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en formato Digital
Manual de prctica de
Microbiologa
en formato Digital
22/11/15
ndice:
Algunos equipos utilizados en microbiologa
Morfologa y disposicin de las clulas bacterianas
Distribucin de microorganismos en el ambiente
Medios de cultivo
Mtodos de siembra
Las coloraciones
Accin de las bacterias sobre los hidratos de carbono
Accin de las bacterias sobre las protenas
Hemlisis
Pigmentos
Prueba de sensibilidad a los antimicrobianos.
Estudio bacteriolgico del agua y otros lquidos de consumo
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Frasco de la Vela
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Placa de Petri.
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Se utiliza para
Crear la atmsfera
para
microorganismos
anaerobios.
Porta Objetos
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Se utiliza para
preparar los frotis
Asas y agujas
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Se utilizan para
pescar transportar
y sembrar el
material
bacteriolgico
Se esterilizan en el
mechero al rojo
vivo antes y
despus de las
siembras
bacteriolgicas.
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Tubos de ensayo
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El tapn de los
tubos se sostiene
con el dedo
meique.
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Microscopio
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Autoclave
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AUTOCLAVE
Se utiliza para
esterilizar y
funciona a 121c
15 libras de
presion por
pulgadas
cuadradas en un
tiempo de 15 a 20
minutos.
Incubadora
Se utiliza para
proporcionar la
temperatura
optima a las
bacterias.
Contador de colonias.
Se utiliza para el
conteo de
colonias.
Mechero de bunsen
Nevera
Se utiliza para
conservar a una
temperatura
adecuada los
medios de cultivos
y cepas
bacterianas.
Microscopia
Morfologa de las bacterias
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Cocos
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Cocos
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Bacilos
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Bacterias espirales
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Bacterias en Espiral
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Hongos levaduriforme
Levaduras
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Hongo filamentoso
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Hongo filamentoso
Colonia
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Cultivo contaminado
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Colonias
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Cultivo mixto
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Medios de cultivo
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Clasificacin
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Medios de cultivos
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Medios de cultivos
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Medio diferencial
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Medios de cultivos
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Contiene el azcar
lactosa y un indicador
que es el rojo neutro,
este medio es selectivo
para microorganismos
Gram. negativos.
Si la lactosa es
fermentada las
colonias se observaran
de color rosado
Si no las colonias se
observaran
transparentes.
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Es un medio
selectivo y
diferencial
Es selectivo para
bacterias Gram.
Negativas
La E. coli crece
con brillo verde
metlico
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Manitol salado:
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Es un medio utilizado
para los Estafilococos.
El indicador de PH es
rojo fenol.
Si el microorganismo
fermenta el manitol se
tornar el medio
amarillo.
Si no lo fermenta, se
tornar color rojo
cereza.
Es fermentado por el
S. aureus.
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Mtodos de Siembra
Sembrar una bacteria es el acto de
colocarla en un medio de cultivo
apropiado para promover su
crecimiento y desarrollo
Para desarrollar una bacteria invitro
hay que proporcionarle :
1-Nutrientes con los medios de cultivos
que requieran.
2-La atmsfera apropiada
3- La temperatura optima, entre otros.
El resultado de la siembra es el cultivo
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Mtodos de Siembra
Medio: Lquidos o
caldos
Instrumento: Asa
Mtodo: Dilucin
Finalidad: poner la
bacteria en
suspensin
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Mtodos de Siembra
Medio: Semislido
Instrumento: Aguja
Mtodo: Puncin o
Picadura
Finalidad: observar
la Movilidad.
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Si crece en la lnea de
siembra es inmvil.
Si crece fuera de la lnea
de siembra es mvil
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Mtodos de Siembra
Medio: Slido en tubo
Inclinado.
Instrumento: Asa o
aguja
Mtodo: Estra en
superficie
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Mtodos de Siembra
Medio de cultivo:
TSI
Mtodo: Puncin y
estras en superficie.
Instrumento: Aguja
Finalidad:
Observar los reacciones
(cambios) que ocurren en
la superficie y la
Profundidad.
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Mtodos de Siembra
Medio: Slido en
placa
de Petri
Mtodo: Estras por
Agotamiento.
