Enzimologa

Las enzimas son:

C6H12O6 + 6 O2 -> 6CO2 + 6 H2O

G -2870 kJ/mol

- 2 ATP

+ 2 NADH + H+
+ 2 ATP
+ 2 ATP
+ 2 NADH + H+

+ 1 ATP
+ 3 NADH + H+
+ 1 FADH2

Las enzimas son protenas altamente especializadas. Funcin:

catlisis (o regulacin de la velocidad) de las reacciones qumicas
en los seres vivos.

E+S

[ES]

E+P

Las enzimas son protenas* que catalizan

reacciones qumicas
Muchas reacciones requeriran condiciones extremas de
presin, temperatura o pH sin catalizador, pero ocurren en
condiciones fisiolgicas con enzimas.

Ej. Glc ----> CO2 + H2O en un calormetro =

Las enz. aceleran a 1010 a 1014 veces ms rpido

que las reacciones no catalizadas.
Ureasa en orina = 1014 (significa que una reaccin
que catalizada toma 1 segundo podra tomar 3 millones
de aos sin estar catalizada).
* En su mayora son protenas, hay ARN con capacidad cataltica (ribozimas)

Estructura de una enzima

Las protenas enzimticas estn formadas por una gran cantidad de aminocidos
(AA), que cumplen funciones diferenciadas:

No esenciales, estructurales, de unin y catalticas.

Los AA no esenciales pueden ser reemplazados y, en algunos casos,
eliminados sin prdida significativa en la funcin o conformacin de una
enzima.
Los AA estructurales = conformacin de la enzima, "forman su
esqueleto".
Los AA de unin = asociacin entre la enzima y el sustrato.
Los AA catalticos = transformacin del sustrato.

Aspectos generales de las enzimas

Las enzimas son catalizadores
especficos: cada enzima cataliza un solo
tipo de reaccin y casi siempre acta sobre
un nico sustrato o
un grupo muy reducido de ellos.

Sustrato: sustancia sobre la que acta la enzima

Especificidad de funcin de las enzimas

Mecanismo de la reaccin
enzimtica

En toda reaccin qumica se produce

la transformacin de una sustancia
inicial, denominada sustrato (S), en
una sustancia final o producto (P)
segn la siguiente anotacin:

Reaccin catalizada por una enzima:

centro activo regin concreta de la enzima donde el sustrato se une
Enzima y su
sustrato

E+S

Unin al centro
activo

ES

Formacin de
productos

Complejo enzima-sustrato

E + P

El centro activo comprende

un sitio de unin formado por los aminocidos que
estn en contacto directo con el sustrato y
un sitio cataltico, formado por los aminocidos
directamente implicados en el mecanismo de la reaccin
Centro activo: Es el sitio donde estn los AA de unin al S y
los AA que median el efecto cataltico de la enzima.
(uniones intermoleculares de la enzima c/el S en una orientacin tal que
encajan correctamente, como las piezas en un rompecabezas ).

El sustrato se une a la enzima luego se inicia la catlisis

Sitio de unin: es el que le da la especificidad a la enzima

Sitio
cataltico

Nomenclatura
Hay varias formas de nombrar una
enzima:
nombres particulares
nombre sistemtico
cdigo de la comisin de
enzimas (EC = Enzyme Comission)
de la UIB

Nomenclatura:
nombres particulares
Antiguamente, los enzimas reciban nombres
particulares, asignados por su descubridor.
Ejemplos:

amilasa (hidrolisa el almidn)

glucoquinasa
Glc + ATP Glc-6P + ADP

Al ir aumentando el nmero de enzimas conocidas,

se hizo necesaria una nomenclatura sistemtica que
informara sobre la accin especfica de cada enzima
y los sustratos sobre los que actuaba.

Clasificacin y
Nomenclatura:
Comisin de Enzimas
Clases

1.
2.
3.
4.
5.
6.

xido-reductasas
Transferasas
Hidrolasas
Liasas
Isomerasas
Ligasas

Nomenclatura:
Comisin de Enzimas

Ej.: la ATP: glucosa fosfotransferasa

(glucoquinasa)
Glc + ATP Glc-6P + ADP
Glucoquinasa

EC 2.7.1.2.
2: transferasa
7: fosfotransferasa
1: el aceptor es un grupo OH
2: es un OH de la D-glucosa el que acepta el grupo
fosfato.

