NDICE:

I. Rutas metablicas
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Definicin de una ruta metablica

Molculas indispensables en una ruta metablica
Regulacin de los procesos metablicos
Caractersticas de las vas metablicas
Compartimentacin de las vas metablicas a nivel subcelular
Tipos de rutas metablicas
Tipos de procesos metablicos

II. Ciclos de transferencia de energa

1.
2.

3.
4.
5.
6.
7.
8.

Metabolismo
Estrategias bsicas del metabolismo
a. Metabolismo intermedio
b. Metabolismo energticos
c. Rutas centrales
Ciclo del carbono
Ciclo del oxgeno
Ciclo del fsforo
Ciclo del nitrgeno
Ciclo del azufre
Fuente de energa metablica: la oxidacin

Qu es una RUTA METABLICA?

Es una sucesin de reacciones qumicas que
conducen de un sustrato inicial a uno o varios
productos finales, a travs de una serie de
metabolitos intermediarios.
Su conjunto da lugar al Metabolismo.

A es el sustrato inicial
D es el producto final
B, C son los metabolitos intermediarios

Tipos de molculas
indispensables en el
desarrollo de una Ruta
Metablica
1. Metabolitos
2. Nucletidos
3. Molculas energticas (ATP,
GTP o Coenzima A)
4. Molculas ambientales (O2,
H2O, CO2, etc.)
A B C D E
Disfuncin
enzima

de

A B C //

la

Regulacin de los procesos metablicos

1. La cantidad o concentracin de cada enzima.
2. La actividad cataltica de las enzimas.
3. La accesibilidad de los sustratos.
1. La cantidad o concentracin de cada enzima.
La cantidad de una enzima concreta depende tanto de su
velocidad de sntesis como de la velocidad con que se degrada.
En la mayora de las enzimas su nivel es controlado, en primera
instancia, mediante un cambio en la velocidad de transcripcin
del gen que las codifica. La velocidad de sntesis de algunas
enzimas se acelera mucho en ciertas condiciones, de modo que
la concentracin real de la enzima aumenta substancialmente.

Regulacin de los procesos metablicos

2. La actividad
enzimas.
a.
Control
reversible.

cataltica

alostrico

La
primera
enzima
de
la
secuencia
funciona
como
reguladora de la velocidad de
todo el sistema y se denomina
enzima reguladora o enzima
alostrica. Habitualmente esta
enzima es inhibida por el
producto final de la secuencia, de
tal modo que cuando se produce
acumulacin del producto final
por sobre cierta concentracin
crtica, ste inhibe a la primera
enzima de la secuencia (enzima
reguladora), interrumpiendo o
cerrando as ese segmento del
metabolismo.
Este
tipo
de
inhibicin
se
conoce
como

de

las

Regulacin de los procesos metablicos

b. Modificacin covalente reversible.
Algunas enzimas tienen un mecanismo rpido de regulacin
que permite el pasaje de una forma activa a una forma
inactiva. Un ejemplo de este tipo de regulacin es la unin de
un grupo fosfato a un OH de un residuo de aminocido de la
molcula de enzima que permite la transformacin de una
forma en otra. Esta es una modificacin covalente reversible.

Regulacin de los procesos metablicos

3. La accesibilidad de los sustratos.

Tambien se puede regular el metabolismo mediante el control
del flujo de sustratos.
La transferencia de sustratos de un compartimiento de la
celula a otro tambien puede servir como mecanismo de
control.
En los organismos susperiores el control metabolico se puede
ejercer por regulacion hormonal.

Caractersticas principales de las Vas metablicas

Son 4 las caractersticas principales de las vas metablicas, las
cuales derivan de su funcin, que es la obtencin de productos
para ser utilizados por las clulas.
1.Las vas metablicas son irreversibles.
2.Cada va metablica tiene una etapa obligada.
3. Todas las vas metablicas son reguladas.
4. En las clulas eucariotas, las vas metablicas se
desarrollan en lugares especficos de las clulas.
1.Las vas metablicas son irreversibles.
Son muy exergnicas de forma que sus reacciones son
completas. Esta caracteristica confiere direccion a la via
metabolica.

