Evaluacin de un inhibidor

microbiano en dietas
artificiales de la oruga
generalista,Heliothis
virescens
Por Karl A. Roeder,Indira Kuriachan,S.Bradleigh Vinson,ySpencer T. Behmer*

Presentado por: Arizala Guerrero Leiner y Hurtado H. Juan Camilo

Presentado a: Guillermo Castillo Belalczar
Curso: Entomologa y MIP
Universidad de Nario

Objetivos
Evaluar la capacidad inhibidora de crecimiento microbiano de un
agente antimicrobiano, sobre una serie de dietas diferentes.

conocer el efecto del agente antimicrobiano sobre el rendimiento de

las larvas y las pupas de individuos provenientes de dos cepas
diferentes de Heliothis virescensFabricius ( Lepidoptera: Noctuidae).

MATERIALES Y MTODOS

EXPERIMENTO 1

Las orugasH.virescens cultivadas en la universidad de

Texas A & M.
Aqu se midi el crecimiento microbiano y el rendimiento
de insectos en una sola dieta en cinco tratamientos
microbiana diferentes, incluyendo el tratamiento DAA.

EXPERIMENTO 2

El segundo experimento utilizH.virescens cultivadas en

la Universidad Estatal de Carolina del Norte, e
investigaron la eficacia de DAA en tres dietas diferentes.

Dieta agente antimicrobiano (composicin)

Acido propinico

inhibe el moho y el crecimiento de algunas bacterias mediante la reduccin

del pH de la dieta.

cido fosfrico

cido inorgnico de sabor agrio que se utiliza en la acidificacin de alimentos

y bebidas, y como tampn de nutrientes en la fabricacin de antibiticos

cido srbico

controla con xito bacterias, mohos y levaduras en los alimentos hmedos que
tienen un pH por debajo de 6,5

cido benzoico

eficaz para controlar el crecimiento microbiano en los niveles de pH entre 2.5

a 4.5;a bajas concentraciones (por ejemplo 0,1%) impide eficazmente el
crecimiento de bacterias

Cloranfenicol

un antibitico utilizado para detener tanto las bacterias grampositivas y gram-negativas a travs de la inhibicin de la sntesis de
protenas bacterianas.

DAA. Lista de ingredientes, expresado en

cantidades totales y como porcentaje.

Experimento Uno
Insectos experimentales.Las orugas deH.virescensprovenan del cultivo en la
Universidad Texas A & M donde han sido criados en una dieta de frijol pinto (Tabla
2) disponible en el mercado y preparadas segun Bioserv (Bioserv # F9394B).
1. Dieta frijol pinto Standard (PB) sin modificaciones.

2. Dieta estndar PB reemplazado cada 3 das.(PB [3])

3.Dieta PB + 0,1 ml de formalina al 40 gramos de dieta seca.(PB-F)

4.Dieta PB + 0,1 ml de formalina al 40 gramos de dieta seca, sustituido cada 3

das.(PB-F [3])
5. Dieta PB + 0,1 ml de formalina y 0,5 ml DAA por 40 gramos de dieta seca.(PB-FI)

Composicin Dieta

Tabla 2.

Protocolo
1

Se tomaron 25 orugas aleatoriamente

en los 5 tratamientos.
Cada una se puso en una rebanada de
la dieta que pesaba aprox. 3g
Estos se alojaron en pocillos redondos
de 6,5x2, tapados con una esponja
Se llevo a la incubado a 29C

Variables evaluadas
1

Desarrollo microbiano, registrado como presente o ausente.

la supervivencia de las larvas, registrado como individuos en

pupacin con xito.

tiempo de desarrollo, registrada como el nmero de das desde

la colocacin de neonato en alimentos para la pupacin

la masa de pupa, grabado en mg, aproximadamente 4 das

despus de la pupacin.

Experimento Dos
Insectos experimentales.Las orugas utilizadas fueron del cultivo
en la Universidad Estatal de Carolina del Norte que haban sido
criados en una dieta basada en maz-soja-leche (Tabla 2),
modificado a partir de Burton (1970).
1. El primer tratamiento recibieron una dieta de maz-soja-leche modificada
(CSM) de Burton (1970).

2. El segundo dieta era una dieta sinttica (SYN) como se describe

en Simpson y Abisgold (1985) modificado a partir de Dadd (1961
), con sacarosa como el hidrato de carbono digerible primaria (
Tabla 2) (Lee et al. 2003).
3.La ltima dieta fue una combinacin de los dos primeros dietas (CSM +
SYM).Esta dieta fue del 20% y el 80% CSM SYN

Protocolo 2
1parte

Se tomaron 30 tasas de porcelana

2 oz para cada uno de los
tratamientos (3).
Se midi la eficacia de DAA en
ausencia de la oruga. 14 das
Los registros se llevaran en el da
3 y 7.

Parte 2

25 individuos fueron utilizados para los tratamientos (3).

