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Francy Julieth Atuesta Hernndez.

D ETER M IN A C I N D E
P LO M O IN O R G N IC O EN
O R IN A

Indicadores de
exposicin
LA PLUMBURIA (Pb-U)

se expresa en g/g de
creatinina o en g/l de orina
de 24 horas. La muestra de
orina
se
recoge,
en
recipientes exentos de plomo
y debe ser mantenida entre
2 C y 8 C de temperatura.
Debe
tenerse
especial
cuidado
en
evitar
la
contaminacin ambiental de
la muestra. La plumburia se
determina por mtodos de
absorcin atmica. El valor
normal de Pb-U es inferior a
50 g/g de creatinina.

CIDO DELTA
AMINOLEVULNICO
Indicadores
de efecto
URINARIO (ALA-U)

La
acumulacin
de
ALA
y
posterior aumento de la excrecin
urinaria del ALA-U se produce
como
consecuencia
de
la
inhibicin del plomo sobre el ALAD y la estimulacin del ALAsintetasa. Numerosos estudios
han demostrado que la excrecin
urinaria de este indicador est
asociada a la cantidad de plomo
metablicamente activo en el
organismo, lo que podr indicar
su utilizacin para evaluar la
cantidad de plomo movilizable
antes del tratamiento quelante
Se mide en mg/g de creatinina.
Como tcnica analtica se utiliza
el mtodo Davis.

Determinacin de plomo en orina - Mtodo de


quelacin-extraccin / Espectrofotometra de
absorcin atmica

la determinacin de plomo en orina

por espectrofotometra de absorcin


atmica con llama, en un rango de
concentraciones de 50-300 g de
Pb/litro
de
orina
(0,241,45
mol/litro).
El mtodo es til para realizar el
seguimiento
de
poblaciones
laborales potencialmente expuestas

Fundam ento
La muestra de orina se recoge en un frasco
de polietileno, utilizando cido ntrico como
conservante. El plomo se compleja con
pirrolidinditiocarbamato de amonio (APDC) y
el complejo se extrae con isobutilmetilcetona
(MIBK). El plomo contenido en la fase
orgnica s determina por espectrofotometra
de absorcin atmica con llama a una
longitud de onda de 283,3 nm, utilizando un
mtodo directo de cuantificacin.

Tom a de m uestra
Las muestras de orina, preferentemente de 24 horas,
se toman en frascos de polietileno que contienen 0,5
ml de cido ntrico concentrado. Despus de
homogeneizar la muestra agitando, se transfiere una
alcuota de 40 ml a un frasco para enviar al laboratorio.
Hasta el momento de efectuar el anlisis, las muestras
deben conservarse refrigeradas.

P rocedim iento
Limpieza del
material

Todo el material de vidrio utilizado en


el anlisis, despus de su lavado,
debe mantenerse sumergido durante
varios minutos en cido ntrico 1:1 y
ser
despus
cuidadosamente
enjuagado con agua bidestilada.

Preparacin de la
muestra
1. Pipetear 10 ml de orina en un tubo de centrfuga.
2. Aadir 1 ml de disolucin de Tritn X-100/APDC y agitar

mecnicamente durante 10 segundos.


3. Aadir 2 ml de MIBK saturada de agua, tapar el tubo
hermticamente y agitar durante 2 minutos invirtiendo
los tubos a intervalos regulares. El complejo APDC-Pb en
MIBK es poco estable, por lo que el anlisis debe
efectuarse lo antes posible y en cualquier caso antes de
las dos horas siguientes a la extraccin del complejo.
4. Centrifugar a 2.000 r.p.m. durante 10 minutos,
repitiendo la operacin si la separacin no es aceptable.
5. Por espectrofotometra de absorcin atmica con llama
a una longitud de onda de 283,3 nm

Preparacin de
patrones y curva de
calibracin

1. Preparar las disoluciones de 0,05; 0,1; 0,2 y 0,3 g


2.
3.
4.
5.

Pb/ml
De cada una de estas disoluciones pipetear 10 ml en
tubos de ensayo.
Con cada uno de los patrones se sigue el mismo
proceso que para las muestras
Debe someterse al mismo proceso que las muestras
y patrones un ensayo en blanco de agua bidestilada.
Con las lecturas obtenidas para los patrones,
corregidas con el valor del blanco, se construye la
grfica seal-concentracin, ajustando los puntos
obtenidos a una recta.

C lculos
Los resultados, expresados en micro gramo de plomo por
litro de orina se obtienen mediante la siguiente expresin:
Donde:
C = Concentracin de plomo en g/litro de
orina.
c = Concentracin de plomo en g/ml
leda en la curva de calibracin.
Los resultados pueden referirse a la cantidad de creatinina
presente en la muestra mediante la siguiente expresin

Determinacin del cido delta-aminolevulnico


(ALA) en orina - Mtodo de intercambio inico /
Espectrofotometra
La determinacin del cido delta-aminolevulnico (ALA) en

orina, utiliza un mtodo espectrofotomtrico.