Caractersticas principales de las Vas metablicas

2. Cada va metablica tiene una etapa obligada.
Aunque las vias metabolicas son irreversibles, la mayoria
de las reacciones que las componen funcionan proximas al
equilibrio. Sin embargo, al principio de cada via, existe,
generalmente, una reaccion irreversible (exergonica) que
obliga al intermediario que produce a continuar a lo largo
de la via.
3. Todas las vas metablicas son reguladas.
Es necesario regular el paso limitante de la velocidad, con
objeto de ejercer un control sobre el flujo de metabolitos a
traves de una via metabolica.
4. En las clulas eucariotas, las vas metablicas se
desarrollan en lugares especficos de las clulas.
La sintesis de metabolitos en organulos subcelulares
especificos hace que su transporte entre estos
compartimientos
sea
una
parte
fundamental del
metabolismo eucariotico.

Compartimentacin de las vas metablicas a nivel

subcelular

En el metabolismo tienen lugar muchas reacciones (muchas

vas o rutas), que tienen lugar de forma simultnea, y para
evitar interferencias entre ellas cada una ocurre en un
compartimento celular (en un orgnulo), es decir, las rutas
estn compartimentalizadas, y con ello la eficacia
enzimtica es ms eficaz.
Citoplasma:
Gluclisis, va de las
pentosas fosfato, sntesis
de triglicridos.
Mitocondria:
Ciclo de krebs, fosforilacin
oxidativa, b-oxidacin de
cidos grasos, formacin de
cuerpos citnicos.

Tipos de las rutas metablicas

1.
2.
3.
4.

Lineales
Ramificadas
Cclicas
Escalonada

1. Lineales: Cuando el sustrato de la primera reaccin

(sustrato inicial) es diferente al producto final de la ultima
reaccin.

2. Ramificadas: Vas ms complejas, que incluyen puntos de

ramificacin.

3. Cclica: Cuando el producto de la ltima reaccin es el

sustrato de la reaccin inicial.

4. Escalonado:
enzimtica.

se

trata

de

reacciones

de

activacin

Tipos de Procesos metablicos

Rutas dependiendo de la finalidad
1. Catabolismo
2. Anabolismo
3. Anfiblicas
CATABOLISMO
En la que se transforman
molculas orgnicas complejas
(polisacridos,
triglicridos,
protenas, etc.) en otras ms
sencillas,
orgnicas
o
inorgnicas, (pirvico, lctico,
amonaco,
CO2,
etc.),
con
ANABOLISMO
liberacin
de energa.
Es la sntesis
de molculas
orgnicas complejas a partir de
otras ms sencillas, es decir, se
crean nuevos enlaces, para ello
es necesario un aporte de
energa, el ATP.

Fases de los procesos metablicos

-Fase I: en esta fase las grandes molculas de los
elementos nutritivos se degradan hasta los principales
componentes.

- Fase II: los numerosos productos distintos de la Fase I son

recogidos y convertidos en un nmero pequeo de
molculas ms sencillas. As, las hexosas, las pentosas y la
glicerina se degradan en el azcar fosforilado de tres
tomos de carbono, el gliceraldehdo-3- fosfato y despus
hasta un compuesto sencillo de dos tomos de carbono, la
acetilcoenzima A. Los aminocidos diferentes son tambin
degradados a acetil-coenzima A, alfa-cetoglutarato
succinato, fumatato y oxalacetato.

- Fase III: Los productos formados en la fase II pasan a la

fase III que es el camino comn final en el cual se oxidan a
CO2 + H2O.

FASE I
Los polisacridos son degradados a
pentosas o hexosas, los lpidos a
cidos grasos, glicerina y otros
componentes, y las protenas a sus
veinte aminocidos constitutivos.
FASE II
Las hexosas, las pentosas y la
glicerina se degradan en el azcar
fosforilado de tres tomos de
carbono, el gliceraldehdo-3- fosfato y
despus hasta un compuesto sencillo
de dos tomos de carbono, la
acetilcoenzima A. Los aminocidos
diferentes son tambin degradados a
acetil-coenzima A, alfa-cetoglutarato
succinato, fumatato y oxalacetato.
FASE III
Se oxidan a CO2 + H2O.

Son rutas mixtas: catablicas y

anablicas.
Por ejemplo el Ciclo de Krebs que genera
energa y poder reductor y precursores
para la biosntesis.
La fase III, constituye un punto central o
de ruta para ambos, es por eso que se le
denomina Ruta Anfiblica por la doble
funcin:
Catablicamente para producir la
degradacin completa de las
pequeas molculas.