Creatin fosfo quinasa

Dmero: M (msculo) B (cerebro)
separables por electoforesis (mtodo de
estudio)
Cerebro = BB (CPK1 - rpida)
Msculo esqueltico= MM (CPK3 - lenta)
Corazn = MB (CPK2 - intermedia) h. 6%
de la CPK total = 10-50 UI/L a 30C.

Clasificacin de enzimas
CK o CPK = EC 2.7.3.2: Creatina kinasa
Clases
Subclases
Subsubclases
Orden
Wiki

CPK o CK
ATP + Creatina (c. Alfa-metil guanidoactico)

ADP
HO3P-

Fosfocreatina
CH3

Lactato deshidrogenasa LDH

Tetramrica c/2 subunidades distintas: H
de corazn y M de msculo, que se
combinan de 5 formas.
LDH1 HHHH Miocardio y
LDH2 HHHM Miocardio y GR
LDH3 HHMM Cerebro y rin
LDH4 HMMM Hgado y Msc. Esquel.
LDH5 MMMM Msculo Esqueltico

Isoenzimas de Amilasa (AMI)

alfa-Amilasa -amilasa, EC 3.2.1.1 (1,4--D-glucan
glucanohidrolasa; glicogenasa) metaloenzima (dependiente de
Ca). Corta enlaces glicosdicos alfa-1,4 al azar o at random.
En animales es la mayor enzima digestiva y su pH ptimo es 6.7-7.0.
En el H amilasa salivar y pancretica son alfa-amilasas. Esta forma es
tambin hallada en plantas, hongos y bacterias (Bacillus).

-Amilasa (EC3.2.1.2) (1,4--D-glucan maltohidrolasa;

glicogenasa) es tambin sintetizada porbacterias,hongos
yplantas. Cataliza la hidrlisis del segundo enlace -1,4 glicosdico
desde el extremo no reductor, separando 2 unidades de glucosa
(maltosa).
Presente en semillas y granos de cereales; en muchos
microorganismos que degradan el almidn extracelular. Los tejidos
animales no contienen -amilasa, pero puede estar presente en
microorganismos del TD. El pH ptimo es 4.0-5.0.

-Amilasa (EC 3.2.1.3) Glucan 1,4-alfa-glucosidasa

amiloglucosidasa Exo-1,4--glucosidasa glucoamilasa; glucosidasa lisosomal; 1,4--D-glucan glucohidrolasa.
Rompe los enlaces (1-6) glicosdicos, como tambin el ltimo
enlace (1-4)glicosidico del extremo no reductor de amilosa y
amilopectina, produciendo glucosa. Es ms activa a pH 3.

MODO DE ACCIN DE LAS

ENZIMAS

La accin de los catalizadores consiste en disminuir la

Energa de activacin
Las enzimas son catalizadores especialmente eficaces, ya que
disminuyen la Ea an ms que los catalizadores inorgnicos.
Por ejm la descomposicin del agua oxigenada (H 2O2) puede
ocurrir
sin catalizador

E a= 18 Kcal/mol

con un catalizador inorgnico (platino) Ea= 12 Kcal/mol

con una enzima especfica (catalasa)

Ea= 6 Kcal/mol

As, se puede calcular que el platino acelera la reaccin

20.000 veces, mientras que la catalasa la acelera 370.000

MODO DE ACCIN DE LAS

ENZIMAS
Dos modelos sobre la forma en que el sustrato se une
al centro activo del enzima:
el modelo llave-cerradura
el modelo del ajuste inducido

MODELO LLAVE-CERRADURA
La estructura del sustrato y la del centro activo son
complementarias
Este modelo es vlido en muchos casos, pero no es
siempre correcto

MODELO DEL AJUSTE INDUCIDO

el centro activo adopta la conformacin idnea slo en
presencia del sustrato.
La unin del sustrato al centro activo de la enzima
desencadena un cambio conformacional que da lugar a la
formacin del producto.

