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TECNICAS SEPARATIVAS

Precipitacin.

lquido - lquido
Extraccin

Clasificacin:

en fase slida

Destilacin

Cromatografa
1

TECNICAS SEPARATIVAS
Estado II

Estado I
Proceso 1

A,B
Sistema Homogneo

A+B
Sistema Heterogneo

Transformaciones
fsicas y/o qumicas
Estado III
A/B
Dos fases separadas

Proceso 2
Mecnico, fsico o
raramente qumico

Extraccin a contracorriente

Fase inferior: 2 mL de solucin acuosa de Na2CO3 0.1 M

(saturada con 1-butanol) que contena 40 g de rojo fenol y


50 g de verde de bromocresol.
Fase superior de 1-butanol (saturada con Na2CO3 0.1 M ) 3

CROMATOGRAFIA
Definicin:
Es una tcnica capaz de separar compuestos
en base a diferencias de su afinidad por una
fase estacionaria y una mvil.

Sistema Cromatografico:

Fase
Estacionaria

Soluto
Fase
Mvil
4

CROMATOGRAFIA 2

CROMATOGRAFIA 3

CROMATOGRAFIA 4

CROMATOGRAFIA 5

CROMATOGRAFIA 6

Proceso Cromatogrfico (1)


Proceso fsico - qumico que rige la separacin:

-Adsorcin:

El soluto se adsorbe en la
superficie de las partculas
slidas de la fase estacionaria.
Es un fenmeno superficial,
aumentado con la formacin de
puentes de hidrgeno.
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Proceso Cromatogrfico (2)

- Particin o Reparto:

El soluto se equilibra entre el


lquido de la fase
estacionaria y la fase mvil,
por diferencia de solubilidad.
Hasta llegar a un equilibrio

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Proceso Cromatogrfico (3)

- Intercambio Inico:

Los aniones o cationes se


unen covalentemente a la
fase estacionaria slida

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Proceso Cromatogrfico (4)

- Exclusin Molecular,
Filtracin o Permeacin en
Gel:
No existen interacciones
entre la fase estacionaria y
el soluto. Se separa por
tamao de partcula.

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Fase

Fase

Tcnica

Proceso

estacionaria mvil cromatogrfica cromatogrfico


Adsorcin
Capa fina
Lquida
I. Inico
Columna
Slida
Esc. Molecular
Gas

Columna

Adsorcin

Papel
Lquida

Lquida

Capa fina
Columna

Gas

Particin

Columna
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Tiempo de retencin

tiempo de retencin ajustado = tr = tr - tm


retencin relativa = = tr2 / tr1
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Teora de los Platos Tericos (1)


Aunque la cromatografa es un proceso continuo, es posible
imaginar que la columna se divide en N segmentos, en cada
uno de los cuales se establece un equilibrio.
Si la longitud de la columna es L, la altura equivalente de
plato terico es:

A.E.P.T.
A.E.P.T. == LL // N
N
No es raro que una columna cromatografica tenga
varios miles de platos tericos.

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Teora de los Platos Tericos (2)

N=

t2r

16 t2r
w2

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Cromatografa en Papel y Capa Fina (TLC)

Sembrado:

Puntiforme

Banda

Forma de sembrado: Manual (capilares jeringas)

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Cualitativa
x x
Identificacin
Cuantitativa

x x
Pureza

x x
Ausencia

Preparativa

xx x x

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Simple
Desarrollo

Descendente
Ascendente
Circular
Horizontal

Comn
Mltiple Bidimensional
Continuo

a
x

a
Rf
b

a - distancia recorrida por el


analito.
b - distancia recorrida por el
frente
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Fase Estacionaria (1):


Particin: La fase estacionaria es lquida,
sobre un soporte slido inerte.
1 - Comn (Agua)
2 - Reversa o Inversa (parafina)

El papel contiene un 20 % de agua retenido aunque


nosotros lo notemos seco, esa es la fase estacionaria.

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Fase Estacionaria (2):

Adsorcin:

Silica Gel (Oxido de Silicio).


Alumina (Oxido de Aluminio).
Celulosa.
Fluorisil (Silicato de Magnesio).
Sulfato de Calcio.

Exclusin molecular:

Tierras de Diatomea
Sephedex (geles)

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Fase Estacionaria (3):


Intercambio Inico:

Acido sulfnico
RSO2- H+

Catinicas
Acido carbxilico
RCO2- H+

Resinas

In amonio cuaternario
Aninicas

R3NR+ OHGrupo amina


R3NH3+ OH23

Fase Mvil
Polaridad
Alta

Baja

COOH Acidos carboxlicos


Alcoholes
OH
Aminas
NH2
Tioles
SH
CHO Aldehidos
Cetonas
CO
COOR Esteres
OCH3 Eteres
Hidrocarburos No Saturados
Hidrocarburos Saturados

Saturacin de la Cmara
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Difusin de las manchas y formacin de colas:


Difusin longitudinal:

Consiste en la migracin del


soluto de regiones que esta
muy concentrado a otras donde
su concentracin es menor

Difusin de Eddy:

En los medios porosos unas


molculas tienen caminos
menos directos que otras, lo
que junto con la diferencia de
flujo del disolvente, favorece el
traslado o superposicin parcial
de zonas.