Caractersticas de los procesos

catablicos
Reacciones degradativas

Caractersticas de los procesos

anablicos
Reacciones de sntesis

Reacciones oxidativas

Reacciones de reduccin

Reacciones exergnicas

Reacciones endergnicas

Procesos convergentes

Procesos divergentes

Principales vas metablicas

CATABOLISMO
ANABOLISMO
ANFIBOLISMO
Gluclisis
Fotosntesis (plantas) Ciclo de Krebs
Fermentacin
Quimiosntesis
Respiracin
Sntesis
de
Catabolismo de lpidos
aminocidos
Catabolismo de los prtidos Sntesis de glcidos
Catabolismo de los aminocidos
Sntesis de lpidos
Sntesis
de
nucletidos
Gluconeognesis

Metabolismo de
carbohidratos

Metabolismo de lpidos

Metabolismo de
aminocidos

 Conjunto de reacciones qumicas que se

dan en un organismo, catalizadas por un
sistema enzimtico cuya finalidad es el
intercambio de materia y energa entre la
clula y el entorno.
Las finalidades del metabolismo son cuatro:

1. Obtencin de energa qumica de

molculas combustibles o de la luz solar
absorbida (esto ltimo en organismos
fotosintticos).

2. Conversin de principios nutritivos

exgenos en precursores de los
componentes macromoleculares.
3.Ensamblaje de estos materiales para formar
protenas, cidos nucleicos y otros
componentes celulares.
4. Formacin y degradacin de las
biomolculas necesarias para las funciones
especializadas de la clula.

 Existen dos principios importantes en el

matabolismo:
1.El metabolismo puede dividirse en dos
categoras principales
Catabolismo: procesos relacionados con la
degradacin de las sustancias complejas.
Anabolismo: procesos relativos
fundamentalmente a la sntesis de
molculas orgnicas complejas.

Nutrientes Productores de energa

Glcidos Grasa Protenas

Productos poco energticos
CO2, H2O, NH3
-Degradativo, oxidativo
-Genera energa, produce ATP
-Los productos finales e intermedios son materias
primas del anabolismo
-Genera desechos que se excretan al entorno.

Macromolculas Celulares Protenas ;Lpidos

Polisacridos ;ac nucleicos
Molculas Precursora
Aminocidos, azcares,
cido grasos bases
nitrogenadas.
-Sinttico, reductivo
-Utiliza energa, consume ATP
-Los productos finales son materias primas del
catabolismo

. Ambas categoras contemplan tres

niveles de complejidad:
Nivel 1: Interconversin de polmeros y
lpidos complejos con los
intermediarios monomricos
Nivel 2: Interconversin de los azcares
monomricos, los aminocidos y los
lpidos con los compuestos organismos
ms simples
2

Nivel 3: Degradacin final hasta

compuestos inorgnicos como CO2,
H2O y NH3, o la sntesis a partir de

Dentro del metabolismo se utilizan tres

trminos importantes:
1.- Metabolismo Intermedio
2.- Metabolismo Energtico
3.- Rutas Centrales.

Comprende todas las reacciones relacionadas

con el almacenamiento y la generacin de
energa metablica y con el empleo de esa
energa en la biosntesis de compuestos de bajo
peso molecular y compuestos de
almacenamiento de energa.
Las reacciones que ocurren en este tipo de
metabolismo no necesariamente estn
codificadas genticamente, ya que la
informacin necesaria para cada reaccin est
incluida en la estructura de la enzima que

Nivel 1: Interconvesin de polmeros y lpidos

complejos con los intermediarios monomricos
Nivel 2: Interconversin de los azcares
monomricos, los aminocidos y los lpidos con
los compuestos organismos ms simples
Nivel 3: Degradacin final hasta compuestos
inorgnicos como CO2, H2O y NH3, o la sntesis
a partir de ellos mismo.

NIVEL 1: Interconversin de Polmeros y Lpidos complejos en

Intermediarios Monomricos.

