AVALIAO DO POTENCIAL DE

BIORREMEDIAO DE SOLOS
CONTAMINADOS: Mtodo de Hidrlise de
Diacetato de Fluorescena (FDA) como
Indicador de Atividade Microbiana
Monografia apresentada ao Curso de Engenharia Ambiental
da Universidade Veiga de Almeida, como parte dos requisitos
necessrios obteno do grau de Engenheiro Ambiental.
Thiago da Silva Ribeiro
Orientadora: Profa. Luciana Andrade Peixoto Silva, M.Sc.
Co-orientadora: Profa. Patricia sterreicher-Cunha, D.Sc.
Rio de Janeiro, 01 de Julho de 2015

Justificativa e Relevncia do Tema

 A preocupao com as questes ambientais tem se destacado

cada vez mais dentre os problemas do mundo moderno.
A problemtica da contaminao ambiental por compostos
oriundos da atividade humana tem sido objeto de estudo em
muitos centros de pesquisa no mundo, visto a necessidade de
solues rpidas e eficientes para os problemas ligados a esta
situao.
A Resoluo CONAMA n 420, que foi publicada em dezembro de
2009, a primeira regulamentao federal sobre gerenciamento
de reas contaminadas e tem como referncia os parmetros
utilizados pela Companhia Ambiental do Estado de So Paulo
(CETESB).

 Em relao aos rgos ambientais, poucos so aqueles que

tratam a questo como uma prioridade ou que tenham se
estruturado minimamente para fazer frente s demandas surgidas
e para cumprir as obrigaes fixadas em nvel federal.
No setor produtivo, poucas tm sido as iniciativas das grandes
corporaes no sentido de identificar e remediar as reas
contaminadas decorrentes do desenvolvimento de suas
atividades ao longo de dcadas. Na maioria das vezes, os
programas de investigao so iniciados s aps terem sido
demandados pelos rgos ambientais.

 Em relao aos prestadores de servios, embora o nmero de

empresas que atuam no setor tenha crescido exponencialmente
na ltima dcada, ainda se verifica que poucas investiram na
elevao do seu capital intelectual. Como resultado, as aes de
investigao tm sido mal planejadas e executadas.
Em que pese a expressiva evoluo das tcnicas de remediao
ocorrida nas ltimas dcadas, ainda pouco significativo o
nmero de reas em que essas tcnicas tenham sido
empregadas.

 A biorremediao uma alternativa atraente no tratamento de

solos contaminados, com vantagens ambientais e econmicas
relevantes.
Avaliar o estado metablico dos microrganismos permite
monitorar os processos de biodegradao.
O mtodo da hidrlise de diacetato de fluorescena simples,
rpido e de baixo custo. A hidrlise de diacetato de fluorescena
pode ser usada como mtodo para avaliao do potencial
intrnseco da biorremediao de um solo contaminado.

O Papel dos Microrganismos

da Biodegradao: Como
Degradam os
Contaminantes?

 Os contaminantes orgnicos so usados como substrato pelos

microrganismos para seu prprio crescimento e reproduo,
transformando-os em outros compostos.
Estes contaminantes orgnicos no s constituem uma fonte de
carbono, que um dos componentes necessrios para a
formao de novas clulas, como tambm fornecem eltrons que
so utilizados pelos microrganismos para obteno de energia.
A degradao de qualquer molcula orgnica, inclusive de
contaminantes, requer a produo e a utilizao eficiente de
enzimas.

Biorremediao: fatores de
influncia, estratgias de aumento
de eficcia e tecnologias

 A biorremediao um processo em que organismos vivos so

responsveis por reduzir ou transformar poluentes (agrotxicos,
corantes, frmacos, polmeros e resduos plsticos) de reas
contaminadas, por meio de processos biolgicos de degradao.
O estabelecimento de condies ambientais adequadas
fundamental para que o processo de biorremediao acontea de
forma eficaz.
A seguir so apresentados alguns dos principais fatores que
afetam o processo de biorremediao de solos contaminados.

 Caractersticas do resduo: a biodegradabilidade est relacionada

a sua estrutura molecular.

 Contedo de nutrientes: os elementos contendo nitrognio e

fsforo so os nutrientes mais requisitados na biodegradao no
solo.

 Aceptores de eltrons: Um dos principais fatores que governam a

biodegradao o tipo e a biodisponibilidade de aceptores de
eltrons.

 Concentrao de microrganismos.
Temperatura: a atividade celular (em especial as enzimas)
aumenta consideravelmente com a temperatura at que seja
atingido um valor timo.

 Umidade: o tecido celular constitudo por 75 a 80% de gua e

meio de movimento para os microrganismos aos substratos.
pH: a maioria das bactrias e fungos favorece um pH neutro. A
quantidade de determinada enzima em estado ativo varia com
mudanas no pH, sendo o valor mximo obtido com pH timo.

 Disponibilizao dos contaminantes: quanto maior a solubilidade

do contaminante em gua, mais biodegradvel esse ser.
Tipo de solo: a soro aumenta com o aumento do percentual de
matria orgnica e, consequentemente, a biodegradao diminui.

 Estratgias de aumento de eficcia: bioestimulao e

bioaumentao.
Tecnologias para biorremediao de solos contaminados:

Bioventilao.

Landfarming.

Biopilha.

Determinao da atividade
microbiana por hidrlise de FDA

 O mtodo utilizado foi baseado em adaptaes do mtodo original

(SCHNRER E ROSWALL, 1982) feitas por ADAM E DUNCAN
(2001) e GREEN et al. (2006).
Enzimas extracelulares como esterases, lipases e proteases, que
so abundantes em solos possuem a capacidade de catalisar a
hidrlise de FDA.
O mtodo costuma correlacionar-se bem com algumas das mais
precisas medies de biomassa e incorporao de carbono, alm
de ser mais rpido, preciso, simples de se processar e
reprodutvel.

 A incubao feita em estufa, sem qualquer agitao. A

incubao pode ser feita diretamente nos tubos falcon que
serviro para a centrifugao.

 Incubao na temperatura de 30C corresponde ao mximo de

hidrlise observado por ADAM E DUNCAN (2001), ou seja, traduz
o potencial degradador da amostra.
O filtrado recolhido diretamente em provetas graduadas,
permitindo a medida direta do volume de filtrado.

 A concentrao em cada amostra foi obtida a partir de uma curva

padro de fluorescena feita anteriormente amostragem.

Clculos foram feitos a fim de encontrar a quantidade de FDA

hidrolisado por grama de amostra por minuto: (concentrao
medida x volume de filtrado) / massa de amostra / tempo de
incubao.

Consideraes Finais

 Nesse trabalho foi apresentado um panorama geral sobre

biorremediao e sua aplicabilidade, alm de recomendaes
gerais para estudos e aplicao dessa tecnologia.
Espera-se que, alm do incremento da biorremediao como
tcnica de tratamento de solos contaminados, a aplicao de
ensaios com indicadores biolgicos passe a ser mais utilizada.
De forma resumida, o ensaio com a FDA ambientalmente
realstico, alm de ser rpido, de baixo custo, de fcil execuo
tcnica e com necessidade mnima de equipamento.

Muito obrigado!
Messieurs, c'est les microbes qui
auront le dernier mot.
Senhores, so os micrbios que tero a ltima palavra.

(Louis Pasteur)