Modelos de la interaccin E - S

Modelo del Ajuste Inducido

Cofactores - Coenzimas
A veces, una enzima requiere p/su funcin la
presencia de sustancias no proteicas que
colaboran en la catlisis:
Los cofactores. Pueden ser iones
inorgnicos como el Fe++, Mg++, Mn++, Zn++, Cu+
+
. Casi dos tercios de las enzimas conocidos
requieren cofactores.
Cuando el cofactor es una molcula orgnica
se llama coenzima.

Cofactores - Coenzimas
Muchas de estas coenzimas se sintetizan a partir de
vitaminas.
Cuando los cofactores y las coenzimas se encuentran
unidos covalentemente a la enzima se llaman grupos
prostticos.
La forma catalticamente activa de la enzima =
holoenzima. La parte proteica de una holoenzima se
llama apoenzima (inactiva), de forma que:

apoenzima + grupo prosttico= holoenzima

Coenzima: NAD+
Deriva de la Vitamina B5
(cido nicotnico)

Coenzima:

FAD
Es grupo prosttico

Deriva de la Vitamina B2 (flavina)

FAD

forma oxidada

FADH2 forma reducida

CINTICA ENZIMTICA
La cintica enzimtica estudia la velocidad de
las reacciones catalizadas por enzimas.
La velocidad de una reaccin catalizada por
una enzima puede medirse con relativa
facilidad, ya que en muchos casos no es
necesario purificar o aislar la enzima.
Estos estudios proporcionan informacin
directa acerca del mecanismo de la reaccin
cataltica y de la especificidad de la enzima.

CINTICA ENZIMTICA

CINTICA ENZIMTICA
MODELO CINTICO DE MICHAELISMENTEN
Finales del siglo XIX: estudios sistemticos del efecto de la concentracin
inicial del sustrato s/la actividad enzimtica.
En 1882 se introdujo el concepto del complejo enzima-sustrato como
intermediario del proceso de catlisis enzimtica.
En 1913, Leonor Michaelis
y Maud Menten desarrollaron esta
teora y propusieron una ecuacin de
velocidad
que
explica
el
comportamiento cintico de las
enzimas.

MODELO CINTICO DE MICHAELISMENTEN

v = v3 = k3 [ES] =

V = velocidad de la reaccin catalizada por la enzima

La v de una reaccin catalizada por una

enzima puede medirse con relativa
facilidad (en muchos casos no es necesario purificar
o aislar la enzima).
La medida se realiza siempre en:
condiciones ptimas de pH, temperatura,
presencia de cofactores, etc,
C/concentraciones saturantes de sustrato.
En estas condiciones, la velocidad de
reaccin observada es la velocidad mxima
(Vmax).
Se expresa en aparicin de los productos o la
desaparicin de los reactivos

MODELO CINTICO DE MICHAELISMENTEN

CLCULO DE LA KM Y DE LA Vmax DE UN ENZIMA
v = v3 = k3 [ES]

V = velocidad de la reaccin
catalizada por la enzima

La representacin grfica de la ecuacin de Michaelis-Menten es una hiprbola . La Vmax corresponde

al valor mximo al que tiende la curva experimental, y la KM corresponde a la concentracin de
sustrato a la cual la velocidad de la reaccin es la mitad de la Vmax.

La constante de Michaelis-Menten (KM) es un parmetro

cintico importante por varias razones:

KM = [S] para la cual la velocidad de reaccin

es la mitad de la velocidad mxima.
El valor de KM da idea de la afinidad de la enzima
por el sustrato:
a menor KM, mayor afinidad del enzima por el
sustrato, y
a mayor KM, menor afinidad.

Hay enzimas que no obedecen la ecuacin de MichaelisMenten. Se dice que su cintica no es Michaeliana.
Esto ocurre con las enzimas alostricas, cuya grfica
de v frente a [S] no es una hiprbola, sino una sigmoide
En la cintica sigmoidea, pequeas variaciones en la
[S] en una zona crtica (cercana a la KM) se traduce en
grandes variaciones en la velocidad de reaccin.