POLISACRIDOS

MONOSACRIDO
S

AC. GRASOS
LPIDOS
GLICEROL

PROTENAS

AC. NUCLEICOS

AMINOCIDOS

NUCLETIDOS

NIVEL 2: Interconversin unidades monomricas en molculas ms

sencillas.
NIVEL 3: Degradacin final hasta compuestos inorgnicos como CO2, H2O,
NH3
MONOSACRIDO
S

AC. GRASOS

AC. PIRVICO

NIVEL 2

AMINOCIDOS

CETOCIDOS

ACETIL CoA

NH3
Ciclo de Krebs
Fosforilacin Oxidativa
Ciclo de la Urea

NIVEL 3

Parte del metabolismo intermedio formado por

rutas que almacenan o generan energa
metablica.

 Comprende la oxidacin de molculas

combustibles y sntesis de molculas pequeas a
partir de los fragmentos resultantes.
Estn presentes en todos los organismos vivos.
Dependiendo del origen de las molculas
combustible, los organismos se dividen:
* Auttrofos
* Hetertrofos.

Dixido de
Carbono
Otros
nutrientes

I)ORGANISMO AUTTROFOS
FOTOSINTTICOS(plantas)
Polisacaridos,Lipidos,Prote
inas
AC.Nucleicos

CO2
Agua

II)ORGANISMO HETERTROFOS
QUIMIOSINTTICOS(animales)

a) Aerobios: Estos organismos tienen

al oxgeno molecular como ltimo
aceptor de electrones de sus
dadores electrnicos orgnicos

Aceptor
Procariotas (Ejemplos)
prod. reducido
NO3- NO2- N2 Pseudomonas, Bacillus
NO3- NO2-

Enterobacterias

SO42- S0 SH2 Sulfatorreductoras

(Desulfovibrio,
Desulfotomaculum)
fumarato
succinato

Enterobacterias

CO2 CH4

Arqueas metanognicas

Fe3+ Fe2+

Shewanella, Geobacter

b) Anaerobios: Los organismos

anaerobios utilizan la respracion
anaerobia, ms comnmente
llamada fermentacin .
Existen diferentes tipos de
fermentacin en funcin de la ruta
metablica utilizada por los
organismos anaerobios.
se dividen en

Crecen en ausencia total de oxgeno

porque necesitan un medio muy
reductor. Utilizan respiracin anaerobia
donde los aceptores finales de electrones
pueden ser generalmente SO42-,
Fumarato2- o CO32-.

Pueden crecer en presencia o ausencia de

oxgeno.
Utilizan al oxgeno como aceptor final de
electrones en la cadena respiratoria
cuando est disponible, y en ausencia de
oxgeno la energa la obtienen por
fermentacin o respiracin anaerobia
(generalmente el NO3- es un aceptor final
de electrones en las entero bacterias).

Que pueden vivir en presencia de oxgeno pero

no hacen uso de l en forma alguna.

I. Si la energa procede de radiaciones

(en los cuantos de una determinada
longitud de onda de la luz visible.
Fototrofas
1. fotolitotrofas: captan energa
lumnica en presencia de
sustancias inorgnicas.
2. fotoorganotrofas: captan
energa lumnica con
requerimiento de sustancias
orgnicas

II. Si la energa se desprende a partir de

molculas qumicas en reacciones
biolgicas de xido-reduccin.

1. Quimiolitotrofas: captacin de
energa qumica a partir de
sustancias inorgnicas
2. Quimiorganotrofas: captacin
de energa qumica a partir de
sustancias orgnicas.

BACTERIAS DEL AZUFRE(Desulfovibr

So
REACCIONES DE OXIDACIN

H2 S
S2O32- (tiosulfato)

H2SO4

Puede
desalcaliniz
ar suelos

H2S + 2 O2 SO42- +
2 H+
S2O32- + H2O SO42- + 2
H+

(Desulfovibrio)

BACTERIAS DEL NITRGENO

REACCIONES DE OXIDACIN
NH3 a nitritos (Nitroso
2 NH4+ + 3 O2 2 NO2- + 4H+
Nitritos a nitratos (Nitrobacter)
2 NO2- + O2 2
NO3Puede ser absorbido
por las plantas
(Nitrosomonas)

Nitrosomonas y Nitrobacter
comparten el mismo habitat.
Imprescindibles en el ciclo del

OTRAS BACTERIAS
DEL HIERRO (Thiobacillus ferrooxidans)
Fe 3+4 Fe 2+ 4 H+ + O2 4 Fe
+ 2 H 2O
DEL HIDRGENO
Fe

2+

oxidan
H2
tb.