Equilibrio incompleto:

Por contacto incompleto de


fases en zonas localizadas.
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Teora Cintica de la Cromatografa (1)


Ecuacin de van Deemter:
A.E.P.T. = A +

B
+ Cv
v

donde:
A, B y C son constantes caractersticas de un sistema dado
v - velocidad
B
- difusin longitudinal
v
A - trayectorias mltiples
Cv - velocidad de equilibrio
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Teora Cintica de la
Cromatografa (2)
Existe una velocidad
ptima para la operacin
de cualquier columna, a
la cual la altura de plato
alcanza su valor mnimo

27

Cromatografa de capa fina

28

Revelado
Revelado Difiere de acuerdo al objetivo planteado
Tcnica de baado
Aplicacin
Tcnica de pulverizacin

Clasificacin de reveladores

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Cromatografa Cuantitativa
Estimacin del rea de la mancha (por medida, pesada)
Determinacin indirecta (raspado y valoracin)
Determinacin directa (Densitmetro)
Fuente de luz
Detector

Placa
cromatogrfica
30

icin

n
rci

Agua
Metanol
Etanol
Acetona
Piridina
Eter dietil.
Cloroformo
Benceno
Tetracloruro
de Carbono
Ciloexano
Eter de
petrleo

Tcnica

Ads
o

Compuestos
inicos
Acidos
Fenoles
Alcoholes
Aminas
Esteres
Aldhdos
Cetonas
Nitro deriv.
Halogeno deriv.
Hidrocarburos
alinfticos

Solventes

Pa r t

Compueato a
Polaridad
Cromatografiar

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CROMATOGRAFIA DE GASES (G.C.)

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Columnas (1)
Columnas empacadas
Son de acero inoxidable o vidrio, tienen un dimetro de 3 a 6
mm y una longitud de 1 a 5 m.
Se rellenan con la fase estacionaria slida o un soporte inerte
recubierto con la fase estacionaria

Columnas tubulares abiertas o capilares


Son de slice fundida, son mucho ms finas y mas largas que
las empacadas.
Tienen mayor resolucin y sensibilidad.
Tienen menor tiempo de anlisis y se maneja menor cantidad
de muestra
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Columnas (2)

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Gases Portadores

La eleccin de la fase mvil influye en el funcionamiento de la


columna y el detector. Los gases ms utilizados son: H2, He y
N2. Los tres producen una A.E.P.T. = 0.3, pero con gastos
distintos, mientras que el N2 10 cm/s, el H2 y el He pueden
utilizarse a un gasto mayor.

Por lo tanto se debe mantener el el flujo del gas portador a una


velocidad constante.

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Inyeccin de la muestra (1)


La muestra se inyecta con un jeringa a travs de un septo de
goma y se vaporiza. Generalmente 0.1 a 10 L.
Controlar la temperatura del horno de inyeccin.
Para columnas tubulares se tienen que manejar con puertos
de inyeccin ms elaborados pues no pueden manejarse
muestras tan grande.

La inyeccin dividida: Slo el 0.1 a 10 % del volumen de 0.1 a


2 L de muestra inyectada llega a la columna; el resto se
elimina.
36

Inyeccin de la muestra (2)

37

Detector de Conductividad Trmica (1)

38

Detector de Conductividad Trmica (2)


Consiste en un filamento caliente de tungsteno.
La resistencia elctrica del filamento aumenta con su
temperatura.

Cuando de la columna emerge un soluto, la conductividad


trmica de la corriente de gas disminuye, de modo que el
filamento se enfra, baja la resistencia y se observa un
cambio en la seal de salida.

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Detector de Conductividad Trmica (3)


1- Responde linealmente en cuarto rdenes de magnitud de
concentracin del soluto.
2- El H2 y He producen la mayor sensibilidad. Por ser los gases
con mayor conductividad trmica.
3- Para aumentar la sensibilidad:
a- Se eleva la corriente del filamento
b- Se reduce el gasto en el detector
c- Se reduce la temperatura en el cuerpo del detector
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Detector de Ionizacin de Llama (1)

41

Detector de Ionizacin de Llama (2)