Regulacin de la actividad enzimtica

Como ocurre con toda protena, la actividad de una enzima
depende de factores tales como:
la temperatura,
el pH,
las disoluciones salinas,
los solventes,
los activadores y los inhibidores,
el tiempo de reaccin.

Factores que afectan la cintica

enzimtica
La actividad puede estar afectada por:

pH - Temperatura - Fuerza inica - Inhibidores

La mayora de las enzimas son muy sensibles a los cambios de pH.

Desviaciones de pocas dcimas del pH ptimo pueden afectar drsticamente
su actividad. Por ello, los seres vivos han desarrollado sistemas ms o menos
complejos para mantener estable el pH intracelular

Efecto el pH
Variaciones del pH del medio
producen cambios en el estado de
ionizacin de algunos grupos de una
enzima, afectando su estructura
tridimensional y su actividad.
El cambio en la ionizacin de grupos
qumicos del sitio activo puede alterar
el reconocimiento del sustrato o la
reactividad de los AA del sitio activo.
Todas las enzimas tienen dos valores
lmites de pH entre los cuales son
efectivas, ms all se desnaturaliza y
deja de actuar.

Efecto de la Temperatura

Factor temperatura
Si aumenta la temperatura, aumenta la energa cintica de las partculas y su
movilidad producindose un aumento en el nmero de colisiones y la velocidad de
la transformacin. Si la temperatura contina aumentando, se comienzan a
romper uniones intermoleculares (responsables de la conformacin) y, as,
comienza a disminuir su actividad. Si la TC es excesiva, la enzima se
desnaturaliza perdiendo totalmente sus propiedades catalticas.

Factores que afectan la cintica

enzimtica: INHIBIDORES
Ciertas molculas pueden inhibir la accin cataltica de una
enzima: son los inhibidores.

Irreversibles
E + I EI
se unen fuertemente a la E y el complejo no se disocia

Reversibles
E + I EI

Inhibidores Reversibles
Pueden actuar de 3 modos:
ocupan temporalmente el centro activo por
semejanza estructural con el S original:
inhibidor competitivo
Se unen a otro sitio en la Enz y alteran su
conformacin espacial, impidiendo su unin al
S: inhibidor no competitivo
Se unen al complejo E-S impidiendo la catlisis
del sustrato: inhibidor acompetitivo

Inhibidores Reversibles
inhibidor competitivo

Inhibidores Reversibles
inhibidor no competitivo

Inhibidores Reversibles
inhibidor acompetitivo

Inhibidores Reversibles
inhibidor acompetitivo

Regulacin de la catlisis
enzimtica
las concentraciones del sustrato y de
los productos finales
presencia de inhibidores
modulacin alostrica
modificacin covalente
activacin por proteolisis (zimgenos)
isoenzimas

MODULACIN ALOSTRICA DE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA
Hay enzimas que pueden adoptar 2 conformaciones
interconvertibles llamadas R (relajada) y T (tensa).
R es la forma ms activa porque se une al sustrato con ms
afinidad. Las formas R y T se encuentran en equilibrio R
R <==> T

ACTIVADORES ALOSTRICOS
Ciertas sustancias tienden a estabilizar la forma R
actuando s/una regin de la Enz distinta del centro
activo.
Son los llamados moduladores positivos
activadores alostricos.
El propio S es a menudo un modulador positivo.

Regulacin de la actividad enzimtica por

ACTIVACIN PROTEOLTICA
Algunos enzimas no se sintetizan como E activa, sino como
protenas precursoras sin actividad enzimtica. Estas
protenas se llaman proenzimas o zimgenos.
Para activarse, los zimgenos sufren hidrlisis que origina la
liberacin de uno o varios pptidos.
El resto de la molcula proteica adopta la conformacin y las
propiedades de la enzima activa.
Ejm: enzimas digestivas se secretan en forma de zimgenos
y en el tubo digestivo se convierten en la forma activa. Es el
caso de la quimotripsina, que se sintetiza en forma de
quimotripsingeno

APOENZIMA