COMPUESTOS
utilizan ORGNICOS
(como fuente de
C en vez de CO2)

3+

Son
AUTTRO
FOS
FACULTATI
VOS

SUB CICLOS DEL CARBONO

Ciclo biolgico:

Se refiere a un ciclo bsico:

CO2

Planta

- anabolismo -catabolismo

Herbvoro

Carnvoro

Ciclo biogeoqumico:
Este ciclo Regula la transferencia de carbono entre la atmsfera y la
litosfera.

Ciclo del nitrgeno

Componente
elemental de
las protenas,
cidos
nucleicos y
otras
biomolculas.

Aunque el nitrgeno
se halla en gran
cantidad en la
atmsfera, el
nitrgeno
atmosfrico no
puede ser utilizado
por la mayor parte

Fijacin natural del nitrgeno

La fijacin natural de nitrgeno se
realiza a travs de la refinada
especialidad de ciertas enzimas que se
encuentran en las bacterias
Estas bacterias viven en las races de
las plantas o a travs de la fuerza
bruta de las tormentas elctricas.
El 13% de toda la fijacin de nitrgeno,
realiza industrialmente.
Losse
hetertrofos
las utilizan como elementos

nutritivos y devuelven el nitrgeno al suelo

por medio de la excrecin o por putrefaccin
despus de su muerte.
Los vegetales obtienen nitratos y lo
transforman en amoniaco, aminocidos y

Estas partculas se van a la

atmsfera donde reaccionan
con el agua.

La contaminacin cae
de

a la tierra en
Los vehculos enuevo
las
precipitaciones pero
industrias
como
generan
lluvia cida. los
contaminantesprincipales
contaminantes son
como sulfato en
dixido
de azufre y dixido de
los procesos de
nitrgeno, que al
reaccionar
combustin
con el agua se

La lluvia cida
convierten
cae
en
trixido
y
corroe
los de azufre
y
edificios y
luego en cido
monumentos
y
le
sulfrico.
quita
productividad
al suelo.

La lluvia cida se forma cuando la humedad en el aire se combina con el xido

de nitrgeno NO2 y el dixido de azufre SO2 emitidos por fbricas, centrales
elctricas y vehculos que queman carbn o productos derivados del petrleo,
formando una solucin diluida de cido sulfrico H2SO4 y cido ntrico HN03.
La radiacin solar aumenta la velocidad de esta reaccin.

SO2;NO2
H2SO4;HN
O3

SO3+H2O -->
H2SO4
2NO2 + H20 -->
HNO3 + HNO2

Aporte enrgico que entra en la

biosfera en forma, principalmente
de
energa
luminosa
la
cual
proviene del sol.
Los organismos fotosintticos
capturan la energa solar
convirtindola en energa qumica.
Los hetertrofos utilizan estos
productos como precursores de
sus molculas estructurales y
como combustible.

Los organismos pueden ajustarse al tipo

y
cantidad
de
diversos
elementos
nutritivos asequibles en el entorno.
Fuentes de C y Ni son convertidas por
los enzimas en componentes que pueden
ser aceptados en las rutas metablicas.

Esta flexibilidad es posible

porque
todas
estas
fuentes
carbonadas son convertidas por
las enzimas del organismo en
componentes que pueden ser
aceptados como combustibles en
las rutas metablicas centrales.

E. coli

Gliclisis

Ciclo del cido

Ctrico

Ruta de nivel 2
Ruta de nivel 3
para la
acepta compuestos
degradacin de los
de carbono sencillos
hidratos de
oxidarlos a CO2
carbono
Metabolismo para
de Lpidos
Metabolismo de Aminocidos
Metabolismo de cidos Nucleicos
Rutas de nivel 2 que aportan combustible al
ciclo del cido ctrico.

Existen rutas diferenciadas para

biosntesis y degradacin:

Ambas rutas rara vez son simples inversiones una

de la otra, a pesar que empiezan y terminan con
los mismos metabolitos.
Pueden poseer intermediarios o reacciones
enzimticas comunes, pero se trata de
secuencias de reacciones reguladas por
mecanismo diferentes y enzimas diferentes.
Adems pueden ocurrir en compartimientos
celulares independientes.