Instrumento: Asa
Finalidad: Aislar
colonias
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Mtodos de Siembra
Medio: Slido en placa
de Petri
Mtodo:
Embadurnamiento
Instrumento: Hisopo
Finalidad: Obtener
colonias confluentes.
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Frotis:
Dispersar el material bacteriolgico en un porta
objetos
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Preparacin de un frotis
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Preparacin de un frotis
El material se frota
directamente sobre el
portaobjetos, donde
puede visualizarse con
facilidad ( de los
cultivos en los medios
lquidos)
El material colocado
en el portaobjetos se
deja secar al aire.
Y se fija al calor del
mechero.
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Las coloraciones
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Los colorantes
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Los colorantes
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Los colorantes
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La tincin negativa
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Coloracin de Gram
Ideada en 1884 por Hans Christian Joachim Gram (1853-1938), un mdico
dans con estudios en bacteriologa y farmacologa.
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El peptidoglicano se dispone
en varias capas lo que le
otorga grosor a la pared.
Atraviesan el
peptidoglicano polisacridos
cidos, denominados cidos
teicoicos.
Los cidos teicoicos son de
dos clases: poliglicerol
fosfato y poliribitol fosfato.
Las funciones primarias de
estos polmeros son la
estabilizacin del
peptidoglicano y la captura
de Mg++.
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Coloracin de Gram.
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Protocolo
Hacer un frotis
Dejar secar al aire
Fijar la muestra con calor a la
llama de una lmpara de alcohol
o con el licor de Hoffman.
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Coloracin de Gram.
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Cristal violeta
El lugol entra en las clulas y forma un complejo
insoluble con el cristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona sirve para realizar
la decoloracin. Las bacterias Gram. positivas no
se decoloran, mientras que los Gram. negativas
s lo hacen.
Para poner de manifiesto las bacterias Gram.
negativas se utiliza una coloracin de contraste
de color rojo; safranina.
Despus de la coloracin de contraste las clulas
Gram. negativas se observan de color rojo,
mientras que las Gram. positivas se observan de
color Morado.
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Interpretacin
Gram negativas
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Gram positivas
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Coloracin de Gram.
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Coloracin de Gram.
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Coloracin de Gram.
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Coloracin de Gram.
preparndonos para la observacin al microscopio
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Ziehl Neelsen
La coloracin cido-resistente es otra coloracin
muy usada para el examen microscpico de las
mycobacterias, y las nocardias.
Debido al crecimiento lento de la mayora de las
mycobacterias, los extendidos para identificar
bacilos alcohol-cido resistente juegan un papel
importante en el diagnstico temprano de la
infeccin por mycobacterias.
El mtodo clsico de coloracin cido-resistente
es el descubierto por Ziehl y Neelsen en el ao
1882 y ampliamente usado hasta la fecha para
el diagnstico de Mycobacterium
Tuberculosis y Mycobacterium leprae.
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REALIZACIN
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Resultados de la coloracin de
Ziehl Neelsen
BAAR
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Resultados de la coloracin de
Ziehl Neelsen
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Coloracin de Cpsula
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Coloracin de Cpsula
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Coloracin de Cpsula
Resultado
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La respiracin bacteriana
Medio de cultivo Caldo de thioglicolato de sodio
y el indicador de oxigeno resazurina, azul metileno y otros
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102
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TSI
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Interpretacin:
105
Interpretacin:
TSI
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106
MAC-CONKEY:
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107
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Interpretacin:
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Interpretacin:
Si se observa un desplazamiento en
el tubito invertido se reporta:
gas +
Si el tubito invertido permanece
lleno del liquido se reporta: gas -
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GAS POSITIVO
GAS NEGATIVO
Prueba de la Coagulasa
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cepa de Staphylococcus
La coagulasa acta como una enzima
termoestable que permite diferenciar el
Staphylococcus aureus del resto de los
Estafilococos coagulasa negativos.
Se producen dos tipos de coagulasa, la
unida a la pared celular y la liberada por la
clula como coagulasa libre y es la
detectada por la tcnica en tubo.
La coagulasa acta sobre la protrombina
para producir trombina que acta sobre el
fibringeno para formar el coagulo.
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Interpretacin:
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Interpretacin:
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Coagulasa +
Coagulasa -
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Prueba de oxidasa
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Fundamento:
La Prueba de la Oxidasa hace una diferenciacin inicial
de las bacterias Gram. negativas.
