Optimizacin de las condiciones para

el paso de un solo IMAC purificacin

de miraculina de Synsepalum
dulcificum

Cesar Augusto
Gmez

INTRODUCCION
En este estudio, los mtodos para la

extraccin
y
purificacin
de
miraculin
de
Synsepalum
dulcificum fueron investigados. Para
la extraccin, se evalu el efecto de
diferentes tampones de extraccin
(solucin salina tampn de fosfato,
Tris-HCl y NaCl) sobre la eficacia de
la extraccin de la protena total .

FRUTA MILAGROSA
Fruta

milagrosa se puede utilizar en

alimentos,
medicina
y
la
industria
cosmtica como aditivos. En frica
occidental tropical, donde esta especie se
origina, la pulpa de la fruta se utiliza para
endulzar el vino de palma. Histricamente,
tambin se utiliza para mejorar el sabor de
pan de maz ido agria

CONTENIDO DE LA FRUTA
La pulpa de S. dulcificum contiene una

glicoprotena conocida como miraculina,

que es la principal causa de mal sabor. Un
valor mximo de dulzor despus de la
exposicin a 0,1 M de miraculin inducida
por 0,1 M de cido ctrico era igual a
400.000 veces el de la sacarosa.
Generalmente, 50-200 mg miraculin se
puede obtener de un kilogramo de frutas,
y el sabor dulce continuar por varias
horas.

MATERIALES Y METODOS
Preparacin de la muestra
Preparacion del extracto de miraculina
Purificacin de miraculin utilizando IMAC
Cromatografa lquida de alta resolucin

en fase inversa (RP-HPLC)

El anlisis por cromatografa en capa fina
Anlisis SDS-PAGE
Determinacin del contenido de protenas

RESULTADOS Y DISCUSION
Influencia de los tampones de extraccin

en la extraccin de protenas

Fig.1. Cromatografa RP-HPLC de tres extractos crudos

utilizando diferentes tampones de extraccin (0,2 M PBS pH
7, M Tris-HCl 0,2 M pH 7 y NaCl 0,5 pH 6,8).La absorbancia
se midi a 280 nm.rea del pico 1 fue el extracto crudo
utilizando tampn Tris-HCl.rea del pico 2 fue el extracto
crudo usando tampn PBS.rea bajo el pico 3 era el
extracto crudo usando una solucin de NaCl.

Tabla 1.Efecto de la fuerza inica para la

extraccin de protenas con diferentes

tampones.

Optimizacin de los diferentes parmetros

de la purificacin miraculin utilizando IMAC

Efecto de diferentes tampones de unin

Determinacin de la pureza y el contenido de

azcar de la fraccin objetivo.

Fig.2.Cromatografa RP-HPLC de la fraccin de destino.A

0,3 ml de la fraccin objetivo se aplic. Cromatogramas de

TLC de (a) el extracto crudo y (b) la fraccin de destino.

Fig.3.El anlisis por SDS-PAGE en la purificacin de

miraculina.La pureza de miraculin particionado se
evalu mediante un anlisis de 12% SDS-PAGE.Carril
1: marcador de peso molecular de protena estndar
(7-80 kDa), Carril 2: miraculin fraccin purificada a
partir de IMAC.

 Tabla 4.El rendimiento total y la pureza de

miraculina purificados bajo ptimas condiciones

IMAC.

CONCLUSIONES
Los resultados de este estudio han demostrado que la

IMAC se puede aplicar como un proceso de paso para

la purificacin de miraculin a partir del extracto crudo
de fruta milagrosa,S.dulcificum.
Optimizacin de los parmetros de purificacin se
requiere para la mejora de miraculin total de
purificado, factor de purificacin y la pureza.
Tampn Tris-HCl (pH 7,0) fue el tampn de unin
preferido en la purificacin de miraculin utilizando
IMAC.Miraculin puede purificarse bajo una amplia
gama de pH de tampn y extracto crudo de unin.
En condiciones ptimas (extracto crudo a pH 7,
tampn Tri-HCl a pH 7, imidazol 300 mM utilizado como
tampn de elucin), PIMAC de carga con el nquel se
utiliz con xito para purificar miraculin a partir del
extracto crudo deS.dulcificumcon el rendimiento y la
pureza de 80,3% y 97,5%, respectivamente.