Bloques de la dieta de 1g para cada tasa de porcelana de
2oz
Los bloque de dieta se cambiaron cada 3 das.

La segunda parte del experimento dos examin el

crecimiento y el desarrollo oruga en las tres dietas en
presencia y ausencia de DAA.

Variables evaluadas
1
2
3

Supervivencia de la oruga en la fase de larva a pupa y la

eclosin a la etapa adulta se registr para cada individuo

Tiempo de desarrollo de la oruga se registro en dias

Masa de pupa, se registr (en mg) cuatro das despus de

entrar en la fase de pupa.

El anlisis
estadstico

Los anlisis se realizaron usando

SAS JMP 7.0.2 y 9.2.1 (SAS
Institute Inc).Se utilizaron las
pruebas de regresin logstica
para comparar el xito de
supervivencia de las etapas pupa
y adulto.Cuando se observaron
efectos
significativos,
se
emplearon los odds ratios para
hacer comparaciones entre los
tratamientos.

Resultados experimento 1
La
aparicin
de
crecimiento microbiano
sobre los diferentes
tratamientos. Hubo una
diferencia
significativa
entre los tratamientos en
trminos de apariencia
microbiana
(regresin
logstica: df = 4, ?2=
17,32,P= 0,002;Figura 1
)

Figura 1

 Efecto

de diferentes
tratamientos sobre el
rendimiento
de
los
insectos.La
supervivencia a la fase de
pupa
fue
significativamente
diferente
entre
los
tratamientos (regresin
logstica: df = 4, ?2=
30,46,P<0,001).Figura 2.

Figura 2.

Figura 2.

Resultado experimento 2

La aparicin de crecimiento microbiano en los diferentes tratamientos. Tabla 3. figura 3.

Treatments
1) CSM

DAA presentes (das SE)

Nada hasta el da 14

DAA ausentes (das SE) df

Nada hasta el da 14

F-relacin
-

P-valor
-

2) CSM + SYN

8.5 0.3

2.8 0.2

243.08

<0.001

3) SYN

3.2 0.1

1.1 0.1

449.5

<0.001

Tabla 3.

figura 3

Afecto de DAA en el rendimiento de insectos. Tabla 4. Figura 4. figura 5.

variable de desempeo
Supervivencia (%)

Treatment
1) CSM

2) CSM+SYN

3) SYN

0.02

0.890

De pupacin a la eclosin

4.60

0.032

Masa de pupa (mg)

De larva a la fase de pupa

0.14

0.707

Supervivencia (%)

De larva a la fase de pupa

0.46

0.499

De pupacin a la eclosin

0.82

0.364

De larva a la fase de pupa

2.27

0.132

De pupacin a la eclosin

0.22

0.638

Masa de pupa (mg)

De larva a la fase de pupa

3.13

0.084

Supervivencia (%)

De larva a la fase de pupa

4.84

0.028

De pupacin a la eclosin

6.50

0.011

De larva a la fase de pupa

1.90

0.168

De pupacin a la eclosin

6.20

0.013

De larva a la fase de pupa

0.27

0.603

Desarrollo (das)

De larva a la fase de pupa

0.872

Desarrollo (das)

0.03

P-valor
0.205

Prueba estadstica
1.60

De pupacin a la eclosin
Desarrollo (das)

periodo de tiempo
df
De larva a la fase de pupa
1

Masa de pupa (mg)

figura 4.

figura 5.

 La prevencin o el retraso del crecimiento microbiano (por ejemplo, moho y hongos) es un componente
clave en el xito de la cra de insectos.
Inglis y Cohen (2004) dietas que carecen de agentes antibacterianos o antifngicos desarrollan hongos
y bacterias en 24 horas.

DAA suprime significativamente el crecimiento microbiano en una gama de dietas artificiales y que,
aparte de aumentar la supervivencia de oruga, su efecto neto sobre el rendimiento de insecto es
neutral.

En el estudio actual microbios crecieron bastante facilidad cuando los agentes antifngicos estaban
ausentes - ms del 40% de las repeticiones PB mostr el crecimiento y el desarrollo microbiano en un
perodo de tiempo de dos a tres semanas.

La adicin de formalina, por ejemplo, solucin acuosa al 40% de formaldehdo, es una estrategia comn
usado para controlar el crecimiento microbiano en muchas dietas de insectos, y cuando se aade a la
dieta de desarrollo del molde PB se redujo significativamente en un 20%.

 Segn la Agencia de Proteccion Ambiental de EE:UU a

clasificado la Formolina como carcingeno humano, Produce
cncer nasofarngeo en los seres humanos.
La adicin de DAA a Pb dieta que contena formalina suprime en
gran medida el crecimiento microbiano, al igual que el
rendimiento aumento en comparacin con otras dietas
Las dietas (CSM, CSM + SYN y SYN) demostraron la supresin del
crecimiento microbiano pero hay que investigar mas sobre el
desarrollo ya que no hubo efecto positivo ni negativo.

Bibligrafia

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GRACIAS