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Prueba de oxidasa
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La prueba de la Catalasa
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Prueba de la Catalasa+
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La protelisis es la
degradacin de las
protenas.
El resultado final de la accin
proteoltica es la
produccin de
aminocidos.
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INDOL
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Anillo
amarillo
Anillo rojo
+
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UREA
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Gelatina
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Resultados:
NEGATIVA
Al sacar la prueba de
gelatina de la nevera est
gelificada
POSITIVA
Al sacar la prueba de gelatina
de la nevera est
liquida (licuacin irreversible)
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prueba
Enzima
ACCIN DESustrato
LAS BACTERIAS
SOBREProducto
LAS
PROTEINAS
final
Interpretacin
urea
Caldo de
Urea
ureasa
Amoniaco
Fucsia+
Limoncillo-
indol
Caldo
triptonado o
peptonado
Triptofanasa
Indol
Aadir
Kovacs
Anillo rojo+
Anillo
amarillo-
Gelatina
Gelatina
gelatinasa
Licuacin
Irreversible
Refrigerar
Liquida +
Gelifica -
Lisina
Lisina Iron
Agar (LIA)
Descarboxilasa
Cadaverina
Fondo morado+
Fondo amarillo-
Desaminasa
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Superficie rojo
con fondo
amarillo+
Sin cambioPrecipitado negro
H2S
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HEMOLISIS
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HEMOLISIS
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127
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Beta
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Pigmentos
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LOS PIGMENTOS
Son sustancias coloreadas metabolizadas por
microbios.
Uno de los caracteres ms llamativos de los
cultivos es la pigmentacin o cromo gnesis.
Se denomina endopigmento cuando el pigmento
no se segrega al exterior sino que queda en el
interior de la clula bacteriana
Se denomina exopigmento (Pseudomonas)
cuando el pigmento se segrega adems de las
colonias al medio exterior.
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Exopigmento
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Exopigmento
(Pseudomonas)
cuando el
pigmento se
segrega adems
de las colonias al
medio exterior.
Es de color verde
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Endopigmento
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Se denomina
endopigmento
cuando el pigmento
no se segrega al
exterior si no que
queda en el interior de
la clula bacteriana
Staphylococcus aureus
Endo pigmento de
color amarillo dorado
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Endopigmento
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Antibiograma
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La determinacin de la
sensibilidad
antimicrobiana a los
aislamientos bacterianos
que tienen significado
clnico es una de las
principales funciones del
laboratorio de
microbiologa.
El objetivo principal de
las pruebas de
sensibilidad es predecir
el xito del tratamiento
con los antimicrobianos
ensayados.
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Antibiograma
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Antibiograma
Resistente
Sensible
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Antibiograma
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136
Antibiograma
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Produccin de lactamasas.
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de los cromosomas.
Plsmidos extracromosomales.
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(cuando se hace de
manera constante).
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141
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142
Las
cefalosporinas de espectro
extendido (ceftazidima, cefotaxima y
ceftriaxona).
Los
antibiticos monobactmicos
como aztreonam.
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Estadsticas
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RESISTENCIA A ANTIBITICOS
-LACTMICOS.
Compuestos
B- Lactamicos.
Penicilinas.
Cefalosporinas.
Monobactmicos.
Carbapenems.
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en las protenas
fijadoras de penicilina.
Alteraciones en las porinas de la
membrana externa.
Produccin de -lactamasa que
inactivan al antimicrobiano.
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Mutacin
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Impermeabilidad de la pared.
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E. coli.
Pseudomonas aeruginosa .
Serratia marcescens.
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IMPORTANCIA CLNICA DE LA
RESISTENCIA BACTERIANA.
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Escherichia coli.
Klebsiella spp.
Proteus spp.
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El enterococo es un
microorganismo patgeno que
actualmente presenta
insensibilidad intrnseca a varios
antibacterianos comunes y a
ciertos compuestos como
vancomicina y otros antibiticos
glicopptidos de reciente
desarrollo.
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157
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El antisptico o el desinfectante en el
disco difunde a travs del agar.
En la medida que aumenta la distancia al
disco, disminuye logartmicamente la
concentracin del antisptico o el
desinfectante, producindose en el agar
un gradiente de concentracin del
antisptico o el desinfectante alrededor de
cada disco.