1- La seal es proporcional al nmero de carbonos susceptibles
Los tomos de carbono de compuestos orgnicos pueden producir
radicales CH, los cuales a su vez producen iones CHO+ en la llama
CH + O
CHO+ + eSlo uno de cada 10 000 tomos produce un ion.
2- La respuesta es lineal en siete rdenes de magnitud de
concentracin del soluto.
3- La seal de fondo (valor de referencia) es muy estable.
4- La sensibilidad es mas de 100 veces mayor que la del
detector de conductividad trmica. Tambin es unas 2 veces
mayor cuando el gas portador es N2 que cuando es He.
No es sensible a CO2, H2O y NH3

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Otros detectores (1):


Detector de captura de electrones:
El N2 que entra al detector es ionizado por electrones de alta
energa (rayos ) que se emiten de una lmina delgada que
contiene 63Ni o 3H. Se produce una corriente hacia el nodo
constante. Cuando llega una molcula de analito con alta
afinidad electrnica, capturan algunos de los electrones y la
corriente hacia el nodo disminuye.
Es especialmente sensible a molculas que contienen
halgenos, grupos carbonilo conjugados, grupos nitrilo,
compuestos nitro y compuestos organometlicos.
No es sensible a hidrocarburos, alcoholes y cetonas.
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Otros detectores (2):


Detector fotomtrico de llama
Es un fotmetro de emisin ptica, til paara el anlisiss de
compuestos que contienen fsforo (536 nm) y azufre (394 nm).
Espectrofotmetros de masa
Espectrofotmetros de infrarrojo de transformada de Fourier

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Mtodos Analticos (1)


Anlisis Cualitativo
Comparar el tiempo de retencin del pico del problema
con el de un patrn.
Se agrega al problema una muestra conocida. Si el
tiempo de retencin es idntico al de un componente
del problema, el rea de ese pico aumentar.
Se debe identificar en dos o ms tipos de columnas.

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Mtodos Analticos (2)


Anlisis Cuantitativo
El rea de un pico es proporcional a la cantidad de ese
componente.
1- Los cromatgrafos modernos tienen integradores y
computadoras que calculan las reas
2- Planmetro.
3- Para un pico gaussiano, el producto de la altura por el ancho
medido a la altura media es igual al 84 % del rea total
4- Puede dibujarse un tringulo con dos lados tangentes a los
puntos de inflexin en cada lado del pico. El rea es 96 % del
rea de un pico gaussiano.
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Mtodos Analticos (3)


Cmo los detectores no responden de la misma manera a
todos los solutos, debe medirse un factor de respuesta
emprico F
Concentracin del soluto
rea del soluto
=F
Concentracin del patrn
rea del patrn

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CROMATOGAFIA LIQUIDA DE ALTA PERFORMANCE


(H.P.L.C.)

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Fase estacionaria

Todos los tipos de cromatografa pueden realizarse en el


modo de alta resolucin.

Un soporte comn es el partculas microporosas de slice


con dimetro de 5 a 10 m.

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Solventes

Los solventes utilizados deben ser muy puros.


Se puede utilizar un solo solvente (eleccin isocrtica).
Se puede cambiar un solo solvente por otro luego de un
tiempo apropiado.
Se puede cambiar continuamente de composicin del
solvente (eleccin por gradiente).
50

Bombas
La calidad de una bomba es determinada por el grado
de estabilidad y reproduciblilidad del flujo que genera

Se trabaja hasta 10 mL/min a presiones hasta de


40 Mpa (400 atm)

51

Vlvula de Inyeccin:

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Detector
Ultravioleta (1)

Celda de flujo:
0.5 cm de camino ptico
y 10 L de capacidad

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Detector Ultravioleta (2)


Es el detector ms utilizado, porque muchos solutos absorben
dicha radiacin y es bastante sensible a ella
El sistema ms simple emplea la emisin a 254 nm de una
lmpara de mercurio y deteccin a una sola longitud de onda.
Tambin se utilizan una lmpara de deuterio y un monocromador
para mediciones a longitud de onda variable.
El intervalo lineal comprende cinco rdenes de magnitud de
concentracin de soluto
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Detector de ndice de Refraccin


Es casi universal, responde a casi cualquier soluto.
La sensibilidad es unas mil veces menor que la de un detector
ultravioleta, y no es til en gradiente.

Detector Electroqumico
Es bastante selectivo, porque slo cientos analitos se oxidan o
se reducen con facilidad.
Pueden detectarse por oxidacin: fenoles, aminas aromticas,
perxido y mercaptanos. Y por reduccin: cetonas, aldehidos y
nitrilos.
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Otros detectores:

Detector
ultravioleta
ndice de refraccin
elctroqumico
fluorescencia
conductividad
espectrofotometra de masa
infrarrojo de tranformada de Fourier

Lmite de
deteccin
0.1 - 1
100 - 1000
0.01 - 1
0.001 - 0.01
0.5 - 1
0.1 - 1
1000

Util con
gradiente?
si
no
no
si
no
si
si

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