La existencia de rutas diferentes es importante

por dos motivos:
1.- Para que una ruta se produzca en una
determinada reaccin debe ser exergnica en
esa direccin. Su ruta inversa ser endergnica.
2.- Existe la necesidad de controlar el flujo
de metabolitos en relacin con el estado
bioenergtico de una clula.

La regulacin se da a travs de:

1.- Actividad Enzimtica: Regulando la
concentracin del sustrato y el control
alostrico, capaz de cambiar la actividad
cataltica en respuesta a moduladores
inhibitorios o activatorios.
2.- Regulacin hormonal: Establecida por
los mensajes procedentes de otros rganos o
tejidos.
3.-Compartimentacin: Esto crea una
divisin del trabajo en el interior de una clula.
Lo cual aumenta la eficacia de la funcin

Sistemas vivos
Oxidaciones de sustratos
orgnicos
El oxgeno, que es el aceptor ltimo de
electrones para los organismo aerobios,
es un oxidante potente y tiene una fuerte
tendencia a atraer electrones quedando
reducido en el proceso.

TRABAJO Y ENERGA BIOLGICOS

Nutrientes del
ENERGA
entorno.quimiotrfics
Luz
Transformaciones qumicas en el interior de las clulas
solar.fotosinttico
s
Trabajo Biolgico

TRANSDUCCIONES
* Biosntesis (anabolismo)
DE ENERGA

* Trabajo mecnico (contraccin muscular)

Gradientes osmticos (transporte contra
gradiente)
AUMENTO DE
LA ENTROPA

* Trabajo elctrico (transmisin del impulso

nervioso) etc.

Productos Finales del

Matabolismo

1MTODO:
INTACTO

ORGANISMO

2
MTODO:
PERFUSIN
DEL
SISTEMA
VASCULAR DE RGANOS AISLADOS
La
perfusin
del
sistema
vascular de rganos aislados
tales como el hgado o el rin
con sangre o disolucin salina
tamponada que contenga un
precursor metablico, seguida
del anlisis qumico del fluido
obtenido en la perfusin ,
proporciona informacin valiosa
sobre las rutas metablicas.

3MTODO: DE LOS CORTES DE TEJIDOS

SUPERVIVIENTES Y METODOS MANOMETRICOS

Los tejidos se seccionan en finas

lonjas,
las
clulas
permanecen
intactas.
Los cortes se incuban en un medio
tamponado
con
un
metabolito
La
disminucin de
determinado.
la presin parcial
del oxgeno sobre
una suspensin de
cortes de tejido se
mide
con
un
dispositivo

4 METODO: DEFECTOS GENTICOS EN

EL METABOLISMO-MUTANTES
AUXTROFOS
Existe un defecto
determinada.

en la biosntesis de una enzima

Tales deficiencias genticas, si no son letales

provocan la acumulacin y excrecin del sustrato de
la enzima de defecto.
Inducir las mutaciones con la radiacin.
En un organismo normal que no ha sufrido mutacin,
el
intermediario
no
se
acumulara,
ya
que
experimentara
su mutante
ulterior(bacteria)
conversin
Auxtrofo.
Organismo
que metablica.
no crece en un medio mnimo pues necesita de
la presencia de algn factor de desarrollo.

5 MTODO: DE MARCAJE ISOTPICO

Se emplea un metabolito marcado de

modo
que
puedan
seguirse
sus
transformaciones metablicas.
Se
emplean
istopos
estables
o
radiactivos para marcar tomos de un
metabolito determinado.
Se emplea para determinar cual es la
velocidad de los procesos metablicos en
Colesterolintactos.
: acetato
los organismos
Glicina es precursor en sntesis
de purinas y porfirinas.

6METODO: SISTEMA EXENTO DE

CLULAS

El mtodo consiste en estudiar las

dispersiones de clulas o de tejidos
en las que la membrana se ha roto y

el
contenido
celular
se
ha
liberado.
Si la membrana celular se rompe con
homogenizacin suave en disolucin
isotnica
de
sacarosa,
los
rganos
subcelulares, tales como los ncleos, las
mitocondrias y los lisosomas, y las
estructuras supramoleculares tales como
las ribosas, permanecen intactas y pueden
aislarse por centrifugacin directa del
homogenado. Estas funciones pueden
ensayarse in vitro para determinar su