Continua----159
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Antisptico / Desinfectante
22/11/15
161
Resultados
22/11/15
162
22/11/15
163
22/11/15
164
Prueba Preliminar
Para hacer la prueba
preliminar se utilizan 5
tubos de caldo lactosado
Bilis Verde Brillante a los
cuales se les aade 5 ml.
De la muestra en estudio.
Se lleva a la incubadora.
a las 24 horas se lee
cuantos tubos hay
positivos y cuantos tubos
negativos, utilizando una
tabla ESTNDAR.
Se obtiene el numero
mas probable de
coliformes presentes en
la muestra.
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POSITIVOS
200
510
920
1,610
Mas 1610
166
IMViC
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167
IMViC
Resultados:
++--
22/11/15
E. coli
168
IMViC
Resultados:
--++
Klebsiella
o Enterobacter
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La E. coli: indol
positivo
Es una bacteria
mvil
Brillo metlico
en EAM
Klebsiella es
inmvil
Indol negativo
o Enterobacter
Indol negativo
Es mvil
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171
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172
PRUEBAS DE IDENTIFICACIN EN EL
LABORATORIO DE BACTERIOLOGA
22/11/15
Cndida albicans
Tubo
germinativo
positivo
173
Test de Camp
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Para diferenciar a
los estreptococos
grupo B
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175
22/11/15
Bacilos gram.
Negativos
Fermentadores de
Glucosa
Haemophilus
influenzae
Coloracin de Gram.
Forma: Coco Bacilos
Propiedad tintorial.
Gram. Negativo
176
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177
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178
PRUEBAS DE IDENTIFICACIN EN EL
LABORATORIO DE BACTERIOLOGA
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Diplococos gram.
Negativos
Neisseria
gonorroheae
Coloracin de Gram.
Forma. Cocos
Disposicin:
diplococos
arrionados
intracelulares
Propiedad tintorial.
Gram. negativo
( Cocos teidos de
rojo de rojo)
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Prueba de oxidasa
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Prueba de
oxidasa + en la
N. gonorroheae
igual que N.
meningitidis
180
Control de Microorganismos
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181
22/11/15
182
Agentes antimicrobianos
22/11/15
183
22/11/15
184
22/11/15
185
22/11/15
186
22/11/15
187
22/11/15
188
22/11/15
189
Bioseguridad
22/11/15
190
22/11/15
191
Bioseguridad
22/11/15
192
Bioseguridad
No conservar alimentos en el rea de
trabajo del No manipular material
infeccioso en el rea de papelera.
No reencapuchar las agujas, pues es una
fuente importante de accidentes corto
punzantes.
En caso de ruptura de material de vidrio,
no recoger vidrios rotos con los dedos.
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193
Bioseguridad
Descartar agujas u otros materiales
punzocortante en recipientes de paredes
gruesas, NUNCA EN LA BASURA COMN
Descontaminacin de los desechos
contaminados antes de su eliminacin
segn tipo
Disponer de manual de procedimientos
para toma de muestras variadas
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Bioseguridad
Todo el personal del laboratorio deber
ser sometido a un examen mdico
completo, que debe comprender una
historia clnica detallada al momento de
su incorporacin a la institucin, este
debe ser repetido una vez al ao
Todo el personal del laboratorio recibir
inmunizacin protectora segn rea
especfica en que labore, bajo supervisin
mdica y segn criterio epidemiolgico
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Bioseguridad
22/11/15
196
Bioseguridad
22/11/15
197
22/11/15
198
Debes recordar:
22/11/15
199
Hongos filamentosos
22/11/15
200
Levaduras
22/11/15
201
22/11/15
202
Clula bacteriana
22/11/15
203
22/11/15
204
22/11/15
205
Flagelos
22/11/15
206
22/11/15
207
Fimbrias o Pilis:
22/11/15
208
Esporas
22/11/15
209
22/11/15
210
22/11/15
211
Cpsulas
La capsula es un Factor de
virulencia
Esta es una coloracin negativa
porque no se tio la cpsula se
observa REFRINGENTE
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212
Bibliografa
22/11/15
213
Bibliografa
22/11/15
214
Bibliografa
22/11/15
215
Bibliografa
22/11/15
216
Bibliografa
22/11/15
217
22/11/15
218
Manual de prctica de
Microbiologa
Digital
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