agentes de vaginitis o vaginosis pueden ser
includos, como son Gardnerella vaginalis, Micoplasmas,
Candida albicans, otras levaduras y Trichomonas.

 Muchas

gracias

mcqm@hotmail.com