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Antecedentes
Antecedentes
Diabetes en Mxico.
Evolucin del tratamiento
convencional.
Evolucin del esquema intensivo
Trasplante de islotes (alognico).
Trasplante de islotes (xenognico).
Justificacin
An con el esquema intensivo las
complicaciones aparecern.
En transplantes alognicos:
Xenotrasplante
Riesgo de infeccin por Retrovirus
Endgeno Porcino (PERV)
Otras zoonosis
Diseo Experimental
a) Creacin de un sitio
inmunolgicamente privilegiado:
Dispositivo
Formacin de colgena autloga
Inmunomodulacin por clulas de
Sertoli
Dispositivo
Usamos un dispositivo diseado en
nuestro laboratorio, que consiste en un
cilindro de malla metlica de 6 cm de largo,
con dos tapones de polipropileno, uno de
ellos con un mbolo que llena el cilindro.
Procesamiento de Islotes y
Sertolis
Se utilizan
cerdos de 7
das de vida
El pncreas es
removido
inmediatament
e despus de
eutanasia por
exanguinacin.
Control de calidad
La pureza de los islotes
es de 88%
Con tincin de Ditizona.
ndices de
estimulacin de
Islotes =11.5
Sertoli:
deteccin de
Closterinas
Diseo Experimental
12 adolescentes con Diabetes Tipo 1
Consentimiento Informado:
Reclutamiento
totalmente voluntario
Pronstico con
tratamientos actuales
Procedimiento
Experimental
Objetivos
Metas
Riesgos
Costo econmico
Obligaciones del
voluntario
Obligaciones del Hospital
Biotica
Instituciones revisoras:
Comisin Nacional de Biotica
Facultad de Medicina, UNAM
Hospital Infantil de Mxico Federico
Gmez
Biotica
Cumplimiento de la declaracin de Helsinki
Diseo Experimental
Monitoreo:
Seguridad
Medidas de seguridad de los animales en
la granja:
Seguridad
Medidad de seguridad de los animales
donadores.
Tamiz microbiolgico para:
Aujeszky (elisa)
Erisipela (elisa)
Salmonella sp.(elisa)
Salmonella sp.(cultivo de hgado y vlvula ileocecal)
Brucella a. (aglutinacin).
Influenza Porcina (inhibicin de aglutinacin)
Leptospira (microaglutinacin 16 especies).
Mycoplasma hyopneumoniae (elisa)
Coronavirus (elisa)
Toxoplasmosis (elisa)
Contingencias
Observ. Clnica o
de Lab
sospechosa
Contactar
familias y
Personas
cercanas
Reunin
de
Persona
l
Granja
Productora
Manual de
bioseguridad de
la granja
Secretara
de Salud
Instituciones
Externa
Diagnstico
Hospital
Cuarentena
Tratamiento
especfico
Seguimiento
Tratamiento
OMS
Marcadores de tamao
2.
Control Negativo
3.
DNA porcino
4.
DNA de Pacientes
1
2036
1636
1018
PERV 814 bp
506
396
Resultados
Anticuerpos Anti -Gal
ttulos
4500
4000
3500
3000
12
2500
2000
8
12
1500
1000
500
0
nd Tx
2
2
Tx
12
PreTx
12
11
8
Da 7 Da 14
1mes
3mes
6mes
Da 7
1mes
1ao
Anticuerpos en el ensayo
Mexicano (2000-2001) vs. El Sueco
(1990-1993)
Ttulos de hemaglutininas IgM contra eritrocitos porcinos replicando
exactamente el mtodo de Lindeborg E. Xenotransplantation 2001:
8; 273-283.
256
128
64
32
16
8
4
2
Valdes et al. Groth et al.
Requerimientos de Insulina
Resultados
Paciente (% Reduccin)
7.1
7.4
Hemoglobina
Glicosilada
8.9
6.7
12
7.9
6.6
9.9
13
10.8
Resultados
Deteccin de insulina porcina en
suero por HPLC
Resultados
Un dispositivo fue removido de cada uno
de los pacientes, para poder ser
retrasplantados y posiblemente llegar a la
independencia de insulina.
Los dispositivos removidos fueron
analizados por inmunohistoqumica para
insulina, glucagon, MIS (un marcador de
clulas de Sertoli), y CD3, CD4 y CD8.
Insulina
HE
4
1
3
2
3
2
Glucagon
Sustancia Inhibidora
Mulleriana (MIS)
Resultados
4
CD3 Humano
1
2
Q-03-164-5
4
5
1
6
Insulina
3
2
Resultados
Conclusiones
No ha habido seales de zoonosis
No hay complicaciones metablicas
No hay intolerancia al dispositivo o al
procedimiento.
El sistema inmune de los pacientes
se mantiene intacto, medido por
reacciones intradrmicas.
Conclusiones
Respuesta Inmune
Persistencia de insulina (100% de los
dispositivos removidos) y clulas positivas
a glucagon (90%) en cantidades variables
despus de 5 aos, y de manera
sorprendente, coexistiendo con linfocitos T
No hay correlacin entre los niveles de
anticuerpo y supervivencia de las clulas.
No hay una respuesta tpica despus del
retrasplante
Conclusiones
Modificaciones en los requerimientos de
insulina exgena
En 50% de los casos hubo reducciones, en
algunos casos cerca de 100% por varios meses.
El otro 50% pudiera no haber tenido suficientes
clulas supervivientes, o una menor
sensibilidad a la insulina.
Pasos Inmediatos
Identificar los sistemas antignicos
en el cerdo que sean importantes
para el xenotrasplante a humano
Respuesta humoral
Respuesta celular
Pasos Inmediatos
Cuantificacin de la composicin
celular dentro de los dispositivos.