Es aplicable a la determinacin de niveles de ALA fisiolgicos y
patolgicos de hasta 80 mg/I, equivalente a 66,7 mg/g
creatinina, para una creatinuria de 1,2 g/I.
La determinacin de ALA en orina es aplicable como parmetro
complementario del nivel de plomo en sangre, al seguimiento
de poblaciones laboralmente expuestas a plomo o sus
compuestos inicos, especialmente en el caso de niveles de
exposicin altos (plumbemias superiores a 35 g/100 ml).
Como factores que pueden influenciar el aumento de ALA en
orina, aparte de la exposicin a plomo o sus compuestos
inicos, hay que tener en cuenta el alcoholismo agudo,
enfermedades graves del hgado y algunas formas de porfirias
hepticas

Fundam ento
La orina se hace pasar a travs de un sistema de
dos columnas de intercambio inico. En la primera,
que contiene una resina aninica, queda retenido
el porfobilingeno junto a otras interferencias.
Sobre la segunda, conteniendo una resina
catinica, se retiene el ALA, que es posteriormente
eludo con acetato sdico. A continuacin se hace
reaccionar con acetilacetona a pH 4,6 formndose
un compuesto pirrlico que a su vez reacciona con
el p-dimetilaminobenzoaldehido del reactivo de
Ehrlich, dando un cromgeno de color rosado que
se mide espectrofotomtricamente a 553 nm

Tom a de m uestra
Recoger la orina de 24 horas. Aadir 3 ml
de cido clorhdrico concentrado. Mezclar
bien y medir el volumen total. Conservarlo
refrigerado. En estas condiciones el ALA es
estable al menos en 2 semanas.

P rocedim iento
Columnas de
intercambio
inico
Se realiza una suspensin de la resina,
utilizando 3 g de resina y 7 ml de agua para
cada columna. Se depositan 10 ml de dicha
suspensin en una columna de vidrio o
plstico, convenientemente cerrada con
vidrio o algodn, de manera que resulte una
columna de 2 cm de altura y 1,5 cm de
dimetro.

Preparacin del
patrn
Disolucin patrn de ALA (0,2 mg/ml).
Pesar 25,6 mg de ALA-HCI , disolvindolo y
aforndolo a 100 ml, con la disolucin
tampn pH = 4,6
Disolucin patrn de trabajo de ALA (2
mg/100 ml)
En el momento del anlisis, diluir 1.0 ml de
la disolucin patrn de ALA a 10.0 ml con
tampn acetato de pH = 4.6

Procedimiento de
anlisis
1. Colocar

2.
3.

4.

5.

la columna que contiene la resina


aninica sobre la catinica de manera que la
primera descargue sobre la segunda.
Pipetear en la columna superior 1,0 ml de la
muestra de orina y 20,0 ml de agua bidestilada
Retirar y descartar la columna superior y
reemplazar el matraz por un tubo de ensayo de
15 x 100 mm.
Pipetear 10,0 mL de la disolucin de acetato
sdico 1 M en la columna restante, recogiendo el
eluato en su totalidad
Aadir a cada tubo 0,2 ml de acetilacetona.

6.Preparacin de blanco y patrn:

Blanco: 10,0 ml de acetato de sodio 1 M y 0,2 ml de


acetilacetona.
Patrn: 9,9 ml de acetato de sodio 1 M; 0,1 ml de
disolucin patrn de trabajo de ALA y 0,2 ml de
acetilacetona.
7.agitar enrgicamente los tubos de muestras, blanco y
patrn y mantenerlos al bao Mara hirviente durante 10
minutos.
8. En cubetas adecuadas colocar alcuotas de 1,0 ml del
blanco patrn y muestras. Aadir a cada una 1,0 ml del
reactivo cromgeno.
9.Mezclar y esperar 15 minutos para que se desarrolle el
color
10.
Leer las absorbancia a 553 nm frente al blanco. La
coloracin obtenida es estable slo durante 15 minutos
por lo que es necesaria su medida antes de que
transcurra este periodo.

C lculos
La concentracin de ALA en orina se calcula
mediante las siguientes ecuaciones:
donde Cp es la
concentracin de
ALA en mg/100 ml
del patrn

Referencias
INSTITUTO NACIONAL DE SEGURIDAD E HIGIENE EN EL

TRABAJO. Determinacin de plomo en orina - Mtodo de


quelacin-extraccin / Espectrofotometra de absorcin
atmica.
Espaa.
disponible
en:
http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacio
n/FichasTecnicas/MetodosAnalisis/Ficheros/MB/MB_013_A
87.pdf
INSTITUTO NACIONAL DE SEGURIDAD E HIGIENE EN EL
TRABAJO. Determinacin del cido delta-aminolevulnico
(ALA) en orina - Mtodo de intercambio inico /
Espectrofotometra.
Espaa.
Diponible
en:
http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacio
n/FichasTecnicas/MetodosAnalisis/Ficheros/MB/MB_016_A
87.pdf

G racias